一种快速高效分离和纯化重组腺病毒伴随病毒载体的方法

利用２型腺病毒伴随病毒（ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ２,ＡＡＶ－２）能够抵抗氯仿的特性,采用“氯仿处理－ＰＥＧ／ＮａＣｌ沉淀氯仿抽提”３个步骤分离,浓缩和纯化重组腺病毒伴随病毒（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ,ｒＡＡＶ）,整个纯化过程可在４ｈ内完成,最终从５个转瓶生长的４＊１０＾９个载体生产细胞中可得到５＊１０＾３病毒颗粒／ｍＬ,ＳＤ     

双偶氮苯掺杂液晶在光场下的Freedericksz转变

合成表征了双偶氮苯酚（ＤＡＰ）,研究了掺杂有少量ＤＡＰ的５ＣＢ液晶体系在光场下发生Ｆｒｅｅｄｅｒｉｃｋｓｚ转变的情况,发现掺入染料后激励光场强度显著降低,对于１２．５μｍ厚沿面排列掺杂液晶发生Ｆｒｅｅｄｅｒｉｃｋｓｚ转变的光强为０．３ｍＷ／ｍｍ＾２,比纯５ＣＢ液晶下降３个数量级。这一新现象主要是由于光场作用下染料分子的顺反异构导致液晶分子重新取向,并且产生较强的非线性效应,对于研究光场下的非线性光     

Pfu酶基因的克隆、表达、纯化及长距离PCR的研究

用ＰＣＲ方法从Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆｕｒｉｏｓｕｓ的总ＮＤＡ扩增出了含有Ｐｆｕ ＤＮＡ ｐｏｌＡ基因的２．３ｋｂ片段,并将该基因克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ载体。用ＮｃｏＩ和ＸｈｏＩ对重组质粒ｐＴ－ｐｆｕ进行了酶切。并将ｐｆｕ ｐｏｌＡ基因捶 入表达载体ｐＥＴ－３ｄ－Ｘ。     

羰基钴催化乙基迁移反应机理的从头算研究

采用有效核势能进行（ＥＣＰ）从头算方法,研究了羰基钴催化的氢化反应循环中的乙基迁移反应机理,在ＨＦ／ＬＡＮＬ２ＤＺ水平优化得到了反应基态势能面的反应物,过渡态和产物的几何构型、对反应位能剖面的各驻点进行了ＭＰ２／ＬＡＮＬ２ＤＺ／ＬＡＮＬ２ＤＺ相关能校准和零点能校准,理论计算结果表明,乙基迁移反应是经过一个三元环过渡态而进行的,反应位垒力２８．８９ｋＪ／ｍｏｌ（ＭＰ２／ＬＡＮＬ２ＤＺ／ＬＡＮＬ２ＤＺ     

genistein抑制人TNF-α诱导的猪内皮细胞对人单核细胞和自然杀伤细胞的黏附

研究了蛋白质酷氨酸磷酸化在ｈＴＮＦ－α诱导猪主动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）黏附分子Ｅ－选择素（Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ）和血管细胞黏附分子－１（ＶＣＡＭ－１）表达以及在增强人外周血单核细胞（ＰＢＭｏ）和自然杀伤细胞（ＰＢＮＫ）黏附中的作用,以选择性的蛋白质酷氨酸激酶（ＰＴＫｓ）抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ预处理ＰＡＥＣ,剂量依赖性也抑制了ｈＴＮＦ－α增强的ＰＡＥＣ对ＰＢＭｏ和ＰＢＮＫ的黏附。这种抑制作用发生在     

VK3诱导的植物细胞凋亡及其机理

ＶＫ３可诱导烟草细胞的凋亡,表现为：染化体凝集,凋亡小体形成,ＤＮＡ末端断裂、降解形成梯状电泳,此过程伴随特异核酸酶的激活,其活性依赖于Ｃａ＾２＋,Ｍｇ＾２＋,可被Ｚｎ＾２＋和ＥＤＴＡ（Ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ）抑制。ＤＮＡ降解可被ＤＥＶＤ（Ａｃ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－ａｌｄｅｈｙｄｅ）抑制。核纤层蛋白降解为３５ｋｕ片段,ＤＥＶＤ,ＰＭＳＦ（Ｐｈｅｎｙｌｍｅｔ     

CDK4反义RNA对乳腺癌细胞增殖及cyclinD1,cyclinE和CDK2表达的影响

利用反义ＲＮＡ抑制乳腺癌细胞中ＣＤＫ４基因的表达,观察分析了此基因与癌细胞增殖速率,成瘤性以及与ｃｙｃｌｉｎＤ１,ｃｙｃｌｉｎＥ和ＣＤＫ２表达的相关性,当ＣＤＫ４表达受到抑制后,细胞的增殖速率和致瘤性明显降低,显示出ＣＤＫ４在乳腺肿瘤发生与发展中的重要作用,ｃｙｃｌｉｎＥ基因的表达水平有较大程度的下降,ｃｙｃｌｉｎＤ１和ＣＤＫ２基因表达水平变化较小,可以推测ｃｙｃｌｉｎＥ的表达依赖于ＣＤＫ４的诱导     

多倍体山羊草物种中高分子量麦谷蛋白亚基的组成与其编码基？…

山羊草属（Ａｅｇｉｌｏｐｓ）是小麦属（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ）的近缘属之一，山羊草属物种的种子中含有与普通小麦高分子量麦谷蛋白亚基（ＨＭＷ ｇｌｕｔｅｎｉｎ ｓｕｂｕｎｉｔ）结构相似的贮藏蛋白，通称为山羊草高分子量麦谷蛋白亚基。利用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析了４种多倍体山羊草物种所含高分子量麦谷蛋白亚基的组成，之后又通过比较各种ＰＣＲ扩增方法，以偏凸山羊草（Ａｅ。ｖｅｎｔｒｉｃｏｓａ）为材料建立了从多倍体山羊     

Rh(100)上Sm膜及Sm/Rh表面合金的结构和性质

应用ＡＥＳ,ＬＥＥＤ,ＸＰＳ和ＴＤＳ研究了稀土金属Ｓｍ室温下在 Ｒｈ（１００）表面上的生长过程．发现室温下Ｓｍ膜的生长服从Ｓｔｒａｎｓｋｉ－Ｋｒａｓｔａｎｏｖ生长模式,ＸＰＳ证明为三价的“金属态” Ｓｍ．但Ｓｍ膜经 ９００Ｋ高温退火后可形成Ｃ（５２~（１／２）×２~（１／２））Ｒ４５°和 Ｃ（２×２）超结构的有序表面合金;同时,芯能级 Ｓｍ３ｄ５／２向高结合能方向位移了０．７ｅＶ,表明有电子进一步由 Ｓｍ向衬底 Ｒｈ传递,导致在 Ｒｈ上吸附的 ＣＯ分子的热脱附峰温增加．     

CF3自由基的共振增强多光子电离研究

通过ＣＦ４气体直流脉冲放电产生ＣＦ３自由基,研究了３０９－３２５ｎｍ,波长范围内ＣＦ３自由基的（２＋１）共振增强多光子电离谱,初步确定了４ｐσ（＾２Ａ″２）和４ｐπ（２Ｅ’）２个Ｒｙｄｂｅｒｇ态的带源分别为６２７７７和６２６１４．４ｃｍ＾－１;相应的量子亏损值分别为０．９７和０．９５。并由振动带分析,获得了上述２个Ｒｙｄｂｅｒｇ态的全对称伸缩振动模和ＯＰＬＡ模的振动频率。实验表明：该实验方法对研究     

双核锰配合物[(bipy)2Mn2(μ-O)(μ-Ac)2(H2O)2](ClO4)2的合成、晶体结构及性质

ＭｎＡｃ_３·２Ｈ_２Ｏ在ｐＨ＝４．０的ＨＡｃ－ＮａＡｃ的缓冲水溶液中和２，２＇－联吡啶（ｂｉｐｙ）反应，制得了双核锰（Ⅲ）配合物［（ｂｉｐｙ）_２Ｍｎ_２（μ－Ｏ）（μ－Ａｃ）_ ２（Ｈ_２Ｏ）_２］（ＣｌＯ_４）_２该配位化合物的 Ｘ射线单晶衍射表明，该晶体属单斜晶系，空间群 Ｃ２／Ｃ，晶胞参数： ａ＝ ３．４０８ ２（７） ｕｍ， ｂ＝ ０．８６４ ４（２） ｕｍ， ｃ＝ ２．１７４ ９（４） ｕｍ，β＝１０５．１２°，Ｚ＝８．其紫外可见光谱在４００和６００ ｎｍ之间有两个非常强的峰，这和一些从生物体中提取的含锰过氧化氢酶及含锰核糖核苷酸还原酶的电子光谱相似．循环伏安实验说明，此配合物在乙腈溶液中经历了一个半可逆的一电子氧化和还原。     

三氯乙酸盐对莱因衣藻类囊体EPR信号SignalⅡslow和SignalⅠ的影响

植物光系统Ⅱ反应中心Ｄ２多肽第１６０位酪氨酸残基（Ｙ_Ｄ）氧化可以产生电子顺磁共振（ＥＰＲ）信号 Ｓｉｇｎａｌ Ⅱ_（ｓｌｏｗ．）高浓度的三氯乙酸盐（ＴＣＡ）短时间处理莱因衣藻（Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ）类囊体可以直接促使氧化态的 Ｙ_Ｄ（Ｙ_Ｄ）迅速还原,淬灭 Ｓｉｇｎａｌ Ⅱ_（ｓｌｏｗ·）这种作用具有浓度和时间效应．ＴＣＡ处理引起类囊体膜上包括３个放氧外周多肽在内的部分多肽脱落．在衣藻光系统Ⅱ反应中心三维分子模型的基础上对Ｙ_Ｄ周围的氨基酸微环境进行了分析,认为Ｙ_Ｄ周围相对较强的疏水性微环境可能是 ＴＣＡ影响 Ｙ_Ｄ氧化还原状态的前提．同时, ＴＣＡ处理还能稳定源于光系统 Ⅰ中氧化态的反应中心色素双分子 Ｐ_（７００）~＋的 ＥＰＲ信号 Ｓｉｇｎａｌ　Ⅰ,抑制其衰减．     

末次间冰期黄土高原粉尘事件及其与北大西洋寒冷事件的对比

通过对我国黄土高原２个末次间冰期剖面的石英粒度分析,发现的这一时段由粗粒含量增加所指示的重复粉尘堆积事件有九次：ＤＥ１（７０－７１ｋａ）、ＤＥ２（７４．５－７５ｋａ）、ＤＥ３（８１．３－８３ｋａ）、ＤＥ４（９０－９１）ｋａ）、ＤＥ５（１０１－１０２ｋａ）、ＤＥ６（１０６－１０７．７ｋｇ）、ＤＥ７（１１０ｋｇ）、ＤＥ８（１１３．５－１１５ｋａ）、ＤＥ９（１１９－１２１．６ｋａ）并且和东北大西洋Ｖ２９     

具有AAV载体包装功能的重组HSV的产生

腺病毒伴随病毒（ＡＡＶ）载体有望成为理想的基因治疗载体,常规的共转染法难以大规模制备重组ＡＡＶ（ｒＡＡＶ）,本研究生产了一种具有ｒＡＡＶ包装功能的重组单纯疱疹病毒（ｒＨＳＶ）,为ｒＡＡＶ的大规模制备提供了新的思路。采用一套含有１型单纯疱疹病毒（ＨＳＶ－１）全基因组的粘粒系统（Ｄａｖｉｓｏｎ ＡＪ ｅｔ ａｌ,１９９３）,该系统含有５个粘粒,依次称为ｃｏｓ４８,ｃｏｓ２８,ｃｏｓ６,ｃｏｓ１４和ｃｓ     

龙虾D-甘油醛-3-磷酸脱氢酶与辅酶类似物结合的晶体学

与辅酶不同,辅酶类似物ＡＤＰ－ｒｉｂｏｓｅ和ＳＮＡＤ与Ｄ－甘油醛－３－磷酸脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）的结合不表现协同性．用共晶方法和座滴汽相扩散技术培养出中国南海龙虾（Ｐａｌｉｎｕｒｕｓ ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ）ＧＡＰＤＨ与ＡＤＰ－ｒｉｂｏｓｅ和ＳＮＡＤ复合物的晶体．Ｘ射线衍射数据分析表明它们的空间群均为Ｃ２,并具有类似晶胞参数,分别为 α＝ １５．２８０ ｎｍ, ｂ＝ １０．０３５ ｎｍ, ｃ＝ １２．８３１ ｎｍ, β＝１１０．２８°和α＝１５．３４１ ｎｍ,ｂ＝１０．０５１ ｎｍ,ｃ＝１２．８４４ｎｍ,β＝１１０．４８°．估算不对称单位合１个分子即４个亚基．与ＧＡＰＤＨ全酶和酶蛋白晶体比较,属于不同晶型．这个结果提示着辅酶类似物的结合产生了比较大的酶构象变化,而且这个构象变化不同于辅酶结合引起的构象变化．旋转函数计算结果表明,这两种辅酶类似物复合物的四聚体也具有明显的２２２分子对称性．它们的结构分析并与全酶和酶蛋白比较将为了解酶的协同性机理提供一些有益的线索．     

苯氧烷胺类α1-肾上腺素受体拮抗剂三维定量构效关系

运用比较分子力场分析法（ＣｏＭＦＡ）对已知活性参数（ＩＣ５０）的降压新药ＤＤＰＨ及其衍生物进行了三维定量构效关系研究。以ＤＤＰＨ单晶为模板,比较了不同的计算电荷的方法和网格设置对构建ＣｏＭＦＡ方程的影响。所得最佳模型的交叉验证相关系数（ｑ＾２）为０．４８１,回归系数（Ｒ＾２）和标准误差分别为０．９９７和０．１０２。研究结果显示立体场比静电场对活性的影响更大。该方程不仅可以帮助推测药物与受体的结合     

TCNQ 分子在Cu(111)面上吸附结构的电化学扫描隧道显微技术

用电化学扫描隧道显微技术（ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｔｕｎｎｅｌｉｎｇ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ,ＥＣＳＴＭ）研究了０．１ｍｏｌ／Ｌ ＨＣｌＯ４溶液中ＴＣＮＱ分子（ｔｅｔｒａｃｙａｎｏｑｕｉｎｏｄｉｍｅｔｈａｎｅ）在Ｃｕ（１１１）表面的吸附结构。结果表明,ＴＣＮＱ分子在Ｃｕ（１１１）表面形成有序的（４＊４）结构,分子的π结构,分子的π电子与Ｃｕ表面相互作用,形成“平卧”的水平     

含RGD环六肽与整合素蛋白α_(Ⅱb)β_3的结合反应

ＲＧＤ序列普遍存在于细胞外基质蛋白中,并能为许多整合素蛋白所识别．利用 ＥＬＩＳＡ,ＳＰＲ等技术,对表面固定的人工合成生物素－含 ＲＧＤ环六肽［ｃｙｃｌｏ（－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ－）］与人血小板整合素蛋白α_（Ⅱｂ）β_３的结合能力进行了检测结果表明,含ＲＧＤ环六肽与生物素基团之间的间臂长度在 １．４８～２．２ ｎｍ时, ＲＧＤ序列才能有效进入α_（Ⅱｂ）β_３以头部的反应中心并发生结合反应;反应的平衡解离常数为 １．１μｍｏｌ／Ｌ．为在固体表面研究整合素蛋白介导的细胞吸附过程提供了一个理想的模型系统．     

β-环糊精与对苯二酚包合物的合成与晶体结构

合成了环糊精与对苯二酚包合物［（Ｃ_（４２）Ｈ_（７０）Ｏ_（３５）·（Ｃ_６Ｏ_２Ｈ_（６））_３·（Ｈ_２Ｏ）_（２１．２）·（ＣＨ_３ＯＨ）_２］,并用Ｘ射线单晶衍射法测定了晶体结构．该晶体属三斜晶系,空间群为 Ｐ１,晶胞参数：ａ＝ １．５５０ ０（１） ｕｍ,ｂ＝ １．５５３ ６（１） ｕｍ, ｃ＝ １．８２４ ６（１） ｕｍ, ａ＝ １１３．１７（２）°,γ＝ ９９．１２（２）°, γ＝ １０３．３７（３）°, Ｖ＝ ３．７７３ ９（４）ｕｍ～３, Ｚ＝ １; Ｄｃ＝ １．３４３ ｇ／ｃｍ~３, μ＝ ０．１２４ ｍｍ~（－１）, Ｆ（０００）＝ １５９４, Ｒ＝ ０．０７９ ５, Ｓ＝ ０．９６３ ９．晶体结构测定表明,客体分子在主体分子空腔内的位置以及主－客体包合物稳定存在的一个重要因素是客体分子的极性基团的溶剂化程度．     

CⅡTA反义RNA对HLAⅡ类分子表达的仰制作用

为研究ＭＨＣⅡ类基因转录活化因子（ＣⅡＴＡ）对人类白细胞抗原（ＨＬＡ）Ⅱ类分子表达的影响,用ＲＴ－ＰＣＲ方法从Ｒａｊｉ细胞中克隆到Ｃ Ⅱ ＴＡ基因ｃＤＮＡ ５＇端片段,构建成ＣⅡＴＡ反义ＲＮＡ真核表达载体 ｐｃＤＮＡ－Ⅱ,基因转移 ＨＬＡ Ⅱ类分子诱导型表达的 ＨｅＬａ细胞．经 ＩＦＮ－γ诱导,发现稳定转染ｐｃＤＮＡ－Ⅱ的细胞中ＨＬＡ－ＤＲ,ＤＰ和ＤＱ的表达均较转ｐｃＤＮＡ３空载体的细胞有显著下降,而 ＨＬＡⅠ类分子的表达不受影响．实验证明 ＣⅡ ＴＡ反义 ＲＮＡ对 ＨＬＡ Ⅱ类分子表达具有显著的抑制作用,为进一步开展低免疫原性的细胞移植提供了依据．