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相似文献
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1.
环状芽孢杆菌中具有强启动活性DNA片段的结构与功能分析   总被引:1,自引:1,他引:0  
作者曾用启动子探针型载体pSUPV1从环状芽孢杆菌C-2菌株(BacilluscirculansC-2)中克隆到一个具有强启动功能的2.4kb片段BC6.对该片段作作的进一步缺夫分析表明,其3’端约0.7kb片段具有单独的基因启动子功能,序列分析表明BC6片段3′端有典型的原核生物的基因启动子结构,现有BC6的5’端的1.2kbXhiI片段的重组于pBR322的EcoRI位点,观察其对两侧具有不同  相似文献   

2.
用大肠杆菌启动子探针型载体pSUPV1从环状芽胞杆菌基因组中分离的启动子片段BC6能使无启动子的卡那霉素抗性基因恢复活性,并在大肠杆菌中获得高效表达。当用限制酶XbaI去除其5’-端1.2kb片段后,3’-端片段仍能启动Kan’基因表达,其抗性水平降至400μg/mL,但当1.2kb片段反向回原有位置时,其抗性水平降至600μg/mL。将Xb片段正向插入另一重组质粒pBC3中融合的Kan’adld  相似文献   

3.
用大肠杆菌(Escherichiacoli)启动子探针型载体pSUPV1从环状芽胞杆菌(Eacilluaeirculansc-2)基因组中分离的启动子片段BC6能使无启动子的卡那霉素抗性基因恢复活性,并在大肠杆菌中获得高效表达(卡那霉素抗性高达1200μg/mL).当用限制酶XbaⅠ去除其5′-端1.2kb片段(命名为Xb片段)后,3′-端片段仍能启动Kan ̄r基因表达,其抗性水平降至400μg/mL但当1.2kb片段反向插回原有位置时,其抗性水平降至600μg/mL.将Xb片段正向插入另一重组质粒pBC3中融合的Kan ̄r基因启动子的上游时,卡那霉素抗性由200μg/mL上升至1000μg/mL.当Xb片段反向插入时,Kan ̄r基因的表达却明显受到抑制,降为100μg/mL.这说明Xb片段具有正向增强而反向衰减Kan ̄r基因表达的能力.用BC6片段的两个亚克隆片段与c-2菌株总DNA分别作Southern杂交时,结果显示3′-端片段以单拷贝形式存在于基因组中,而Xb片段则以多拷贝形式散布其中.由此推断Xb片段并非一定伴随该基因启动子存在.  相似文献   

4.
采用聚合酶链式反应技术,以中国湖北雄性黄牛基因组DNA为模板,扩增出Sry基因5’端调控区680bp和640bp两个片段,并分别克隆到pUC18上,测序拼接出完整的5’调控序列1040bp,该列含核心启动子和ATG起始密码。  相似文献   

5.
构建及表达小麦高分子量谷蛋白基因5′端调控序列缺…   总被引:1,自引:0,他引:1  
通过定点突变,在小麦高分子量(HMW)谷蛋白基因5′上游调控序列的TATAbox与基因翻译起始密码子ATG之间,改变三个碱基,产生新的BamHⅠ内切酶位点。在调控序列中,选择四个合适的内切酶,对上游序列进行缺失,分离到四个大小分别为2400、610、440和110bp的含有不同调控元件的HMW谷蛋白基因启动子,与质粒pHI101.1的报告基因GUS重组,构建了四个嵌合质粒pWG2400、pWG60  相似文献   

6.
对利用基因启动子探针型载体pSUPV2,从枯草杆菌AS1.398中克隆3个稳定的具有强启动功能的DNA片段,进行限制酶切分析发现,pBSU22和pBSU43中的插入片段小于0.2kb,pBSU44中的插入片段为3kb。测定结果表明,3个插入片段中都有较为典型的原核生物基因启动子序列,其中pBSU22和pBSU43的插入序列几乎完全相同。2  相似文献   

7.
8.
去势耐受前列腺癌(Castrate-resistance prostate cancer, CRPC)的发生是进展性及转移前列腺癌治疗中的主要障碍,其中性激素在CRPC发生及进展过程中发挥着重要作用.在本实验中发现,调节雌雄激素转换的关键酶—芳香化酶转录参与的主要启动子在CRPC细胞系中发生改变:雄激素依赖前列腺癌细胞系LNCaP中芳香化酶转录的主要驱动启动子为I.4,而在CRPC细胞系LNCaP abl,PC-3和22RV1中转变为启动子PII.此外,雄激素能够上调芳香化酶在CRPC细胞系中的表达,而雌激素对芳香化酶的表达没有明显影响.上述结果提示CRPC中芳香化酶的异常表达可能影响前列腺癌进程.  相似文献   

9.
用PCR方法,从人脑cDNA库中克隆FHIT基因,扩增得到553bp片段克隆于pGEM-T载体,测定了其DNA序列。该序列包括FHIT cDNA编码区全部444bp,以及5‘端52bp和3’端57bp非编码区序列。编程区有二处位点发生突变,第92位密码子中的C突变成G,是同义突变,不导致氨基酸改变;  相似文献   

10.
通过定点突变,在小麦高分子量(HMW)谷蛋白基因5′上游调控序列的TATAbox与基因翻译起始密码子ATG之间,改变三个碱基,产生新的BamHⅠ内切酶位点.在调控序列中,选择四个合适的内切酶,对上游序列进行缺失,分离到四个大小分别为2400、610、440和110bp的含有不同调控元件的HMW谷蛋白基因启动子,与质粒pBI101.1的报告基因GUS重组,构建了四个嵌合质粒pWG2400、pWG600、pWG440和pWG100.经基因枪、微束激光和PEG等方法将pWG2400转化玉米胚乳悬浮细胞,GUS基因获得表达.这为进一步研究HMW谷蛋白基因的调控机理奠定了基础.  相似文献   

11.
以满江红鱼腥藻(Aac)提取总DNA为模板,通过PCR技术,扩增得到其谷氨酰胺合成酶基因(glnA)上游区.经酶切得到409bp的片段,并将其连接到pBluescriptⅡks+上测序.将测序结果与Anabaena7120调控序列比较,有982%的同源性.在上游调控中也具有niflike和E.colilike启动子,值得注意的是,调节蛋白VF1的结合位点正好位于niflike启动子上.所克隆的片段不但对蓝藻固氮、泌氨的基因调控研究具有意义,也对表达载体的构建具有实用价值.  相似文献   

12.
HHV-6在体外可以激活HIVLTR引导的基因表达[1],其基因组中一基因片段B701已被证明与这种激活作用有关[2].B701编码143个氨基酸的蛋白质,可与HHV-6基因组中其它基因片段协同作用提高对HIVLTR的激活效力.对B701进行缺失突变,得到突变体RSV-B701-d1(3′端缺失181个bp)、RSV-B701-d6(3′端缺失353个bp),将这两个缺失突变体分别与HIV-Luc共转染受体细胞,通过LUC活性分析发现,缺失突变体d1、d6不但仍具有激活能力,而且d6的激活能力要远远大于d1.二级结构预测初步揭示了B701对HIV-LTR的反式激活作用机制,为阐明HHV-6基因产物与AIDS的病理关系提供了依据.  相似文献   

13.
本研究以牛血总DNA为模板,用PCR技术扩增牛α-s1酪蛋白基因的5'端3.6kbDNA片段和3'端1.5kbDNA片段的调控区序列,得到了相应的特异性扩增片段.用Klenow处理后,将两个扩增片段分别与经Smal酶切的pUC18质粒载体用T4DNA连接酶连接,转化大肠杆菌JM109.在含有X-gal,IPTG和Amp的选择培养基上培养.从白色菌落中提取质粒DNA,进行限制酶切鉴定.结果得到一个插入有1.3kbDNA片段的阳性克隆.对其进行部分序列分析表明,该片段为5'端缺失约170bp的牛α-s1酪蛋白基因3'端及下游区序列.  相似文献   

14.
用PCR法构建乳腺特异性表达非乳蛋白基因的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
将PCR法分别从绵羊和人血基因组DNA中扩增出的绵羊β-乳球蛋白基因(BLG)5'端调控区898bp的片段和人骨髓单核细胞表面分化抗原CD14基因(hCD14)成熟肽1245bp的片段连接。连接片段插入pUC19 EcoRI-KpnI位点,构建成pBLG-hCD14质粒。该质粒经KpnI及CcoRI-HindⅢ酶切、PCR法扩增BLG和hCD14分析后,进一步用^32P-BLG探针杂交确证。用Ec  相似文献   

15.
使用染色体步移(Genome walking)法,从籼稻(Oryza sativa subsp.indica)桂朝2号基因组中克隆到长度为471bp的水稻精细胞优势表达基因RSSG8的启动子片段R8PN,并进行了全序列测定和分析.该段序列中含有3个CAAT-box,6个Gobox和多种植物顺式作用元件,但没有发现典型的TATA-box,推测为一种特殊的启动子结构,为了鉴定RSSG8基因的基本启动子元件,将二条长度不同的5’端侧翼区缺失体(分别长471bp,260bp)定向插入载体pBI121中,取代原有的CaMV 35S启动子,构了驱动报告基因GUS的植物表达载体pRGUS1,pRGUS2,通过农杆菌介导的瞬时表达法转化烟草叶片和花粉,快速鉴定启动子片段中起关键作用的区域,结果显示两个缺失片段都能启动GUS的表达,可以初步判定这两个片段具有启动子功能。  相似文献   

16.
为了鉴定Nodal基因的基本启动子元件,将Nodal基因5′侧翼序列的各缺失片段构建以荧光素酶为报告基因的重组质粒。用这些拾报告基因的质粒转化F9细胞并测定了它们的瞬时表达荧光素酶海性。Nodal基因的基本启动子元件位于转录起始位点上游约60bp,其中含有一个位于-33bp处的TATAbox,它对于转录起始起着重要作用。这个基本启动子在多种细胞类型中都有活性,但其活性不强。  相似文献   

17.
pANGPD是用构巢曲霉GPD基因片段为探针,从黑曲霉基因组文库中筛选到的一个三磷酸甘油醛脱氢酶基因(GPD)阳性克隆.作者对该阳性克隆进行了亚克隆和序列测定,结果表明,基因片段总长2441个核苷酸(n.t),其中5’-端非编码区长981n.t,编码区(从起始密码子ATG到终止密码子TAG)长1446n.t,3’-端非编码区长24n.t,基因启动子区含有gpd-盒和CT-盒序列,但无明显的CAAT盒和TATA盒序列.GPD基因由7个外显子和7个内含子构成,外显子全长1008n.t,编码的蛋白质长336个氨基酸残基.通过序列比较分析,发现该基因与构巢曲霉的GPD基因有许多相似之处;它们的基因启动子序列都含有gpd-盒和CT-盒,其同源性分别为96%和65%;推测的两个GPD蛋白的氨基酸同源性高达90%;两个基因所含内含子数目及位置相同.  相似文献   

18.
利用启动子探针型质粒pKK232-8从卡介苗染色体DAN的BamHI酶切片段中克隆到4个具启动功能的DNA片段,测定各重组子对氯霉素(Cm)的抗性,其中含3.3Kb外源片段的重组质粒pBCG2大肠杆菌转化子在LM培养基上对Cm抗性可达170×10-6g/mL,作了该片段的限制性酶切图谱.对pBCG2利用SalⅠ位点,亚克隆出4种部分重叠的具启动功能的DNA片段,这4种重组质粒分别命名为pBCG2-1,pBCG2-2,pBCG2-6和pBCG2-8,并分析了其中插入片段的大小及其转化子对Cm的抗性.将pBCG2-2的SalⅠ外源片段插入到分枝杆菌启动子探针型穿梭质粒pEQ3,获得一个可在卡介苗中表达lacZ基因的重组子pEB22.斑点杂交实验证明,具有启动功能的DNA片段来源于卡介苗的染色体DNA.结果表明克隆到一个对大肠杆菌和卡介苗均具启动子活性的DNA片段  相似文献   

19.
妊高征候选基因EDN1多态性的初步研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的:内皮素-1基因是妊高征的候选基因之一。通过研究该基因TaqⅠ位点在中国人群中的多态性,探讨中国人群中EDN1与妊高征的关系。方法:根据EDN1第4内含子中多成性片段的有关序列,设计相应引物,建立检测该多态性片段的PCR技术技术。结果:26个样品52个内皮素-1基因TaqⅠ位点等位基因中T1的频率为80.9%,T2的频率为19.1%。结论:显示中国汉族人群内皮素-1基因中存在着TaqⅠ酶切位点  相似文献   

20.
参照国外报道的豌豆GPAT基因cDNA序列,设计并合成一对寡核苷酸引物,通过RTPCR技术,从云南地方栽种的豌豆品种中分离到了GPAT基因的编码cDNA片段,并将其纯化后直接克隆到pGEMT载体系统中,经NcoⅠ和NotⅠ双酶切鉴定,所得的重组质粒中含有1380bp左右的片段.采用PstⅠ,HindⅢ两种限制性内切酶进行酶切,酶切图谱分析表明所克隆的豌豆GPAT基因编码cDNA的酶切图谱与国外所报道的该基因cDNA的酶切图谱一致,暗示了该基因在进行上具有一定的保守性.  相似文献   

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