抗蛔虫人源单链抗体库的构建及鉴定

目的:构建抗蛔虫人源单链抗体库,从中筛选建抗蛔虫人源特异性单链抗体.方法:分离10个患蛔虫病人的淋巴细胞,提取总RNA反转录为cDNA,PCR扩增人抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,采用SOE-PCR法将VH和VL片段随机拼接成scFv片段,并克隆入噬菌粒载体pCANTAB5E中,构建噬菌体单链抗体库.结果:初...     

从癌性腹水中亲和层析提纯AFP并制备相应的单克隆抗体

从两例确诊为肝癌的患者腹水中以亲和层析法提取ＡＦＰ抗原，并制备相应的单克隆抗体。实验表明，此单抗对原发性肝癌具有较好的特异性和捕捉能力。     

梅毒螺旋体多表位融合抗原的表达及免疫性研究

设计梅毒螺旋体多表位融合抗原,该融合抗原含外膜蛋白Tp0453,Tp0435,Tp1038,Tp0868和Tp0965重要抗原表位,人工合成该多表位融合抗原基因,转入大肠杆菌中IPTG诱导表达,镍柱亲合层析纯化.利用多表位融合抗原检测人血清中梅毒特异性抗体,梅毒患者样本组与非患者样本组检测结果存在极其显著性差异,说明多表位融合抗原可被梅毒抗体特异性识别,有较好免疫反应性,可作为梅毒诊断试剂新抗原.利用多表位融合抗原免疫新西兰兔,兔血清中可持续检测到高滴度梅毒抗体,显示该多表位融合抗原有较强免疫原性,是梅毒基因工程疫苗候选蛋白.     

斑马鱼心脏标记基因pitx2的多克隆抗体的制备

pitx2基因是一类bieoid相关的同源异型框因子成员,介导心脏左右不对称发育和内脏器官的偏侧化.pitx2基因位于Nodal信号途径的下游,直接由Nodal信号分子控制.用PCR技术扩增斑马鱼pitx2基因的部分编码区,并将其插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,经过酶切和测序鉴定后,将重组质粒(pGEX-4T-1-pitx2)转入B121感受态细胞,通过IPTG诱导表达融合蛋白.用GST珠亲和纯化,将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体.获得了pitx2原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗pitx2多克隆抗体.提取斑马鱼不同器官和组织蛋白,用自制的多克隆抗体检测pitx2基因在斑马鱼中的表达情况,发现pitx2基因特异性地在心脏、脑、肌肉、小肠和肝脏表达,尤其在心脏中有很高的表达,表明制备的抗体特异性非常好.     

143例系统性红斑狼疮的自身抗体和常规检查分析

系统性红斑狼疮（SLE）是一种常见的自身免疫性疾病．研究探讨自身抗体及常规实验室检查对SLE的诊断及临床意义．间接免疫荧光法检测ANA抗体和抗ds-DNA抗体,斑点法检测抗ENA抗体,透射比浊法检测免疫蛋白,生化检查方法按试剂说明．143例SLE患者中,女性121例,ANA、dS-DNA、SS-A、n-RNP／Sm、Sm、SS-B阳性率分别为97．6％、57．8％、52．4％、48．9％、21．5％、11．7％,未检出Scl-70和Jo-1抗体．SLE患者血清抗ds-DNA抗体与抗Sm阳性有显著差别（P〈0．05）．在143例SLE患者中,IgG（35．66％）、IgA（36．36％）、RF（29．37％）升高,C3（85．3％）、C4（68．5％）降低．常规检查中,血红蛋白量（71．33％）、血钾（34．27％）、ALB（89．51％）降低,尿潜血和尿蛋白阳性率分别为28．67％和41．96％,ESR（83．22％）加快,肝功酶谱（30％-40％）升高．自身抗体检测结合常规检查有利于SLE的诊断和治疗．     

斑马鱼hand2基因的克隆、抗体制备及分析

为利用斑马鱼动物模型进一步研究bHLH转录因子家庭重要成员hand2基因在心脏发育中的功能,采用生物信息学结合RT-PCR的方法获得了斑马鱼hand2基因.将所得片段插入原核表达载体pGEX-4T-1中,并通过IPTG诱导表达出GST-Hand2融合蛋白,经GST亲和层析法纯化后,免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体,利用western blotting和免疫组化的方法对抗体进行分析.分析表明:斑马鱼hand2基因成熟肽编码区含有627 bp,编码208个氨基酸,与人Hand2蛋白的同源性达到83%;IPTG诱导表达后,表达的融合蛋白占菌体总蛋白的71%,经GST纯化获得SDS-PAGE电泳下单一条带.融合蛋白相对分子质量约为49 000.分析表明,制备的抗体具有很好的特异性.     

一种新的室温燐光法及其分析应用

提出一种新的4代树枝状分子（4G—D）-曲拉通-100X（Triton-100X）燐光标记试剂．基于Triton-100X-4G-D标记的麦胚凝集素（WGA）的产物（Triton-100X-4G-D—WGA），能与碱性燐酸酶（ALP）发生两种（直接法和夹心法）特异性亲和吸附反应（AA），其AA的产物仍然保持4G-D室温燐光的优良性质，且AA产物的△Ip值与ALP的含量成线性关系，据此建立了Triton-100X-4G—D标记麦胚凝集素-亲和吸附固体基质室温烧光法（AA—SS—RTP）测定痕量ALP的新方法．该方法的检出限为0．20ag spot^-1（直接法，对应浓度：5．0×10^-18 mol L^-1）、0．14ag spot^-1（夹心法，对应浓度：3．5×10^-18 mol L^-1），灵敏度高，重现性和精密度好．直接法和夹心法用于血清中ALP含量的测定，与漳州市中医院ELISA法临床检测的结果相吻合．     

核酸适配子在荧光生物传感器中的应用

核酸适配子与其靶标物的作用与抗原抗体相类似,但却有着许多优于传统蛋白质抗体的特点,核酸适配子在荧光生物传感器中的应用越来越广泛,本文对各种类型的基于核酸适配子的荧光生物传感器进行了简单的介绍。     

ENA抗体与体液免疫检验在SLE诊断中的应用价值

探讨EAN抗体、抗ds—DNA与体液免疫检测在系统性红斑狼疮（SLE）诊断中的应用．选取58例诊断明确的SLE患者为SI,E组,另取健康人群21例为对照组．清晨空腹采静脉血,用免疫斑点法检测EAN抗体及抗ds—DNA,用散射比浊法在IMMAGE特种蛋白分析仪检测IgG、IgA、IgM、C3、C4．结果显示：SLE患者血清中IgG、IgA水平分别为（21．61±3．79）g／L、（2．96±0．52）g／L,明显高于对照组;C3、C4水平分别为（0．66±0．23）g／L（0．16±0．05）g／L,明显低于对照组．SLE患者组中IgG、IgA、C3及C4阳性率分别为67．2％、51．7％、69．0％、65．5％,对照组阳性率低于5．0％．SI。E患者血清中多种自身抗体呈阳性,抗ds—DNA、抗Sm阳性率分别为37．9％、32．8％,但是对照组中未检出抗ds—DNA、抗Sm、抗nRNP、抗SSA、抗SSB、抗ScL-70、抗Jo-1．结果表明：联合检测ENA抗体、抗ds—DNA和体液免疫有助于指导临床疾病诊断及疗效评估．     

膀胱移行细胞癌预后与p53基因突变关系的研究

本文探讨了膀胱癌组织p53基因突变与临床分期、病理分级及预后的关系 .利用PCR -SSCP及PCR -直接循环测序技术 ,分析 70例膀胱移行癌组织p53基因突变 .结果 70例中 2 4例 ( 3 4 .3 % )发生p53基因突变 .浸润性膀胱癌 (pT2 -pT4 )组比浅表性膀胱癌 (pTa -pT1 )组、G1 -2组比G1组p53基因突变率明显增高 (P<0 .0 5) .突变阳性组与突变阴性组的 1年、3年、5年生存率分别为 63 .6%、4 0 .1 %、4 0 .1 %及 91 .8%、76.4 %、56.4 % ,阳性组较阴性组明显预后不良 (P <0 .0 5) .结论是p53基因突变可作为预测膀胱移行癌恶性进展及鉴别浸润性与浅表性膀胱癌、预后判断有用的分子生物学指标 .     

圆筒型植物细胞质膜的分布电荷所引起的电场和对细胞内压力的影响

根据细胞双电层模型和电学原理,推出了圆筒型植物细胞膜上电荷产生的细胞内压力的计算公式.利用该公式分析了植物细胞膜上电荷产生的电场力对细胞内压力的影响.得出了细胞的实际内压力和植物体的实际刚度比只考虑机械压力的理论结果要大,细胞的实际破裂情况比只考虑机械压力时的理论分析结果要容易些三点结论.     

慢性淋病的微波治疗

探索了一种新的性病治疗技术，采用微波照射的方法治疗慢性淋病患者共８７例。其中男性患者４８例，女性患者３９例。经一至二个疗程治疗后，男性组有效率为８６％，临床治愈率为７５％；女性组全部有效，临床治愈率达８７％。此研究正在进一步深入的改进之中。     

亲和吸附固体基质室温燐光法测定痕量糖

在外重原子微扰剂Pb（Ac）2存在下,异硫氰酸荧光素（FITC）的SiO2纳米微球（简写作FITC—SiO2）在醋酸纤维素膜（ACM）上能发射强而稳定的室温燐光（room temperature phosphorescence,简称RTP）信号．由FITC-SiO2标记的麦胚凝集素（Triticum vulgate lectin,简称WGA）产物（FITC-SiO2-WGA）,不仅仍能在ACM上与萄萄糖（glucose,简称G）发生定量的特异性亲和吸附（affinity adsorption,简称AA）反应,且AA反应产物（WGA-G—WGA-FITC-SiO2）能发射更强的RTP信号,其△Ip值与G的含量成线性关系,据此建立了FITC-SiO2标记WGA-AA固体基质室温燐光法（affinity adsorption solid substrate-room temperature phosphorimetry,简称AASSRTP）测定G的一种新方法．按3Sb／k计算,本方法的检出限（LD）为0．47pg spot^-1（对应浓度为1．2×10^-9m L^-1,即5．3×10^-9 mol L^-1）,灵敏度高,用本法和G氧化酶法对比测定了血清试样中G的含量,结果相吻合．同时讨论了AASSRTP测定G的反应机理．     

玻色-爱因斯坦凝聚体基态的动能微扰

利用微扰方法研究了动能对玻色—爱因斯坦凝聚体的基态能量的粒子数平均值和粒子几率密度分布的影响，对^87Rb原子的模拟结果标定了弱、强相互作用时一维凝聚体中的粒子数范畴。     

Fe87Zr7B6纳米晶合金的微结构研究

本文用X射线衍射（XRD）和扫描电镜（SEM）研究了不同球磨时间Fe87Zr7B6合金的微观结构,XRD结果表明合金形成体心结构固溶体,由于晶粒的团聚,SEM显示在整个合金化过程中Fe87Zr7B6粉末始终保持微米级。     

含草酸钴水液及浆液的陶瓷膜精滤实验研究

陶瓷膜过滤含草酸钴水液及浆液,其膜通量较大,而且通量保持稳定;陶瓷膜经化学清洗后通量可恢复;含草酸钴溶液中草酸钴含量高低对陶瓷膜通量没有明显影响.实验说明用陶瓷膜精滤草酸钴溶液性能稳定,在技术上可行,可以在工业中生产应用.     

罗丹明6G发光分子纳米微球标记凝集素-亲和吸附固体基质室温燐光法测定碱性磷酸酶

在外重原子微扰剂Pb（Ac）2存在下,基于罗丹明6 G（Rhodamine 6G,简写为R）的SiO2纳米微球（简写为R-SiO2）在醋酸纤维素膜（ACM）上于λex/λem=482.38/648.59 nm处能发射强而稳定的室温燐光信号.由该发光微球标记的麦胚凝集素（Triticum vulgare lectin简称WGA）,不仅仍能在ACM上与碱性磷酸酶（AP）发生定量的特异性亲和吸附反应,且亲和吸附反应产物能发射更强的室温燐光（RTP）信号,据此建立了R-SiO2纳米微球标记凝集素（WGA）亲和吸附（AA）固体基质室温燐光法（AA-SS-RTP）测定AP的一种新方法.本法的线性范围为1.00～360.00 ag AP spot^-1（样品体积0.4μL/斑,对应浓度2.50～900.00fg/ml））,工作曲线的回归方程为△Ip=16.24＋0.8856 m AP/ag spot^-1,r=0.9993.检出限为0.14ag spot^-1.分别对1.00和360.00 ag spot^-1 AP重复测定11次,RSD为3.9%和3.1.%.本方法灵敏、准确、精密度好,已成功用于人血清中AP的测定.     

甘肃省主要自然灾害危险性评价研究

以甘肃省8种主要自然灾害为评价对象，合理选取评价指标，确定指标权重，计算自然灾害综合评价值，得到全省87个县（区）主要自然灾害危险性评价等级，并分析了全省主要自然灾害区域分异特征、主要灾害源地，为区域减灾防灾、区域发展规划提供理论依据．     

Fe87-xCuxZr7B6纳米晶软磁合金制备及磁性能研究

采用机械合金化法制备了Fe87-xCuxZr7B6（x=0,1）纳米晶合金.通过X射线衍射、差热分析、磁性能测试,研究了两种合金的结构、热稳定性及磁性能.结果表明：球磨40h后,Fe87Zr7B6和Fe86Cu1Zr7B6均形成单相bcc纳米晶过饱和固溶体;相比之下,Fe86Cu1Zr7B6比Fe87Zr7B6具有更高的热稳定性和软磁性能.