高原鼢鼠的红细胞、血红蛋白及肌红蛋白的测定结果

用常规方法对高原鼢鼠几项指标的测定结果 :红胞数为 9 92± 1 49百万 /mm3,血红蛋白含量为 1 7 31± 1 34g/1 0 0ml,心肌肌红蛋白含量为 741± 67nmol/g ,骨骼肌肌红蛋白含量为61 7± 2 7nmol/g ,明显高于世居高原的地面动物。     

基于肌红蛋白模拟酶活性的测定研究

根据肌红蛋白所具有的过氧化物模拟酶性质催化过氧亚硝酸氧化酪氨酸,在实验选定的最佳反应条件下,体系的荧光强度与肌红蛋白浓度在1.00×10 8～5.00×10 7mol/L范围内呈良好的线性关系,从而建立了一种测定肌红蛋白含量的新方法,该方法简单,灵敏度高,检出限为6.30×10 9 mol/L.     

高原鼢鼠心肌和骨骼肌肌红蛋白含量的季节变化

为了研究高原鼢鼠肌红蛋白在不同季节的变化,用分光光度法测定了肌红蛋白含量。结果显示:在春季、夏季和秋季,高原鼢鼠心肌肌红蛋白含量分别为1 001.25±103.25(nmol/g),726.50±54.70(nmol/g),767.33±88.73(nmol/g);骨骼肌肌红蛋白含量分别为781.85±100.98(nmol/g),672.15±108.88(nmol/g),676.80±77.31(nmol/g)。春季高原鼢鼠心肌肌红蛋白和骨骼肌肌红蛋白含量显著高于夏季和秋季(P<0.05)。说明随着洞道氧气和二氧化碳浓度的季节性变化,高原鼢鼠通过改变肌红蛋白含量,来维持机体的氧平衡。     

牦牛和黄牛睾丸组织Prdm9基因cDNA序列的比较

为比较牦牛与普通牛Prdm9基因的序列特征,采用RT-PCR和3’-RACE方法,从牦牛和黄牛睾丸组织总RNA中分别获得Prdm9基因的部分cDNA序列,经过拼接后获得了牦牛和黄牛Prdm9基因的完整cDNA序列,长度分别为2580bp和2421bp,编码序列长度均为2091bp,共编码696个氨基酸,氨基酸序列相似性为98.56%.分析显示,牦牛和黄牛Prdm9基因开放阅读框有10个核苷酸同义突变和10个单核苷酸多态性(SNPs),并导致10个氨基酸差异,其中4个位于锌指域.研究结果表明,牦牛和黄牛Prdm9基因结构特征类似,但在锌指域存在一些氨基酸差异,可能会影响该基因的功能.     

关于肌红蛋白能带结构的研究

以肌红蛋白为基础,采用赝势理论和其他近似方法提出了一种描述蛋白质半导性的电子模型,所得禁带宽与Eley的实验值基本一致,并据计算结果绘出了其能带图．     

含1/4野血犊牦牛血红蛋白、肌红蛋白含量的测定

用常规方法对含野血犊牦牛血液中Hb、心肌和骨骼肌中Mb进行测定,结果:Hb由1日龄的(107.7±4.12)g/L增加到6月龄的(138.6±3.9)g/L,心肌和骨骼肌中Mb由1日龄的(432.97±44.05)nmol/g(、296.88±23.03)nmol/g分别增加到6月龄的(605.25±82.34)nmol/g、(413.20±64.81)nmol/g。表明血液中Hb和心肌、骨骼肌Mb含量与含野血牦牛适应高原低氧环境密切相关。     

牦牛的繁殖特性

本文根据作者从事牦牛研究30多年观测研究的结果,汇集有关的研究报道,比较系统地概述了牦牛的繁殖特性。     

九龙牦牛CAST基因部分序列的克隆及其表达差异研究

根据牛钙蛋白酶抑制蛋白（Calpastatin, CAST） 设计并合成一对引物,从九龙牦牛肌肉组织提取总RNA,利用RT-PCR扩增获得九龙牦牛CAST基因部分片段,利用SQRT-PCR技术检测九龙牦牛各组织中CAST mRNA的表达差异．结果,成功克隆九龙牦牛CAST部分cDNA序列485bp,获得GenBank登录号为FJ483833;用DNAman软件分析发现九龙牦牛CAST基因与普通牛的核苷酸同源性依次为99％;SQRT-PCR组织表达检测表明,CAST基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、脂肪中均表达,在心脏中表达最高,在脂肪组织中表达最低．     

180日龄高原牦牛和平原黄牛肺泡组织结构的比较研究

利用光镜、透射电镜和计算机图像分析系统对180日龄高原牦牛肺泡组织结构进行观测,并与180日龄平原黄牛的肺泡组织结构做比较。结果表明：180日龄高原牦牛肺泡组织结构与180日龄平原黄牛的基本相同,但180日龄高原牦牛肺泡表现出快速发育的结构特点。180日龄高原牦牛单位面积内肺泡面积显著大于180日龄平原黄牛相应值（P〈0.05）,但两组动物肺泡隔厚度、单个肺泡面积和单位面积内肺泡数之间差异均不显著（P〉0.05）。180日龄高原牦牛气-血屏障的算术平均厚度和调和平均厚度均显著小于180日龄平原黄牛（P〈0.05）,表现出高原牦牛气-血屏障适应高原低氧的组织学结构特点。     

牦牛核苷酸序列资源的调查

目的了解牦牛核苷酸序列的资源状况,为今后的相关选题和研究提供重要参考.方法根据GenBank的序列记录,从登录号、记录名称、序列长度、DNA/mRNA、接受日期、完整/不完整编码区序列、递交机构7个项目进行统计,分析数据量和增长率、数据的递交机构、覆盖的基因和区域、包含完整CDS的记录4个方面的情况.结果从1995年至2005年,共有19个机构递交了相关序列,总碱基数达160321 bp,这些序列覆盖了65种不同基因或区域.     

豇豆钙调蛋白cDNA的克隆及序列分析

从豇豆成熟叶片中提取总RNA,反转录合成cDNA第一链,根据钙调蛋白结构基因两端保守序列设计引物,PCR扩增豇豆钙调蛋白基因,克隆到T-easy载体上并测定了其全序列.序列分析结果表明,豇豆钙调蛋白基因由450个核苷酸组成,编码150个氨基酸.与已知的多种植物钙调蛋白基因相比有很高的相似性,核苷酸序列相似性在80%以上,编码的氨基酸序列相似性在90%以上.     

厚壳贻贝足腺cDNA文库的构建及部分EST序列分析

为获得厚壳贻贝足腺组织的EST序列标签以及可能的功能基因序列,以pCMVsport6质粒为载体构建了高质量的厚壳贻贝足腺组织cDNA文库,文库滴度为1.31×107pfu/mL,重组率为98%,平均插入片段为1.3kb.通过对文库部分克隆的序列测定,获得了11个新基因和17个功能基因,其中包括部分与厚壳贻贝足丝相关的基因.厚壳贻足腺组织cD-NA文库的成功构建为将来筛选与厚壳贻贝足丝蛋白相关的新基因,系统研究其黏附机制奠定了基础.     

胀果甘草查尔酮合成酶基因cDNA的克隆及序列分析

为进一步利用基因工程手段调控甘草黄酮的合成,通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,从胀果甘草愈伤组织中克隆查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)基因的cDNA,运用DNAMAN软件对序列进行分析,运用PHYLIP 3.67软件绘制系统进化树.克隆得到的基因片段全长为1 170 bp,包含1个完整的开放阅读框架(ORF),编码1个由389个氨基酸残基组成的多肽.该基因片段与紫花苜蓿、大豆、豌豆等几种豆科植物的CHS核苷酸同源率高达80%以上,氨基酸同源率高达90%以上.表明克隆得到了胀果甘草chs基因cDNA,序列提交GenBank注册,序列号为EU706287.     

全长cDNA文库构建方法及应用研究

构建全长cDNA文库是获得大量基因全序列信息的有效途径,也是进行功能基因组研究的一条经济、快速的途径,它克服了常规cDNA文库的缺点,极大地推进了功能基因组的研究,尤其是对于那些因基因组庞大而未能进行全基因组序列测定的生物来说更为重要．全长cDNA文库的研究在不断发展,几种文库构建方法已经建立,并得到了较为广泛的应用．本文重点阐述了全长cDNA文库的构建方法,对各种方法进行了分析和比较;同时对全长cDNA文库的应用也作了介绍．     

人胚肾细胞总cDNA的分子克隆

用盐酸胍法和寡聚(dT)-纤维素亲和层析法从人胚肾细胞中提取了poly(A)-RNA,该poly(A)-RNA经麦胚无细胞体系测定其体外翻译活性,~3H-亮氨酸掺入量为空白对照的11.5倍。以此poly(A)-RNA为模板,合成了人胚肾细胞总cDNA,并用多聚物加尾法,与pUC19质粒重组,转化到E, Coli JM107中,进行分子克隆,其转化效率约为2×10~4克隆子/μg cDNA。     

人肿瘤坏死因子cDNA衍生物在大肠杆菌中的表达及活性测定

应用基因工程方法构建了含人肿瘤坏死因子ＣＤＮＡ衍生物的重组体．转化大肠杆菌后酶切鉴定．转化菌经摇瓶培养及温度调控，获得高效表达．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，表达的ＴＮＦ分子量约为１７ｋＤ，蛋白量约为菌体可溶性蛋白的２０％．用Ｌ９２９细胞毒性测定法测得菌液ＴＮＦ的表达为２×１０８ｕ／ｍＬ．抗ＴＮＦ的单克隆抗体可以中和大肠杆菌表达的ＴＮＦ对Ｌ９２９细胞的细胞毒性．     

加工番茄多聚半乳糖醛酸酶(PG)基因的cDNA克隆

以加工番茄８７－５为材料,运用反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）技术成功地将ＰＧ基因的ｃＤＮＡ序列克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上,并利用酶切及ＰＣＲ进行了初步鉴定。