农杆菌介导的大豆遗传转化

大豆遗传转化的方法很多，其中最常用的是农杆菌介导法。对近年来利用农杆菌法进行大豆遗传转化的外源基因种类、研究进展和存在问题做了全面阐述。     

根癌农杆菌介导的骏枣愈伤组织遗传转化体系的研究

采用农杆菌介导法,对骏枣愈伤组织遗传转化体系进行研究.结果表明：进行遗传转化的合适条件为：愈伤诱导培养基MS＋6-BA 0.4 mg/L＋2,4-D 1.2 mg/L;浸染之前对愈伤组织进行6d的避光培养可提高愈伤组织在共培养过程中的成活率;愈伤组织在OD600=0.4～0.6的农杆菌菌液中浸染10 min,农杆菌LBA4404的生长情况最好;在28℃黑暗条件下共培养放置16 d对转化最适宜;头孢霉素的抑菌浓度为250 mg/L;卡那霉素的筛选浓度为125 mg/L.经PCR检测,初步证明外源目的基因已整合到骏枣基因组中,初步实现了农杆菌介导的骏枣愈伤组织遗传转化,与以骏枣茎叶外植体建立的遗传转化体系相比,以骏枣愈伤组织为外植体共培养时间长,有利于转化.     

农杆菌介导的玉米遗传转化进展

本文回顾了根瘤农杆菌的玉米遗传转化的发展历史 .对各种影响农杆菌转化玉米效率的关键因子包括农杆菌的菌株与载体 ,受体材料的基因型和发育程度 ,培养环境 ,培养基成分等因素进行了综述 .对发展现状和未来趋势做了讨论 .     

农杆菌介导法的植物遗传转化

农杆菌介导的基因转化是一种使外源DNA转移到目的植株的天然系统,通过植物表达载体上DNA的加工与转移将外源DNA转运到植物细胞中。因其具有易操作、低费用、高效率、插入片段确定性好和转基因拷贝数低等独特优点,已经成为转基因策略中的首选方法,在植物的遗传转化中得到广泛应用。     

棉花黄萎病菌遗传转化载体构建和农杆菌转化

载体构建是建立真菌遗传转化体系的基础。本研究以pCAMBIA1305.1双元载体为基本骨架,构建棉花黄萎病菌遗传转化T-DNA质粒双元载体,通过限制性内切酶酶切、补平、连接以及去磷酸化等措施将pCAMBIA1305.1上Hygromycin抗性基因的CaMV 35S启动子替换成构巢曲霉的trpC启动子。经大肠杆菌转化后对转化子进行酶切验证,并将新构建的载体1305-3分别转入农杆菌菌株LBA4404和EHA105。为农杆菌介导的黄萎病菌遗传转化体系的建立和优化提供了存在于不同农杆菌菌株中的供试载体。     

农杆菌介导遗传转化中辅助处理方法的改良

在农杆菌菌液与植物材料混合培养时辅以Ｔｗｅｅｎ２０和负压处理。用ｇｕｓ报告基因的瞬间表达作为指标,与仅用Ｔｗｅｅｎ２０或仅用负压处理的样本进行了比较研究。实验结果表明：适当的负压处理可提高转化频率,而过度的负压处理会对材料造成较大的伤害,从而降低其成活率,如同时使用Ｔｗｅｅｎ２０可以减轻这种伤害。     

农杆菌介导GNA基因对水稻的遗传转化

在ｐＣＡＭＢＩＡ３３００质粒中插入带有ＲＳｓ－１启动子的ＧＮＡ基因,并利用农杆菌介导的遗传转化将其导入水稻的微不定芽受体,得到了再生植株。ＰＣＲ,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ的检测结果初步证明ＧＮＡ基因已经整合到水稻的基因组中并得到表达。     

农杆菌介导的真菌遗传转化及其应用

农杆菌介导的真菌遗传转化具有效率高,成本低,操作方便和重复性好等特点,大大提高了真菌的转化效率,增加了转化子的稳定性,为研究真菌基因功能,分离克隆相关基因提供了新的途径。     

水仙胚性愈伤的获得及农杆菌介导GUS基因的遗传转化

用正交实验设计对前期影响水仙胚性愈伤诱导和分化关联性大的因素进行综合分析,结果显示,培养基类型、激素及处理方式、不同添加物等对水仙外植体胚性愈伤诱导及分化的影响是基于培养基的多因素协同效应。水仙适宜胚性愈伤诱导培养基是:改良MB+NAA(0.2 mg/L)+6BA(2 mg/L)+ABA (2 mg/L)+AgNO3(5 mg/L);适宜的分化培养基是：改良N6+2,4D(0.5 mg/L)+6BA(2.5 mg/L)+NAA(0.2 mg/L)+ABA(2 mg/L)。实验中观察到水仙体细胞胚的发生,在胚性愈伤诱导和分化体系优化基础上实现农杆菌介导GUS基因转化,稳定表达抗性愈伤GUS染色显示最佳胚性愈伤诱导培养基能促进水仙外植体感受态的形成,有利于外源基因的接受,PCR检测表明实验中获得3株转GUS基因阳性植株。     

提高农杆菌介导小麦遗传转化效率的几个因素

利用gua基因的瞬时表达研究了农杆菌介导的小麦遗传转化,探讨了影响转化效率的几个因素．结果发现,当转化时茵液浓度的OD600为1．0、侵染时间为1h、超声波处理30s、共培养期间使用抗氧化剂以及用胚性愈伤组织作为外植体等,均可使转化效率得到明显提高、综合使用这些优化的转化条件,可使小麦的瞬时转化效率提高3倍多．     

根癌农杆菌介导的异角状拟盘多毛孢菌转化系统研究

以携带潮霉素B磷酸转移酶抗性基因(hph)的pBHt1作为转化载体,根癌农杆菌AGL-1作为转化介体,实施转化异角状拟盘多毛孢菌。研究发现,异角状拟盘多毛孢菌的最优转化体系为:异角状拟盘多毛孢菌分生孢子悬浮液浓度为1×106个/mL,根癌农杆菌OD600为0.3,共培养时间48 h,共培养温度为25℃,诱导培养基中乙酰丁香酮(AS)浓度为200μmol/L,选择培养基添加250μg/mL潮霉素B、250μg/mL头孢噻肟钠。1×106个异角状拟盘多毛孢菌分生孢子可以产生200～300个转化子,随机挑选10个转化子进行PCR检测,均能扩增出预期条带,且在不含潮霉素B的PDA培养基平板上转化子连续培养5代后,hph基因仍能稳定遗传,这表明T-DNA已经插入到异角状拟盘多毛孢菌的基因组中。此次建立的异角状拟盘多毛孢菌的转化体系可为该病菌的功能基因研究和寄主与病原菌的互作研究提供有效的工具。     

根癌农杆菌介导的木霉插入转化及其应用

根癌农杆菌介导的遗传转化法(ATMT)已广泛地应用于真菌的转化研究,该方法具有操作简单、转化效率高和转化子遗传稳定等特点。木霉作为土传植物病原菌的重要生防真菌,对其生防分子作用机制方面的研究也越来越受到关注,目前所面临的问题是如何基因突变和基因替换。ATMT法为木霉(Trichodermaspp.)的分子生物学研究提供了一个强有力的工具,在木霉的插入突变、遗传转化以及基因标记和克隆方面起着重要的作用。本文综述了根癌农杆菌介导木霉遗传转化的原理、特点、转化方法和应用,并且对有关发展趋势进行了展望。     

根癌农杆菌介导大麦Mlo反义基因转化小麦

应用含有大麦Mlo反义基因表达载体的根癌农杆菌菌株Agl Ⅰ，对3种基因型小麦(核生3号、烟优361、扬麦158)的愈伤组织进行了转化．从其中2种基因型获得23株转基因植株，有2株是白化苗，转化频率分别为1．9％(核生3号)和2．8％(扬麦158)．PCR及Southem分析表明，外源基因已整合进植物基因组．实验结果表明，筛选压力的存在对转基因植株的获得至关重要，在无筛选压力下未获得转基因植株．7棵转基因植株移栽至大田后正常结实．     

影响农杆菌介导的辣椒基因转化因素的研究

试验设置农杆菌类型、辣椒基因型、外植体、vir基因活化培养基、方法5个因素，研究了利用根癌农杆菌介导法辣椒遗传转化的效果。以获得Km抗性芽外植体频率为指标，发现农杆菌菌株类型和辣椒基因型对转化效率都有较大影响，直接影响着转化效率。采用预培养2d的子叶外植体，用农杆菌侵染5～7min，可获得最高的转化效率。     

乙酰丁香酮对根癌农杆菌介导的甘薯遗传转化的影响

研究了乙酰丁香酮 (AS)对根癌农杆菌介导的甘薯离体遗传转化的影响 .结果表明 :①菌液中加入AS不利于遗传转化 ;②AS的作用效果与培养基的 pH值有关 .培养基的 pH值为 5 8时 ,加入AS不能提高转化频率 ;而pH值为 5 2时 ,加入AS则能显著提高转化频率 ,特别是AS浓度为 2 5mg·L-1时 ,Kanr 芽获得率提高到 35 7%;③茎段外植体切口两端各滴加 2 μL 2 0 0 μmolL-1的AS ,可使Kanr 芽获得率达 13 3%.     

根癌农杆菌法转化烟草的条件探索

 利用含有四环素阻遏蛋白,具有卡娜霉素抗性的烟草种子为实验材料,采用根癌农杆菌介导转化中的叶圆盘法,将外源基因导入烟草愈伤组织,建成可诱导表达细胞质和细胞核CaM/CaM结合多肽的转基因烟草体系.在获得转基因植物的过程中,通过比较影响根癌农杆菌转化频率的各种因素,表明植物材料的选择和培养,农杆菌的培养和稀释,植物材料与农杆菌共培养的程度及转基因植株的筛选条件是影响农杆菌转化效率的重要因素.     

农杆菌介导抗虫基因转化芥菜型油菜的研究

用农杆菌介导法对芥菜型油菜进行了转化，并对影响根癌农杆菌转化效率的因素进行了研究，建立了以油菜子叶柄为外植体的转化体系．用携带蝎毒素(BmKITs)和几丁质酶(chi)双价基因的农杆菌转化油菜，共获得了抗卡那霉素的再生苗153株，移栽成活21株．对成活植株进行了PCR分子检测，证实有外源基因的整合．转基因植株形态正常，开花、结实．     

AgNO3对根癌农杆菌介导的甘薯遗传转化的影响

以甘薯优良栽培品种“南薯88”为试材,研究了AgNO3对根癌农杆菌介导的甘薯遗传转化的影响。结果表明,在预培养的培养基附加AgNO3不利于进行转化,而在共培养培养基中附加AgNO3则对转化有促进作用。当培养基中AgNO3的浓度为6mg/L时,卡那霉素抗性芽的获得率达最大值,为27．5％。文中还对AgNO3在甘薯遗传转化中的作用方式及在建立较简便、高效的甘薯遗传转化系统中的应用进行了讨论。