rhBMP-6的表达和纯化

骨形态发生蛋白(bone　morphogenetic protein，BMP)—6属于转化生长因子(transforming growth fac-tor)—β超基因家族，在骨的形成中具有重要作用，并受雌激素选择性上调．本研究利用RT—PCR从人胎盘组织中扩增BMP—6成熟肽的DNA片段，克隆到pGEx—5x—1中，构建GST—BMP6融合蛋白表达载体pGEx—BMP—6，转化E.coli DH5a．克隆质粒转化的工程菌，经IPTG诱导4h后，高效表达GST—BMP6融合蛋白，在SDS—PAGE上出现一新蛋白带，分子量约为42kD，约占总蛋白的25％，表达产物以包涵体形式存在．菌体超声破碎，经0．3％N—十二烷基肌氨酸钠(SKL)溶解包涵体，离心后的上清液加入0．6％　Triton　x—100整合SKL，然后利用谷胱甘肽Sepharose—4B亲和层析纯化．结合GST—BMP6的介质经洗涤、xa因子酶切得到纯度达95％的rhBMP—6蛋白。     

重组人TRAIL蛋白的原核表达、纯化及鉴定

将含有人TRAIL蛋白表达质粒的大肠杆菌以IPTG诱导表达 ,表达蛋白主要以包涵体形式存在 .经菌体破碎、包涵体分离、抽提及复性 ,用Ni NTASuperflow柱层析及进一步的离子交换色谱分离纯化获得纯蛋白 .SDS PAGE显示纯化的蛋白为 19kD的单一条带 .Westernblot鉴定表明 ,纯化的表达产物与抗人TRAIL蛋白的抗体发生特异性免疫反应 .抗肿瘤生物活性测定表明该纯化蛋白对肿瘤细胞的体外生长具有显著的抑制作用 .     

TAT-NEP1-40融合蛋白的表达、纯化及蛋白转导功能的鉴定

为大量获得高纯度具有蛋白转导功能并可以穿过血脑屏障的融合蛋白TAT—NEP1-40,将构建好的表达载体pTAT—NEP1—40转化大肠杆菌BL21（DE3）进行表达后。将融合蛋白进行纯化和复性,鉴定蛋白转导功能。带有重组质粒pTAT—NEP40的大肠杆菌经IPTG诱导后,主要以包涵体形式表达,融合蛋白的分子量大小为14kD,其表达量占菌体总蛋白量的31．59％,纯化后目的蛋白纯度达95．6％,通过免疫组化染色显示融合蛋白可以穿过血脑屏障进入脑组织。上述结果表明利用pTAT—NEP1-40重组质粒,可以成功地表达TAT—NEP1—40;纯化后该蛋白具有穿过血脑屏障的功能,为NEP1-40功能的进一步研究提供了基础。     

传染性非典型肺炎病毒核蛋白的表达与活性检测

用PCR方法，人工合成传染性非典型肺炎病毒(SARS-CoV)核蛋白(N)全编码基因，并构建原核表达载体．在大肠杆菌中进行表达．结果重组N蛋白表达产量占菌体总蛋白的40％以上，主要以可溶形式存在．用SARS患者急性期血清进行蛋白印迹检测，表明可溶形式和包含体形式均有明显活性．包含体形式的重组蛋白经纯化后纯度可达90％以上，活性与纯化前相当，可作为SARS抗体诊断试剂盒的抗原原料．     

人细胞周期蛋白D1在大肠杆菌BL21中的表达及纯化

将人细胞周期蛋白D1全长cDNA克隆入原核表达载体pET-28c(+)中, 经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3)后获得表达菌株. 该菌株经IPTG诱导高效表达出带有组氨酸标签的以包涵体形式存在的融合蛋白, 表达量占菌体总蛋白的23%. 包涵体经洗涤和溶解， 在变性条件下利用Ni²⁺螯合柱纯化、 尿素梯度复性后， 得到纯度达98%以上的纯化蛋白. SDS-PAGE显示纯化蛋白的分子量约为43 ０００， Western-b lot分析表明， 在相应分子量处有一特异性条带， 说明成功表达和纯化重组人细胞周期蛋白D1.     

人CDK4基因的原核表达及重组蛋白的纯化和复性

将人CDK4基因克隆入原核表达载体pET28a（+）中, 经 酶切和测序鉴定正确的重组质粒pET28a-CDK4, 转化E.coliBL21(DE3)后获得表达菌株. 该表达菌株经IPTG诱导后, 高效表达出带有组氨酸标签的以包涵体形式存在的融合蛋白, 表达量占菌体总蛋白的52.6%, 包涵体经过洗涤、 尿素变性溶解、 His Trap HP Kit柱纯化、 稀释复性, 获得纯度达98%以上的蛋白. SDS-PAGE及Western blot分析表明, 在分子量34 000处有一特异性蛋白条带. 结果表明, 已成功的表达和纯化纯度达98%的重组人CDK4蛋白.     

羊痘病毒基因组中编码白细胞介素-18结合蛋白

从羊痘病毒基因组中寻找并扩增羊白细胞介素-18结合蛋白(IL-18BP)基因。将该基因克隆到表达载体PGEX-5X-3,在大肠杆菌BL21中实现了高效表达。目的蛋白以包涵体形式存在。表达产物经过变性、复性和层析纯化后,具有体外拮抗羊IL-18刺激外周血单核细胞产生IFN-γ的活性。     

EB病毒核抗原1羧基端原核表达产物的纯化方法

EB病毒核抗原1羧基端的原核表达产物以包涵体和可溶性两种形式存在,用镍离子亲和柱分别对其进行了纯化.结果显示,可溶性部分以及经2M尿素溶解后的包涵体的最适咪唑洗脱浓度均为150mM.纯化后重组蛋白的纯度在90%以上.     

人胰蛋白酶原-2在大肠杆菌中的表达、纯化与活性测定

胰蛋白酶原-2是急性胰腺炎相关的敏感而特异的标志物,并且与多种肿瘤转移的过程密切相关．对胰蛋白酶原-2基因5’端4个氨基酸的密码子碱基进行简并突变,并在其3’端连接6个组氨酸编码序列构建含重组质粒pBVTg2的大肠杆菌工程菌-pBvTg2／DH5α．重组大肠杆菌经温度诱导后获得了高效表达,重组蛋白占总菌体蛋白的20％,并以包涵体形式存在．包涵体经尿素缓冲液裂解后,通过Ni-NTA亲和树脂一步分离纯化．纯化蛋白经SDS-PAGE分析及利用anti—histidine mAb进行Western blotting分析,以及蛋白N末端测序分析,结果表明与目的蛋白特征相符合．纯化的重组人胰蛋白酶原-2经复性后能与天然人胰蛋白酶原-2的单抗antihTrypsinogen2 mAb特异结合,复性后的蛋白在肠激酶作用后测得具有74BAEEU／mg的胰蛋白酶比活力,为进行胰蛋白酶原-2单克隆抗体的制备及其检测和应用奠定了基础．     

细胞毒性T细胞抗原4胞外结构域的高效表达与纯化

目的:获得细胞毒性T淋巴细胞相关分子4胞外结构域(exCTLA4)在大肠杆菌中高效表达的条件,并纯化获得高纯度的重组蛋白.方法:构建原核表达质粒pET28a-exCTLA4并转入大肠杆菌Transetta(DE3)中,通过改变诱导物IPTG浓度、细菌培养温度和时间,获得了exCTLA4的最佳表达条件.收集最佳诱导条件下表达exCTLA4的菌体,将菌体超声破碎后,离心分离exCTLA4包涵体,用低浓度尿素(2mol·L~(-1))洗去大部分背景蛋白后,再用高浓度尿素(8mol·L~(-1))溶解包涵体,进一步用镍离子亲和层析方法得到高纯度exCTLA4.结果:构建了表达载体pET28a-exCTLA4,获得了exCTLA4在Transetta(DE3)中的最佳诱导条件,即在1mmol·L~(-1) IPTG、25℃下,诱导6h能得到最佳表达,但重组蛋白以包涵体形式存在.通过纯化exCTLA4包涵体及进一步的镍离子亲和层析获得了高纯度的目的蛋白,Western blot鉴定为CTLA4.结论:获得了exCTLA4重组蛋白在大肠杆菌中的最佳表达条件和纯化方法及步骤,为该蛋白的应用奠定了基础.     

价值与事实的二维分野及其两个运用

本文分析哲学意义上价值与事实之间的关系以及由其演变的理性主义与经验主义,论述了这一研究分析方法在政治学上与经济学上的应用,指出学科之间的联系,试图拓宽学术研究的视野。     

高校资助育人工作现状分析及对策研究

针对高校资助家庭经济困难学生工作中一些不容忽视的问题,要更新资助观念,从帮助学生完成学业,转变为帮助学生健康成长、立志成才,通过有效途径实现资助育人,并注意处理好资助与育人的几个关系。     

高校科技资源转化创新的问题与对策

科技资源是"第一资源",它是科技创新活动的基础,对提升自主创新能力和建设创新型国家发挥着基础性作用。高校科技资源的转化创新是高校参与科技创新的重要基础。在对高校科技资源内涵、特点及重要性进行分析基础上,提出高校科技资源产学研间联动不足、与经济融合不够、布局分散、投入方式较为单一等问题,并提出了相应的对策和建议。     

软硬酸碱规则及其软硬度的计算

本文在介绍其它计算酸碱软硬度方法的基础上,提出一个新的计算广义碱的软硬度的公式,所得结果与其它方法大致相同,且大大增多了所能计算的碱的数目     

关于高校仪器设备验收工作的几点思考

新形势下,高校仪器设备验收工作的工作量和复杂程度不断增加,针对目前高校仪器设备验收工作中普遍存在管理制度不完善、管理方式不合理、合同文本缺乏规范性、专业技术力量不足等问题,结合西南交通大学在仪器设备验收工作中的探索和实践,在制度建设、分级管理、档案管理、信息化建设、队伍建设等方面给出了对策和建议。     

自然旅游资源的分类与欣赏

自然旅游资源大致分为地貌水文、天文气象、动植物三大类，它们是宇宙时空中自然形成与客观存在着的地理与生态环境的物质总和。从不同侧面分析出各种类型自然景观的欣赏原理，不仅可增强人们的审美能力，对唤起人们的旅游意识、丰富文化生活，乃至对合理开发旅游资源也会产生一定的积极影响。     

论中小学教师的人文素养及其拓展与提升

通过追溯分析,论述了导致现有教师人文素养欠缺的时代背景和社会因素。从教师人文素养的内涵及人文素养的基础性、发展性和延伸性三个层次中的诸要素出发,围绕我国中小学校教师现阶段的人文素养情况,给出拓展和提升教师人文素养的途径、方式和方法。     

审计监督在反腐倡廉中的地位和作用

从主、客观因素分析了当前存在违反财经法纪现象的主要原因，阐述了审计监督在廉政建设中的地位及其在反腐斗争中的作用，指出应通过审计监督，反馈反腐倡廉的信息，制定反腐倡廉的措施，完善反腐倡廉的制度，特别是加强对领导干部经济行为的约束和监督。     

持续深化科技体制改革,更好激发科技人员的积极性和创造性

 基于政策文本分析和文献资料研究，梳理了1978年以来激发科技人员积极性创造性改革相关政策，简述了2016年以来有关方面的主要改革行动。通过对中国科协第3次全国科技工作者状况调查（2013年）、第4次全国科技工作者状况调查（2017年）相关数据的比较分析发现，激发科技人员积极性创造性改革已取得阶段性成效，科技工作者对激发科技人员积极性创造性改革相关问题的评价明显提高。     

数学在现代科学技术体系中的地位和作用

分析了数学在现代科学技术体系中的重要作用,说明了数学发展过程中存在的问题和面临的机遇和挑战。