朱鹮RAPD反应体系优化研究

目的研究朱鹮RAPD反应中Mg2 浓度、复性温度、引物浓度、Tag酶浓度和DNA模板量等几种因素对扩增结果的影响,并探讨反应的最优条件。方法以朱鹮DNA为材料进行RAPD试验,对Mg2 浓度、复性温度、引物浓度、Tag酶浓度和DNA模板量进行梯度设置,每次仅改变一个参数,并保持其他条件不变。结果建立了一套适用于朱鹮的RAPD反应体系。结论优化后的朱鹮RAPD反应条件为:反应总体积25μL,其中含Mg2 (25 mM)2.5μL,10×Buffer2.5μL,dNTPs(10mM)0.5μL,引物(8μmol/L)1.0μL,Tag酶(3 U/μL)0.4μL,DNA模板(10 ng/μL)3.0μL;PCR循环中复性温度为37℃。     

乌头基因组DNA提取与RAPD反应体系优化

采用改进方法提取乌头基因组DNA,建立乌头RAPD分析的PCR反应体系,成功地进行了RAPD扩增,筛选出乌头RAPD的最佳方案为:25μl反应体系中包括dNTPs 0.06 mmol·L-1,引物0.2μmol.μL-1,模板DNA40 ng,Taq酶1U,Mg2+ 4 mmol·L-1,10×buffer缓冲液2.5μl,其余部分为无菌超纯水。PCR扩增循环为95℃3 min,38 ℃1 min,72 ℃2min 1次循环;94 ℃=1 min,38℃1 min,72 ℃2 min,45次循环,最后72℃延伸10 min。     

唐菖蒲RAPD分析体系的优化研究

本文采用L9(34)正交试验设计 ,快速、有效地确定了适合唐菖蒲的最佳扩增条件 (包括对dNTP、引物、Mg2 、TaqDNA聚合酶等浓度的最佳组合 )。并通过试验确定了省时的RAPD—PCR反应程序。最终得到了一个较理想的唐菖蒲RAPD技术体系     

栉孔扇贝RAPD反应体系的优化

在研究栉孔扇贝不同地理野生种群的遗传多样性时 ,对RAPD反应中的模板浓度、引物浓度、dNTPs浓度、镁离子浓度等影响反应结果的因素进行了系统分析 ,并在此基础上 ,建立了栉孔扇贝RAPD实验室研究的最佳反应体系 :2 5 μl反应体系中 ,模板浓度为 2 5ng ,引物浓度为 2 5ng,dNTPs为 10 0 μM ,TaqDNA酶 1个单位 ,10×Buffer 2 5 μl,镁离子浓度 2mM .PCR循环参数为 :94℃预变性 5min ,然后 94℃变性 0 5min ,36℃退火 1min ,72℃延伸 1min ,共进行 45个循环 ,最后 72℃延伸 10min .     

水溞RAPD反应体系的优化和建立

以大型溞、发头裸腹溞、蚤状溞和老年低额溞为研究材料,采用改变退火温度和循环次数等条件对RAPD扩增技术进行了优化研究.结果表明:在条件优化后(退火温度为42℃,循环次数为46次)有5条RAPD引物(A-04,A-07,B-12,C-11和C-20)在4个群体中均有扩增条带.由此表明,退火温度和循环次数的优化有利于水溞RAPD鉴定技术的建立.该研究将为水溞的遗传多样性分析奠定基础.     

柳树RAPD反应体系均匀设计试验研究

从柳树幼苗的嫩叶中提取基因组DNA作为模板,运用均匀设计方法,获得;柳树RAPD扩增反应的优化体系：25μL反应体系中,DNA模板用量70 ng,引物浓度0.5mmol.L-1,Mg2＋浓度3mmol.L-1,TaqDNA聚合酶用量1.0 U,dNTP浓度0.3mmol.L-1.用16条引物进行验证,证实该体系重复性好、结果稳定.     

用正交设计优化甜菜RAPD反应体系

采用正交设计对甜菜的RAPD反应体系进行优化．应用L25（5^6）正交表,研究了Taq、Mg^2＋、随机引物、dNTPs和DNA模板5种RAPD反应组分浓度变化对扩增结果的影响,并进行量化分析,试验结果表明用这种方法建立的甜菜RAPD-PCR优化反应体系为：25μL反应体系中含1×Buffer、1．0mmol／L Mg^2＋、1U TaqDNA聚合酶、0．25mmol／L dNTPs、0．4μmol／L随机引物及25ng DNA模板．     

干用辣椒RAPD—PCR反应体系正交优化的研究

以干用辣椒幼苗为材料,研究了干用辣椒RAPD分析过程中的Taq酶、Mg^2＋,dNTPs、引物、模板DNA浓度、退火温度等影响因素,建立适合干用辣椒RAPD反应的PCR体系,即25μL反应体系中含有解体Taq酶1．5U、Mg^2＋2．5mmol／L,dNTPs0．6mmol／L、引物0．8μmol／L、模板DNA60ng．扩增程序为：94℃预变性4min;94℃变性1min,37℃退火1min,72％延伸1．5min,40个循环;最后72℃副延伸5min．     

极度濒危植物猪血木RAPD反应体系的优化

采用改进的CTAB法提取中国特有极度濒危植物猪血木(Euryodendron excelsum H.T.Chang) 嫩叶总DNA,并对其进行RAPD分析.分别检测了模板DNA、引物、dNTP、Mg2+和Taq DNA聚合酶用量对反应结果的影响.筛选并建立了适合于猪血木RAPD扩增的反应体系:总体积25 μL,其中10×PCR 缓冲液(500 mmol/L KCl,100 mmol/L Tris-HCl,110% Triton X-100,20 mmol/L MgCl2) 2.5 μL,引物( 1.5 μmol/L) 0.3 μL,dNTPs (10 mmol/L) 0.5 μL,模板2 μL (25 ng),Taq 酶0.2 μL (0.5 U).     

ZY-1砧木对欧洲甜樱桃生长结果的影响

ZY-1砧木嫁接拉宾斯、斯坦勒、先锋、雷尼尔、龙冠、大紫和红灯,植株生长势降低,试花挂果期提早.二年生试花,三年生开花株率和结果株率分别达到52%～100%和41%～95%;四年生开花株率和结果株率均达到100%,最高单株产量和平均单株产量达到1.87～5.06 kg和0.31～1.36 kg.而以中国樱桃作砧木的红灯三年生才开始开花,四年生开花株率、结果株率、最高单株产量和平均单株产量仅分别为65%、51%、0.25 kg和0.02 kg,仅为以ZY-1作砧木的红灯的65.00%、51.00%、13.37%和6.45%.     

苔藓植物RAPD应体系的建立及遗传多样性分析

以多枝青藓为材料优化RAPD反应条件,在此基础上对11种苔藓植物进行遗传多样性分析.结果表明:苔藓植物RAPD反应(25μl体系)的最佳条件为,Taq酶,1.0U;Mg2+浓度,2.0 mmol/L;dNTP浓度,0.2 mmol/L;模板DNA,60 ng;引物浓度,10 pmol.用40条引物进行扩增筛选,有6条引物扩增条带清晰,重复性好,共扩增出77条带.通过SPSS11.5分析软件对扩增结果进行聚类分析,结果与形态学分类基本一致,说明RAPD技术可用于苔藓植物的遗传多样性研究.     

RAPD技术在甜高粱品种基因组分析上的应用

以7050B保持系(抗病)、TX622B保持系(感病)杂交的F2抗性个体和甜高粱丝黑穗病8113(抗病)、甜高粱丝黑穗病8101(感病)为试材,应用RAPD筛选技术对甜高粱丝黑穗病感、抗病基因组进行分子标记的初步分析.实验过程中采用CTAB法提取高粱、甜高粱基因组总DNA,应用琼脂糖凝胶电泳法对RAPD扩增结果进行检测,通过比较琼脂糖凝胶电泳电压的不同,进一步优化了琼脂糖电泳电压,以7050B保持系(抗病)、TX622B保持系(感病)杂交的子一代抗性个体为试材筛选了90个引物,其中29引物扩增出了多态性谱带,应用20个具有多态性扩增谱带的引物对甜高粱丝黑穗病8113(抗病)、甜高粱丝黑穗病8101(感病)进行了RAPD分析,结果表明共有9个引物扩增出了差异谱带,引物分别为S83,S-84,S-88,S-89,S-90,S-92,S-96,S-97,S-98.     

真藓科(Bryaceae)植物RAPD反应体系的建立

真藓科植物的分子系统学研究是藓类植物研究中的新热点,RAPD是分子系统学研究中被广泛采用的一项重要技术.为了开展真藓科植物的分子系统学研究,通过单因素实验结合正交实验建立了适于该科植物的RAPD最佳反应体系:dNTP为0.2 mmol/L,随机引物0.4μmol/L,Taq DNA聚合酶1.25 U,Mg2 为2 mmol/L,模板DNA为50 ng,扩增体系为25μL.确定扩增程序:95℃预变性7min;94℃变性1min,36℃退火1min,72℃延伸2 min,40个循环;72℃终延伸7 min.并利用该体系从200条随机引物中筛选出了31条高度多态性的引物.     

酿制樱桃补酒工艺参数的优化

樱桃为烟台地区的特色水果之一,既营养丰富,又有补中益气、祛风湿,滋润皮肤,滋补气血,补虚,补肾等保健效果,而樱桃鲜果的贮存和保鲜相对较差,解决物尽其用尤为重要.作者开发了樱桃深加工系列产品,以支持其产业化的健康发展.本文在樱桃补酒的原酒酿制和配制正交实验的基础上,利用正交实验和人工神经网络相结合的建模方法,建立了工艺参数与产品间的映射模型,并通过仿真、优化与实验,获得了樱桃补酒最佳制备工艺参数:发酵温度20±2℃,总糖11±1%,总酸0.7±0.1%,芳香物浸提液添加量0.2%.     

新疆野生啤酒花DNA提取及RAPD反应体系的建立

采用2种方法提取啤酒花的基因组DNA,并分析了样品的不同状况和是否纯化对所提DNA质量及其RAPD扩增效果的影响。结果表明：采用改进的高盐低pH法优于CTAB法。以此法所提DNA为模板进行随机扩增多态DNA(RAPD)试验,分别测试了Mg2 ,dNTP、Taq酶、模板DNA浓度和退火温度对反应结果的影响,最终确定了野生啤酒花RAPD反应的最佳体系。     

RAPD标记对甘薯及其近缘野生种的遗传多样性分析

用随机扩增多态性DNA（RAPD）分析技术对甘薯近其近缘野生种进行了遗传多样性分析,使用15种10个碱基的随机引物,对17个甘薯品种及其近缘野生种的基因组DNA进行了扩增,共产生了105条DNA带,其中91条为多态性带,通过聚类分析将17个甘薯品种及其近缘野生种聚类成3个类群：A类群由三裂叶野牵牛（Ipomoeatriloba）单个野生种组成,C类群由海滨野牵牛（I.littoralis）和二倍体三浅裂野牵牛（I.frifida2x）组成,B类群则由四倍体和六倍体三浅裂野牵牛以及12个甘薯品种组成。