冷冻保存对人类精子膜完整性的影响

既往报道精子膜经历冷冻保存后的改变，但检测多局限在精子的一个部位，未能同时揭示单个精子头膜与尾膜冷冻损伤的状态，有些需荧光显微镜或透射电镜的方法，也难在基层实验室普遍应用。世界卫生组织（WHO）推荐Jeyendran的低渗肿胀试验（HOS）和Eliasson的伊红拒染（EY）法应用于对人类精子的评价。HOS检测精子尾膜完整性，EY反映精子头膜完整性。故此，结合这两种方法形成单一试验可以避免HOS或EY只显示精子一个部位膜状态的局限性。本研究建立HOS－EY结合试验探讨冷冻保存对人类精子头部和尾部膜完整性的影响。HOS－EY试验…     

非哺乳动物精子膜抗原的研究 Ⅰ.鲤鱼精子膜蛋白组分Ⅲ的分离纯化及其理化性质的研究

本文用离子型去垢剂脱氧胆酸钠溶解鲤鱼精子膜蛋白,制备性聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳进行分离,电泳洗脱结合葡聚糖凝胶柱层析纯化,得到对小白鼠具有良好抗生育效果的鲤鱼精子膜蛋白组分III,并对其理化性质进行了研究.     

一种牛精子膜蛋白的纯化及在生殖中的作用

牛精子经ψ=0.5%的NP-40洗脱后,先经伴刀豆凝集素Con A(Concanavalin A)亲和层析分离,经SDS-PAGE电泳,得到相对分子质量Mr分别为32×103,26×103,20×103的3种与Con A结合的糖蛋白CBG(Con A binding glycoprotein).再将亲和层析分离所得蛋白成分经葡聚糖凝胶(Sephadex G-100)层析柱进一步纯化,得到Mr为26×103的单一成分.将26×103 CBG免疫兔后制得抗血清,经PAP免疫组织化学染色发现:26×103的CBG抗原主要分布于牛精子的顶体区,同时鼠精子表面也有同样分布,说明26×103的CBG抗原具有种同保守性.后将26×102的CBG免疫雌鼠,发现其产仔率由对照组的(8.5士2.6)只(n=12)减少到(4.3士1. 8)只(n=24),经t检验(不配对,单尾),二者间差异极显著(p＜0.001).本实验结果表明:26×103的CBG在精卵结合中可能发挥重要作用,并有可能开发为人工避孕疫苗.     

精子膜抗原提取、纯化及SDS—PAGE分析

目的：分析正常生育男性精细胞膜抗原，以便进一步应用精子抗原于其抗体的检测。方法：1．精子膜抗原粗制方法，按“全国临床检验操作规程”(第二版，1998年，P398)描述的方法进行，即收集20名正常生育男性精子样品，用含0．5％NP—40的Tris—Hcl缓冲液抽提。2．粗提液蛋白含量测定采用紫外分光光度法。3．蛋白抗原纯化方法，采用冰冷乙醇沉淀法，以粗提液：冰冷95％乙醇(—20℃)＝1：9(v/v)混合，并按1／50容量加入饱和乙酸钠混匀，于—20℃放置48h。取出后于—10℃，1800g离心30分钟，弃上清，例放试管，沥干沉淀，—20℃保存备用。4、SDS—PAGE分析，步骤3所获样品，以NS溶解，通过紫外分光光度计测定含量，并调节到6mg/ml。SDS—PAGE分析条件的点样量25μl，分离胶17．5％，隔层胶5％，电泳缓冲液用甘氨酸—Tris，PH18．6，电压20v过夜，次日再150V4h。电泳后凝胶经考麦斯亮兰染色、乙酸—甲醇洗脱，直至显示清晰电泳图谱。结果：1、粗提液经紫外分光光度计测定，其原液含蛋白质为24mg/ml，最大吸收峰值280nm。2．纯化的精子膜抗原溶液经SDS—PAGE分析，图谱显示2个蛋白斑，与标准蛋白比较，其分子量一个为35—45KD，另一个为15—25KD；75—85KD处出现微量痕迹。结论：我们成功地进行了精子膜抗原提取、纯化及SDS—PAGE分析实验，结果有清晰记录，为进一步应用精子抗原检测精子抗体的研究提供物质基础。     

人类辅助生殖与人类精子优选技术

随着社会的发展、环境污染、心理压力等因素的影响，15％的育龄夫妇患有不育症，需要新技术助孕的夫妇越来越多。随着辅助生殖技术在各大医院的开展应用。对不育症的治疗取得了突破性的进步，对以前被认为“不可能”的情况，现在借助辅助生殖技术有了自己的孩子。在次技术中，精子优选技术是一项重要内容，即在体外通过人工方法对精液进行处理以提高受精成功率。我们在此将近几年人类辅助生殖与精子体外处理技术的情况作一综述。     

非哺乳动物精子膜抗原的研究 Ⅱ.鲤鱼精子膜蛋白不同组分对小白鼠抗生育效应的比较研究及其组分Ⅲ的免疫特性

本文比较了鲤鱼精子膜蛋白不同组分对小白鼠的抗生育效应.以抗生育效应良好的组分III的抗血清在体外作精子凝集试验,可观察到其抗血清在体外有凝集精子的作用.将其抗血清与相应抗原作双扩散试验,出现单一沉淀线,而全膜溶液的抗血清与其相应抗原则出现复合沉淀线.组织切片观察受抑孕的小白鼠的卵巢、输卵管等生殖系统组织没有发现异常的病理变化.     

非整倍体和人类生殖健康

非整倍体即染色体数目异常,发生于生殖细胞则可能导致不育不孕、自发流产和先天出生缺陷.精子非整倍体发生率为5%～7%,卵子非整倍体发生率为22%～90%;在早期自然流产中,非整倍体率高达50%.绝大多数临床上常见的非整倍体患儿的异常染色体来自卵子(母亲),而且母亲减数分裂I同源染色体不分离是除13和18号染色体以外的各种常见染色体非整倍体的主要原因.母亲的年龄是迄今唯一被证实的与生殖细胞非整倍体发生密切相关的流行病学因素,减数分裂遗传重组(频率和位点分布)异常可能是导致减数分裂I同源染色体不分离的主要细胞学和遗传学因素,减数分裂前最后一次DNA复制时cohesin复合体的加载及其之后的维持异常则可能是引起减数分裂染色体不分离的分子生物学因素.减数分裂遗传重组和cohesin复合体的加载均发生于女性胚胎发育的8～30周,而非整倍体卵子的形成多发生在35岁以上的女性,因此我们认为导致非整倍体卵子形成的"罪恶种子"早在35年前即已埋下,随着女性年龄增大,其体内保障染色体精确分离的保护机制如纺锤体聚合检验点被"磨损"削弱,而最终导致减数分裂时染色体分离异常.未来的研究应着重探讨遗传重组改变的原因、机理及如何导致减数分裂染色体不分离,了解卵母细胞中cohesin复合体、纺锤体聚合检验点的功能是否随女性年龄增大而减弱及其生物学机制,从而为有效防止非整倍体的发生、减少人类生殖相关非整倍体疾病的发生提供理论基础.     

加强合作,提升中国生殖免疫学国际地位

<正>由复旦大学附属妇产科医院及中国免疫学会共同发起,由复旦大学附属妇产科医院承办的2008年国际生殖免疫学大会于2008年8月28日～9月1日在上海市隆重举行。本次会议旨在促进国际间生殖免疫学学术交流,展示近年来我国生殖免疫领域     

免疫学研究

<正> 我们发现,正常小鼠在胃肠道线虫Nippostrongylus brasiliensis后蚴接种(PI)12天时即排除感染,而在Scid/Scid小鼠此感染至少持续到接种后47天。正常小鼠可患显著的肠肥大细胞症,而Scid/Scid小鼠则不患此症。若正常小鼠和Scid/Scid小鼠骨细胞培养基中含有适宜的巨细胞生长因子,则巨细胞可在其中生长。用ConA激活的正常小鼠脾细胞(CM)调整过的培养基,在体外,可辅助正常小鼠骨髓中祖细胞而产生巨细胞的生长;但用Scid/Scid CM调整的培养基,则不能有效地辅助此类巨细胞生长。由上可见,Scicl/Scicl小鼠尽管具有巨细胞的祖细胞,但由于其可能缺乏产生各类巨细胞生长因子所需的T细胞,而不发生肥大细胞病。     

我国发现两个新的人类白细胞抗原基因

北京血液中心目前发现了两个新的人类自细胞抗原（HLA）等位基因,并已获得世界卫生组织人类白细胞抗原命名委员会的正式命名。专家表示,这一发现可能有助于提高人类骨髓和器官移植的存活率。     

贝类免疫学研究新进展

综述了贝类免疫在细胞学和分子生物学研究方面取得的新进展,阐述了贝类血细胞中与免疫有关的结构和功能、血细胞的培养和凋亡;分别介绍了抗菌肽、蛋白酶抑制剂、类免疫球蛋白等贝类免疫应答因子的作用;论述了与免疫功能有关的基因研究,包括免疫基因的筛选、克隆和表达、基因的转移、重组和基因疫苗;初步探讨了贝类的免疫应答和免疫调节的分子生物学机理.为贝类的免疫生物学基础理论的研究提供资料.     

贝类免疫学研究新进展

综述了贝类免疫在细胞学和分子生物学研究方面取得的新进展．阐述了贝类血细胞中与免疫有关的结构和功能、血细胞的培养和凋亡；分别介绍了抗菌肽、蛋白酶抑制剂、类免疫球蛋白等贝类免疫应答因子的作用；论述了与免疫功能有关的基因研究．包括免疫基因的筛选、克隆和表达、基因的转移、重组和基因疫苗；初步探讨了贝类时免疫应答和免疫调节的分子生物学机理．为贝类的免疫生物学基础理论的研究提供资料．