从针叶树营养体组织中提取高纯度DNA的方法

ＤＮＡ提取质量是影响ＤＮＡ分析实验结果的关键因素之一,保持不同样本间ＤＮＡ质量的一致性对实验结果的可靠性至关重要,这要求在材料选择和提取方法两个方面都要加以考虑。介绍了从针叶树营养体组织中提取高纯度ＤＮＡ的方法,提取的关键是选择合适的材料,不同于通常采用针叶进行ＤＮＡ提取,本实验选用尚未木质化的针叶树嫩梢进行ＤＮＡ提取,可以在较为简单的实验条件和实验程序下提取高质量ＤＮＡ。按照作者提供的提取方法,     

一种简单,快速植物RAPD分析DNA提取方法

随机引物扩增多态性ＤＮＡ(ＲＡＰＤ)分析实验中的植物总ＤＮＡ提取方法已有很多文献进行过详细阐述和讨论[1～ 5] ,同时 ,邹喻萍等[6] 对于濒危植物ＲＡＰＤ分析 ,尤其是植物ＤＮＡ难于提取的种类如银杉、矮壮丹、南川剑麻的总ＤＮＡ提取鉴定进行了较理想的改进 .但以往的ＤＮＡ提取一般费时较长、工序繁琐 .本实验采用普遍使用的ＣＴＡＢ法提取曼陀罗ＤＮＡ ,根据在实验中的摸索 ,对植物总ＤＮＡ的提取条件作了较大改进 .用此方法提取的ＤＮＡ能直接用于ＲＡＰＤ ,ＰＣＲ ,ＲＦＬＰ等分子生物学实验 .1　材料与方法1 .1　材料　曼陀罗 (Ｄ…     

一种上膜虫线粒体DNA提取的新方法

本文根据四膜虫线粒体ＤＮＡ（ｍＤＮＡ）对碱稳定这一特性，建立了一种更为简便的，能直接提取四膜虫线粒体ＤＮＡ的方法。该方法快速简便，重复性好，可用于游离细胞材料ｍｔＤＮＡ的提取。     

绵羊全血中DNA的微量提纯

介绍一种快速，简便地从绵羊冰冻全血中提取高纯度，大分子量ＤＮＡ，并适合边远地区实际室操作的ＤＮＡ提取方法。     

葡萄DNA提取与纯化方法的比较研究

以巨峰葡萄叶片为试材,在ＣＴＡＢ法,ＳＤＳ法及高盐低ｐＨ法基础上加以改进,应用５种方法对葡萄ＤＮＡ提取,纯化方法进行了比较研究。结果表明,高盐低ｐＨ法和区室化提取法是２种适合于葡萄属植物ＤＮＡ提取的方法。     

植物组织DNA的提取及纯化方法的研究

以小麦的幼芽和子房为材料,采用高等植物ＤＮＡ 简易快速提取法,对小麦组织ＤＮＡ提取及纯化中的若干问题做了探讨。研究表明：小麦幼芽是提取ＤＮＡ 的较为理想的材料;粗提ＤＮＡ 用ＲＮＡ 酶法进行纯化,其纯化效果较好;纯化的幼芽ＤＮＡ 稀释８ 倍即符合导入要求。     

质料DNA快速提取法

介绍一种质粒ＤＮＡ的快速提取方法，所分离出的ＤＮＡ纯度较邹，全部操作均在一只Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中进行，含质粒ＤＮＡ的上清液体中直接点样走琼脂糖凝胶电泳。此法操作简便，整个提取过程只需３０ｍｉｎ便可完成。     

质粒DNA快速提取法

介绍了一种质粒ＤＮＡ的快速提取方法，所分离出的ＤＮＡ纯度较好，全部操作均在一只Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中进行，含质粒ＤＮＡ的上清液可直接点样走琼脂糖凝胶电泳。此法操作简便，整个提取过程只需３０ｍｉｎ便可完成。     

Chelex~100提取果蝇非新鲜标本核基因组方法的建立

引言从大量材料中提取ＤＮＡ的经典方法包括分离和纯化的过程，繁琐的操作步骤会引起提取物的污染。Ｃｈｅｌｅｘ○Ｒ１００是一种弱的阳离子螯合树脂，可以螯合一些被认为在高温、低离子强度下催化ＤＮＡ降解的金属离子［１］，在提取ＤＮＡ过程中防止ＤＮＡ的降解。此外...     

一种家猪基因组PCR—RAPD反应体系的建立

以家猪血样为ＤＮＡ提取材料 ，建立了用改进方法提取ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ－ＲＡＰ 分析的最佳条件，获得稳定而理想的ＰＣＲ－ＲＡＰＤ扩增结果。     

高质量冬青卫矛DNA提取方法

为了从富含多酚和多糖的冬青卫矛叶片中分离高质量基因组DNA,比较了SDS法、CTAB法、高盐低pH值法及改良的CTAB法等提取DNA的方法,获得了一种以CTAB法为基础的分离高质量完整DNA的简便、快速方法。结果表明,使用该方法从冬青卫矛叶片中分离得到高纯度、高产量的DNA,A260/A280为1.84,1 g鲜叶的DNA产量为213.5μg,表明该方法可有效地从富含多酚和多糖的药用植物组织中提取高质量DNA。     

改良Zigenhagen法提取南方红豆杉总DNA

将Pierre和Haurence建立的Zigenhagen法加以适当改进,用以从富含多糖、酚类化合物和一些次生代谢产物的南方红豆杉叶片中提取总DNA,所获DNA样品的A260/A280比值在1.750-2.050范围内,琼脂糖凝胶电泳图谱显示每一样品均具有单一明亮的条带,并能成功地用于trnL-trnF非编码区序列扩增,为基于trnL-trnF非编码区序列数据的南方红豆杉分子系统发育研究打下基础。     

利用衍生DNA研制定量检测基因芯片

 为了建立基因芯片定量检测技术体系,在同一张芯片上完成不同浓度DNA的梯度测定,本研究以检测探针序列为基础,合成不同的衍生DNA作为标准曲线测定的探针序列.由于衍生序列与检测探针序列之间不改变碱基配对关系,同时具有相同的PCR扩增序列,使得标准品的浓度与测定值之间具有较好的相关性,从而解决了基因芯片定量测定中的标准曲线制作问题.结果显示,用衍生DNA序列作为标准DNA,其基因芯片测定值与浓度之间的相关性系数达到0.995以上,用此方法建立定量基因芯片测定的浓度与实际浓度一致.本研究为研制定量检测基因芯片提出了新的思路.     

环境DNA的提取和纯化方法的研究

比较了从土壤中提取DNA的二三种方法，结果发现TENS法对不同土壤都有较好的提取效果，提取的DNA片段长度均在23kbp以上，并且无明显的降解现象，提取效果明显好于SDS高盐提取法和裂解酶法．在DNA纯化过程中，分别比较了试剂盒法、透析袋法和琼脂糖酶法等纯化方法，发现使用琼脂糖酶法纯化粗提的DNA时回收率最高，获得的DNA的质量也很高，纯化DNA可用于酶切等分子生物学操作．     

克隆植物珠芽蓼基因组DNA的提取及RAPD鉴定

高原植物体内所含有的酚类、多糖、色素等次生代谢物质严重影响提取其基因组DNA的得率和纯度,是导致后续分子操作失败的主要原因.运用一种新改进的CTAB法对变色硅胶保存的高原植物珠芽蓼(Polygonumviviparum)叶片进行基因组DNA的提取,采取常温下沉淀DNA,增加洗涤沉淀的体积分数为70%乙醇用量和洗涤时间等措施,有效地去除了酚类、多糖、色素等物质的干扰,减少了褐化现象的发生.样品检测所得DNA片段均在48 kb左右,电泳谱带呈线状,无拖尾现象;紫外分光光度计检测,A260nm/A280nm值在1.7~1.9之间.RAPD扩增结果表明,此方法提取的DNA无论在质量和纯度上都较理想.     

乙型肝炎表面抗原基因在酵母中的表达——Ⅰ.HBsAg基因在酵母中的克隆

将乙型肝炎表面抗原基因组装进穿梭质粒,经E.coli扩增、鉴定后转入酵母细胞得到了转化子。经放射免疫分析,在此转化子中HBsAg未得到表达,可能是阅读框架不一致造成的。此外,我们对酵母DNA重组技术进行了摸索,并简化和改进了一些步骤。     

藏羚羊(AAC)_n微卫星富集文库构建与引物筛选

基于磁珠富集法,利用生物素标记的寡核苷酸探针(AAC)8从藏羚羊(Tibetan antelope)基因组酶切的300~1000bp片段中筛选微卫星位点,纯化的富集片段连接到pCR@2.1载体和转化到Trans5α感受态细胞.随机挑取180个白斑克隆,PCR检测到条带数大于或等于2的阳性克隆为56个,阳性率为31.1%.对阳性克隆测序,获得43条含微卫星座位的序列,微卫星重复次数在5~20次之间.舍弃不适宜设计引物的微卫星座位,试验设计并合成了20对微卫星引物;以3个样点(青海、新疆、西藏)的24个藏羚羊基因组为模板进行PCR扩增,获得8对可得到稳定扩增产物的微卫星引物,其中4对引物的扩增产物具有多态性,座位分别为AAC050、AAC056、AAC165和AAC477.上述引物可用于藏羚羊及近缘物种的遗传多样性、种群遗传结构等研究.     

PGPR芽孢杆菌B-1菌株的鉴定及其应用效果

从国外产品中分离得到一株PGPR菌株,编号为B-1;观察了该茵株的形态大小和茵落形态,进行了生理生化反应,通过热变性法测定其G+C(鸟嘌呤-胞嘧啶)摩尔分数为47.2%,鉴定该菌株为短芽孢杆菌(Bacillus brevis);通过小麦水培实验研究了该菌株对小麦株高和鲜重的影响,地上部鲜重较对照增加10.64%,株高较...     

环状芽孢杆菌C-2几丁酶基因在荧光假单胞菌中的表达

将已克隆到的环状芽孢杆菌（Bacillus circulans)C-2的几丁酶基因chi1片段克隆到质粒载体pUXBF5中，得到重组质粒pUXCH1，该重组质粒在大肠杆菌中可以表达产生具有生物活性的几丁酶并分泌到胞外。将pUXCH1分别利用感受态法和三亲本杂交法转化荧光假单胞菌（Psendomonas fluorescens），在含有卡拉霉素的金氏B平板上筛得转化子。但将转化子点种于几丁质平板上却不能产生水解圈，提取细胞内容物后用比色法也没有检测到有效的酶活性。该研究表明环状芽孢杆菌 的几个酶基因chi1已经被成功的整合到荧光假单胞菌的染色体上，但却没有表达或表达效率极低，这可能是由于荧光假单胞菌的表达系统不能正确有效的识别存在于该chi1几丁酶基因片段中的环状芽孢杆菌基因启动子而造成的。     

动力学问题的时域微分求积法

针对动力学问题的线性和非线性问题,提出了一种全新有效的方法——时域微分求积法.本方法直接针对动力学问题的控制微分方程,在时间域采用微分求积法(differential quadrature method),得到求解域中各时间节点处动力响应位移场为全部待定参数的方程组,只需一次求解该方程组即得到全部待定参数,进而得到各节点的动力响应位移场,再由高阶Lagrange插值得到全部求解域内的动力响应位移场,进而依据该响应位移场得到该动力学问题的响应周期.算例结果表明,本方法具有明显优于传统的数值方法(如newmark法和wilsonθ-法)的精度和计算效率,可作为一种有极好研究价值的求解动力学问题的新方法.