耐碱性芽孢杆菌碱性淀粉酶研究Ⅰ──菌种的分离与筛选

从１５份土样中筛选出一株产碱性淀粉酶的耐碱性芽孢杆菌９－Ａ２，经菌学鉴定为耐碱性巨大芽孢杆菌。９－Ａ２菌株可在ｐＨ１０以上的环境中生长，在ｐＨ９～１０条件下产生较高的碱性淀粉酶。碱性淀粉酶在ｐＨ６～１１范围内比较稳定，酶反应的最适ｐＨ为９，最适温度为５０℃     

几株微生物胞外水解酶间的相互作用

分离纯化了在发酵生产中常见菌株的α－淀粉酶及中性蛋白酶,并对其相互作用进行了研究。结果发现,解淀粉芽孢杆菌ＢＦ所产的中性蛋白酶,对α－淀粉酶的失活作用强于其它菌株,黑曲霉ｕｖ－１１所产α－淀粉酶对中性蛋白酶较其它菌株敏感,细菌中性蛋白酶对霉菌胞外酶的水解作用强于细菌之间的相互作用。     

β－淀粉酶基因在黄单胞菌中的克隆及表达

广泛寄主范围载体ｐＫＴ２１０可在辅助质粒ｐＲＫ２０１３的协助下转移进入黄单胞菌（革兰氏阴性）中并能稳定存在；来源于枯草杆菌的β－淀粉酶基因与载体ｐＫＴ２１０形成重组质粒ｐＹＬ１，并以其转化大肠杆菌；通过三亲本接合将ｐＹＬ１引入带有利福平抗性的黄单胞菌ＮＫ０１－Ｒ中，通过抗性选择接合子，并测定接合子的淀粉酶水解能力及产胶能力．本文获得一株黄原胶产量比出发菌株提高２０％，且淀粉酶水解能力显著提高的工程菌株．     

白腐菌对高pH值的耐受性及驯化提高

为提高白腐菌对黑液高碱性的适应性，研究了5株经驯化在pH值为7－8碱性条件下能够生长的白腐菌在高pH值（8－12）条件下的生长状况及耐受性能，并对菌株进一步驯化，结果显示不同白腐菌耐高碱性能力不同，终止pH值高的菌株，耐高碱性强。经过高pH值环境的驯化，可提高耐高碱性能力，如3^#菌株经过驯化，耐碱能力从pH9提高到pH12，其终止pH值、生物量也得到了提高，说明通过经过驯化后的白腐菌对高碱性的耐受能力增强。     

次声对几种生物酶的生物效应初探

利用自制的次声信号发生器产生１３Ｏｄｂ（分贝）的次声对α－淀粉酶、精氨酸酶、脂肪酶、溶菌酶、木瓜蛋白酶和碱性磷酸酶等６种酶处理．并检测处理前后酶液的紫外光谱。通过比较，发现次声的作用会给这些酶的构象带来一定程度的变化，对α－淀粉酶、碱性磷酸酶的处理前后酶活力检测结果表明，这种酶构象变化不影响该酶的活力．初步排断。次声对生物酶构象影响的机制有别于化学变性剂。     

一株产低温碱性淀粉酶蕈状芽孢杆菌的分离筛选和发酵优化

本研究的目的是从生态环境独特而复杂的西藏林芝地区的土壤样品中挖掘所蕴藏的特殊淀粉酶微生物资源.采用淀粉酶功能筛选的方法获得一株低温碱性淀粉酶生产菌株,编号为3F1.其酶活最适条件为10℃、pH 10.2.通过16S rDNA序列分析法鉴定该菌株为蕈状芽孢杆菌(Bacillus mycoides),并将其命名为Bm3F1.通过发酵条件的逐步优化,最终确定其最佳发酵条件为：发酵培养基中添加1.5%可溶性淀粉,培养基初始pH 7.2,装液量10 mL/250 mL,菌体接种量9.0%,发酵温度30℃,发酵时间18 h,经优化后可将菌株的酶活提升至13.58 U/mL.表明从西藏林芝地区分离的Bm3F1具有在低温和碱性条件下产较高酶活淀粉酶的特性.     

β—淀粉酶基因在黄单胞菌中的克隆及表达

广泛寄主范围载体ｐＫＴ２１０可在辅助质粒ｐＲＫ２０１３的协助下转移进入黄单胞菌（革兰氏阴性）中并能稳定存在；来源于枯草杆菌的β－淀粉酶基因与载体ｐＫＴ２１０形成重组质粒ｐＹＬ１，并以其转化大肠杆菌；通过三亲本接合将ｐＹＬ１引入带有利福平抗性的黄单胞菌ＮＫ－０１－Ｒ中，通过抗性选择接合子，并测定接合子的淀粉酶水解能力及产胶能力。本文获得一株黄原胶产量比出发菌株提高２０％，且淀粉酶水解能力显著提高的工     

He－Ne激光对地衣芽孢杆菌的诱变效应

用Ｈｅ－Ｎｅ激光处理碱性蛋白酶产生菌──地衣芽孢杆菌Ｆ－３５２３－３．实验结果表明，照射１０分钟，其正变率最高达１６．８％，经处理后获得变株Ｆ－８０１４发酵的酶活性比出发菌株提高３７％，生物学特性发生多方面变异。     

水、旱稻幼苗β－淀粉酶酶学性质的比较研究

以四种抗旱性不同的水、旱稻幼苗的茎、叶为实验材料，应用ＤＮＳ法测定β－淀粉酶的活性，比较抗旱性不同品种间β－淀粉酶酶学性质（包括酶的最适温度、热稳定性、抑制剂和激动剂对酶活性的影响以及Ｋｍ值）的差别．结果表明，所有供试品种β－淀粉酶的最适温度为４０℃；不抗旱的８３－８和８２－１β－淀粉酶的热稳定性强于抗旱的秦爱和７８－８－１０；ＥＤＴＡ和Ｃｕ２＋，Ｚｎ２＋，Ｍｇ２＋，Ｐｂ２＋和Ｈｇ２＋等金属离子是β－淀粉酶的抑制剂，Ｍｎ２＋，Ｂａ２＋，Ｃｏ２＋和Ｃａ２＋等金属离子β－淀粉酶的激动剂；旱稻品种β－淀粉酶的Ｋｍ值大于水稻．     

嗜盐菌碱性淀粉酶特性研究

碱性嗜盐菌ＨａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｐＨ－３７１产生的淀粉酶经超滤、硫酸铵沉淀和ＤＥＡＥ－纤维素纯化后，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳为一条带，分子量为２７０００，等电点３．７，最适反应ｐＨ９．０，最适反应温度６５℃．ＮａＣｌ是维持酶活性的必需因子，酶解产物为麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖和麦芽五糖