番茄青枯病拮抗菌的筛选及防治效果

为了筛选出具有抑制青枯雷尔氏菌作用的拮抗菌,采用形态指标、生理生化特征以及16S rRNA序列分析等方法对菌株进行了研究,并且通过阴性对照（CK）、番茄青枯病菌阳性胁迫处理（RB）和拮抗菌K+番茄青枯病菌处理（KRB）3个盆栽番茄土壤样品进行了防卫反应基因的表达研究.结果表明,拮抗菌K5菌落呈乳白色且表面光滑,经革兰氏染色为阳性,初步确定为芽孢杆菌,通过分子鉴定后确定为贝莱斯芽孢杆菌;番茄青枯病的盆栽防治效果达到23.20%,K5菌株在接种48 h后能诱导番茄根部抗病基因表达,CTR、ETR基因的表达量提高,表明K5通过植物抗病相关基因的表达,能诱导植物产生抗病性,并能有效地抑制青枯病菌的繁殖,从而达到防治青枯病的作用.     

生防菌ANTI-8098A对青枯雷尔氏菌生物测定方法的研究

试验利用番茄组培苗对青枯雷尔氏菌接菌方法进行了比较 ,并进行了生防菌 ANTI- 80 98A对青枯雷尔氏菌体外抑制作用的生物测定。试验结果表明 ,灌根法接菌 6d后的平均死亡率为 84.40 % ,剪叶法接菌6d后番茄组培苗的平均死亡率为 98.34% ,剪叶法接种的番茄组培苗的发病速度高于灌根法。青枯雷尔氏菌浓度较低 (0 .1× 1 0 8以下 )时 ,灌根法接菌 6d后番茄组培苗的平均死亡率为 61 .5% ,剪叶法接菌 6d后番茄组培苗的平均死亡率为 1 0 0 .0 % ,剪叶法引起的发病率更高。采用剪叶法进行生防菌 ANTI- 80 98A对青枯雷尔氏菌体外抑制作用的结果表明 ,1 0 0和 2 0 0倍菌液处理组的番茄组培苗不发病 ,防效达 1 0 0 % ;30 0倍番茄组培苗第 7d发病率为 1 5% ,防效达 85%。     

静电场和电磁场对桉树青枯菌的抑制作用

采用自制的高压静电场装置和超高频电磁场装置系统分别对青枯菌(Ralstonia solanacearum)菌悬液进行处理,然后用平板涂布法测定细菌的数量.结果表明:高压静电场处理20min细菌总数比处理前不减反增,但处理40min对细菌抑制率可达84%;超高频电磁场处理20min对青枯菌的抑制率达84%,处理40min时的抑制率达95%.经高压静电场处理的桉苗接种青枯菌,其过氧化物酶活性比对照增加最高可达70%.结果表明:高压静电场和超高频电磁场对青枯菌处理一定时间都会对其菌量增殖产生明显的抑制作用;高压静电场处理还能明显提高桉树苗过氧化物酶的活性,从而有利于植株增强抗病能力.     

青枯雷尔氏菌HPLC分析中色谱分离条件的研究

研究了在青枯雷尔氏菌的高效离子交换色谱(HPLC)分析中,不同色谱分离条件对分离效果的影响.建立了在室温下分离青枯雷尔氏菌的最佳色谱条件:采用Toyopearl SuperQ-650C强阴离子交换树脂、0.02mol/L哌嗪-HCl缓冲液(pH 8.0)、洗脱盐浓度为1 mol/L NaCl、洗脱梯度0~75%/30 min、流速1 mL/min.在该色谱条件下,可获得良好分离的3个青枯雷尔氏菌色谱峰.     

拮抗烟草青枯病菌的烟草内生细菌系统多样性及趋化性分析

 从来自3个烤烟品种NC297、红大、K326的600株内生细菌中,以烟草青枯病菌(Ralstonia solanacearum)为靶标,共筛出55株拮抗菌,其对烟草青枯病菌的抑菌圈直径在1~16 mm之间.对这55株拮抗性内生细菌的16S rRNA基因序列进行RFLP分析共产生6种带型.根据RFLP带型选取16株进行16S rRNA基因序列测定和系统发育分析.结果表明这55株拮抗性内生细菌属于Firmicutes和Proteobacteria两大类群的6个种:Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum,Bacillus methylotrophicus,Bacillus tequilensis,Brevibacillus parabrevis,Brevibacillus brevis和Pseudomonas aeruginosa.利用cheA基因检测方法和平板检测方法共筛选到3种具有趋化性的拮抗性内生细菌:Brevibacillus parabrevis,Brevibacillus brevis和Pseudomonas aeruginosa.     

蜡状芽孢杆菌对番茄青枯雷尔氏菌致病性的影响

青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）从其致病性上可分为能使植株发病的强致病力菌株和不能使植株发病的弱致病力菌株．利用蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）与致病性稳定的青枯雷尔氏菌强致病力菌株进行共培养，处理后的青枯雷尔氏菌在TTC平板上表现为弱毒株的菌落特征，出现了致弱现象．经过16S rDNA基因序列测定，证明了用蜡状芽孢杆菌处理前后的菌株为青枯雷尔氏菌，并非是其它的污染菌株，通过回接番茄盆栽苗发现致弱前的青枯雷尔氏菌能有效引起番茄发生青枯病，而致弱后的菌株丧失致病力．不能引起番茄发病，     

茄青枯假单胞菌T2015致病相关基因突变体的构建

分离自花生植株的茄青枯假单胞菌(Ralstonia solanacearum)T2015的Tn5-lacZ插入突变体T2135是极性突变体.采用现代分子生物学实验技术,首先构建了同一操纵子中ORF2的表达质粒pGX6191,并进行生物学验证,然后采用三亲本结合技术导入极性突变体T2135,得到茄青枯假单胞菌T2015中与致病相关基因ORF3的突变体T2135/R.     

植物不同青枯菌生化型的鉴定

将供试9个青枯菌菌株在TTC选择性培养基平板上纯化,移植于扩繁培养基上培养,根据Hayward划分青枯菌生化型的标准,将其分别接种在含糖、含醇化合物的鉴定培养基上,观察其对3种双糖和3种己醇的氧化利用能力从而对其归类划型.由于不同生化型的青枯菌对3种糖、3种醇化合物的利用情况不同,因而可根据培养基颜色(pH)发生的变化来确定供试菌株属于哪一个生化型.结果表明:9个供试青枯菌菌株分别属于5个生化型,即生化型Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ.其中大部分属于生化型Ⅰ,它们是DA1、DB1、DC1、DD1,占44.44%;UW551和P041属于生化型Ⅱ,占22.22%;T032属于生化型Ⅲ,ZO4属于生化型Ⅳ,M5属于生化型Ⅴ,各占11.11%.     

分光光度计法测定不同分离源青枯雷尔氏菌菌液浓度

[目的]准确测定青枯雷尔氏菌的菌液浓度。 [方法]选用胰蛋白胨大豆肉汤培养基和生理盐水为稀释液稀释青枯雷 尔氏菌 ＲｓＡ(烟草分离源)和 ＲｓＢ(番茄分离源)菌悬液,利用血球计数板计数法测定菌悬液浓度,并利用分光光度计法测定菌 悬液在 ６００ ｎｍ 处的吸光度值,建立青枯雷尔氏菌菌悬液浓度与吸光度值间的线性关系。 [结果]线性回归方程表明:胰蛋白 胨大豆肉汤培养基和生理盐水作为稀释液测定菌悬液浓度结果差异无统计学意义(Ｐ>０.０５),但 ＲｓＡ 和 ＲｓＢ 菌悬液的吸光度 值具有差异,回归方程分别为 ｙ ＝ ６.５７８ ４ｘ＋０.１５８ ２８(ｒ２ ＝ ０.９９８ ９９)和 ｙ ＝ ５.１６２ ７ｘ－０.１２５ ８２( ｒ２ ＝ ０.９９８ ９９),回归方程间斜率和 截距均差异有统计学意义(Ｐ<０.０１)。 [结论]建立的青枯雷尔氏菌的菌液浓度标准曲线可用于测定吸光度值后快速计算不同 分离源青枯雷尔氏菌菌悬液浓度,且无需将菌悬液培养基置换为生理盐水进行吸光度测定,具有一定的便捷性和实用性。     

青枯雷尔氏菌致病力的番茄组培苗鉴定方法研究

本文以番茄组培苗为材料 ,用剪叶法、灌根法接种不同浓度的青枯雷尔氏菌 ,观察组培苗的发病率 ,尝试建立青枯病菌致病力的组培苗鉴定方法。结果表明 ,接种青枯病菌 4d后 ,即有组培苗出现青枯病症状 ;在试验的浓度范围内 (8.0× 1 0 6- 5.2× 1 0 9cfu/ ml) ,青枯病菌浓度的不同对病程的潜伏期有一定影响 ,浓度越低潜伏期越长 ,但对发病率影响不明显 ,接种后 8d,除了浓度为 8.0× 1 0 6cfu/ ml的青枯病菌灌根法处理外 ,其它处理组组培苗的发病率都达到 1 0 0 % ;剪叶法接种青枯病菌 ,潜伏期比灌根法的长 ,但潜伏期之后的病症发展速度比灌根法的快。此外 ,还对将组培苗用于青枯病菌致病力鉴定的优点进行了讨论。     

抑制姜瘟青枯假单胞菌的木霉菌株的筛选及其抑菌机理

筛选得到一株可有效抑制姜瘟青枯假单胞菌的木霉菌株SMF2(Tricoderma spp SMF2)，证实其胞外分泌的抗生素--木霉素是抑制姜瘟菌生长的主要物质，该物质对热稳定，固体发酵是培养木霉制剂的有效方法，并对培养基的组成、培养条件进行了初步优化。     

桑青枯病病原G12-9内切葡聚糖酶基因的克隆和分类

桑青枯病是一种土传性细菌病害,从广东省桑园发生青枯病的桑树根部分离得到1株病原菌G12-9;经鉴定确定该菌为青枯菌（Ralstonia solanacearum）,该病原菌在TZC固体培养基上呈圆形及不规则圆形,菌落中央呈现淡红色,革兰氏染色成阴性。对G12-9分离株内切葡聚糖酶基因的克隆、序列测定及聚类分析结果表明,桑青枯菌G12-9内切葡聚糖酶属于糖基水解酶家族12。青枯菌最重要的致病性分泌系统为Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型分泌系统,内切葡聚糖酶属于细菌Ⅱ型分泌系统,内切葡聚糖酶对于青枯菌的定植及寄主植物的致病性有着非常重要的作用,明确该酶在糖基水解酶家族的分类地位对桑青枯病的防治具有重要意义。     

马桑提取物的抑菌作用和抑菌机理的初步研究

马桑（Coriariasinica Maxim）为双子叶植物纲木兰亚纲马桑科（Coriariaceae）马桑属（Coriaria Linn）植物，多年生落叶有毒小乔木或灌木，野生．生长于山坡或山沟中．产于温带，广泛分布于河南、四川、贵州、云南等地．据研究报道，马桑全株有毒，其提取物对多种咀嚼式害虫具有明显的拒食和胃毒作用，马桑叶粉的30倍水浸液对马铃薯晚疫病孢子发芽有抑制作用；30倍水煮液对棉苗轮纹斑病菌和樱顶病菌袍子发芽也有抑制作用．     

青枯病生物杀菌剂天禾2000菌株筛选和分类研究

从福建福州、莆田、将乐、宁化、宁德、泉州等8个市县青枯病流行病区的烟草、番茄、马铃薯、花生、生姜、甜椒、茄子田间采集病株根系土壤和植株,进行分离培养,获得土壤微生物15000多株。初筛获得128个菌株对青枯病有不同程度抗性,部分菌株对烟草、番茄青枯病菌有较好的拮抗作用。进一步通过对青枯病菌抑菌力评测,稳定性测定筛选获得3株对供试指示菌有较强抑制作用的拮抗菌株,经形态特征、培养特性和生理生化性状的测定,这3株芽孢杆菌被鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),代号为2000,2001,2002。抑菌谱的测定结果表明,这3株枯草芽孢杆菌为广谱的拮抗菌株。     

Effective removal of microcystins using carbon nanotubes embedded with bacteria

Adsorption of microcystins (MCs) by carbon nanotubes (CNTs) and clay materials was studied. Compared with various clays tested, CNTs showed a much stronger ability to adsorb MC-RR and LR that were two typical types of microcystins found in China. At initial 21.0 mg/L of MC-RR and 9.5 mg/L of MC-LR in solution, the adsorptiona mounts of MC-RR and LR by CNTs were 14.8 and 6.7 mg/gthat were about five times higher than those by the clay materials of sepiolite, kaolinite and talc, et~ In the presence of CNTs and the bacterial Ralstonia solanacearum that was firstly isolated and used for the biodegradation of MCs by the authors, a remarkable removal of MCs from water were observed. The mechanism was that CNTs could absorb large amount of both MCs and the embedded R. solanacearum so that, even when diluted by a large amount of water, the concentrations of both organic pollutants and the added bacteria could be largely enhanced on the surface of CNTs where a concerted biodegradation reaction was effectively conducted. This finding could be important for the further development of practical techniques to eliminate MCs from polluted drinking waters.     

抗番茄青枯病内生拮抗细菌的筛选及室内防效测定

从健康番茄体内分离到了93株内生细菌。采用含菌平板抑菌圈测定法，筛选出了3株对番茄青枯菌具有较强拮抗力的细菌菌株ZB—1、ZB-2和ZB-6。温室盆栽防病试验结果表明，内生细菌菌株ZB-6对植株进行预处理后，番茄青枯病防病效果可达63—65％，说明该菌株对番茄青枯病发生具有较好预防效果。