梅毒螺旋体重组抗原在血清学诊断中的应用

对有关人群进行梅毒筛检是控制和预防梅毒传播的重要措施之一.目前,检测梅毒螺旋体特异抗体通常使用TPHA法和FTA-ABS法,近年来则逐步采用ELISA检测梅毒螺旋体IgM和IgG抗体,用于大量标本检测和献血者的筛查.由于梅毒螺旋体体外培养尚未成功,要获得性质均一、稳定、充足的抗原很困难,因此,抗原的来源成为制约这些诊断方法应用的关键问题.基因工程重组抗原不仅为抗原来源提供了一条主要途径,而且还能克服制备天然抗原时不可避免的兔蛋白污染.近年来,被逐渐应用于多种血清学诊断方法的研究和相关试剂盒的开发.     

口蹄疫病毒抗原表位的编码序列在大肠杆菌中表达

为在大肠杆菌和牛分枝杆菌 BCG中表达口蹄疫病毒 ( Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV) O、A、C三种血清型抗原表位的编码序列 ,我们优化筛选了这三种血清型主要抗原表位的序列 ,设计合成了其编码 DNA序列 ,并将此序列克隆到细菌表达载体 p QE4 1中 ,转化大肠杆菌 M1 5 [p REP4 ],经 IPTG诱导 ,在 SDS-PAGE中得到 34 k D的小鼠二氢叶酸还原酶( DHFR)基因与 FMDV的三型抗原表位编码序列的融合表达的蛋白质带 .     

庆阳市献血者梅毒螺旋体感染现状与趋势分析

了解庆阳市无偿献血者中梅毒螺旋体的感染情况和流行人群属性特征.研究近7年庆阳市献血人群梅毒螺旋体(TP)抗体的检测结果和流行病学趋势分析,并对献血者归队意愿进行调查问卷.2012-2018年从126218人份献血者中筛查出TP抗体阳性样本1193人份,献血者TP抗体阳性率为9.45％‰,TP抗体合并感染状况中TP抗体分...     

PRRSV主要蛋白结构分析及其抗原表位的研究

【目的】对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要蛋白,即GP5,GP4,GP3,GP2的二级结构进行分析.【方法】在线利用DNA Star软件分析GP2~GP5蛋白的抗原表位,以指导未来的疫苗设计.【结果】:1GP2~GP5的理论等电点PI值分别为10.12,8.42,8.05,8.41,GP2的PI值明显高于GP3~GP5的PI值(p0.05),而在GP3~GP5之间没有明显差异(p0.05);2GP4蛋白和GP5蛋白高抗原指数的基序数量多,形成抗原表位的可能性最大,是设计疫苗的重要靶点.【结论】高致病PRRSV JXA1株的GP4蛋白和GP5蛋白高抗原指数的基序数量多,形成抗原表位的可能性最大,是设计疫苗的重要靶点.     

HPV-58型E7蛋白抗原模拟表位的筛选及分析

利用该实验室成熟的噬菌体随机十二肽库筛选平台,对HPV-58型E7蛋白单克隆抗体株4C4a、6C7a进行3轮亲和筛选,得到2组、各8个阳性噬菌体克隆.阳性噬菌体氨基酸序列用以模拟单抗(靶蛋白)特异性识别的HPV-58型E7蛋白的抗原表位.将测得的阳性噬菌体多肽序列及HPV-58型E7蛋白氨基酸序列进行生物信息学分析后,进行线性序列比对及构象性表位预测及分析.构象性表位的预测借力于EpiSearch Server和Pepitope Server,对构象性表位匹配及簇的寻找提供有力支持,也为早期诊断及研制多肽疫苗提供参考.     

细粒棘球绦虫AgB1抗原表位的生物信息学预测

 以细粒棘球绦虫AgB1基因序列为基础,采用PredictProtein软件预测其编码蛋白的二级结构;应用在线预测软件Bcepred、Abcpred、IEDB及SYFPEITHI等对细粒棘球绦虫AgB1的B细胞表位和T细胞表位进行预测。结果提示,AgB1抗原蛋白存在可以构成抗原表位的区域,经软件分析,分值高的B细胞表位区域:2~9、15~20、22~35和41~52氨基酸序列;T细胞表位区域:3~12、26~33、34~44和52~61氨基酸序列。研究运用生物信息学确定AgB1抗原的4个B细胞优势表位和4个T细胞优势表位,对进一步研究AgB1的抗原性和研发更有价值的免疫诊断方法具有重要意义。     

鸡新城疫病毒HN蛋白多表位抗原的表达与免疫原性研究

有效抗原及表位的预测和筛选是疫苗研究的基础,在对鸡新城疫病毒HN蛋白抗原表位预测的基础上,对多表位抗原进行表达与免疫原性测定。根据生物信息学表位预测方法获得的家禽新城疫病毒抗原表位,利用PCR技术合成基因,构建pBVIL1-HN重组载体,转化大肠杆菌HB101,进行基因工程表达;经纯化蛋白后免疫小鼠,抗体滴度用酶联免疫吸附方法测定,确定抗原的免疫原活性。结果表明,多表位抗原基因经测序结果正确,融合基因在大肠杆菌得到高效表达,电泳纯融合多表位抗原经三次免疫得到抗血清,抗体滴度为1：8000。鸡新城疫病毒HN蛋白多表位抗原得到高效表达,且具有良好的免疫原性。     

以抗的表位为基础的基因免疫

基因免疫（ｇｅｎｅ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）是指通过将目的基因克隆于真核表达载体后直接注入机体,表达相应抗原,诱生免疫应答。１９９０年,Ｗｏｌｆｆ等在研究ＤＮＡ的化学损伤及修复时偶然发现：肌肉注射含有编码虫荧光素酶（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）报告基因的裸露质粒ＤＮＡ时,在注射局部有该报告基因的表达及酶活性表现。此后的研究发现表达的蛋白可在机体内诱生特异性的体液免疫应答。１９９３年,Ｕｌｍｅｒ等半流感病毒ＮＰ表达质粒注射入小鼠骨骼肌,不仅检测到特异性ＩｇＧ抗体,而且免疫小鼠的脾细胞在体外可特异杀伤Ｎ…     

嗜铬粒蛋白N端衍生肽段的表达及其抗菌活性分析

通过基因工程方法表达了重组CGA1-76、CGA18-76、CGA18-66和CGA31-76,并利用孔穴琼脂扩散法检测对大肠杆菌和枯草杆菌的抑制作用。结果表明:CGA N端片段对枯草杆菌和大肠杆菌表现出不同的抑制作用;CGA1-76抑菌作用最强,抑菌圈直径达到22mm,而CGA18-66和CGA31-76的抑菌圈直径不到CGA1-76的一半,CGA18-66没有抑菌圈。因此,推测CGA抗细菌活性中心可能在CGA N端1~17个氨基酸区域。     

猪圆环病毒2型ORF2基因及片段的原核表达

目的表达猪圆环病毒2型ORF2抗原,为研制猪圆环病毒2型血清学诊断方法以及生物制品生物安全性检验,提供技术支持。方法根据猪圆环病毒2型(PCV2)LC株序列,设计合成5对引物,采用PCR方法从全序列重组质粒PCV2-LC中扩增出了ORF2基因和4个不同ORF2基因片段,分别将其克隆到原核表达载体PET-32a上,再分别将各个重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21中,用终浓度1 mmol/LIPTG诱导。结果表达产物以包涵体的形式存在,经Western-blot检测表明,表达的重组蛋白ORF2b、ORF2c、ORF2d能够被PCV2阳性血清所识别,具有良好的抗原性。表达的重组蛋白为ELISA诊断试剂盒的研制奠定了基础。     

血小板反应素-1活性片段的克隆与表达

选择两段血小板反应素（TSP-1）中抑制血管再生的活性片段，设计两对引物，使用RT-PCR的方法从人血细胞中进行克隆并对获得片段进行测序验证．克隆片段大小分别为723和522bp，命名为聪P-1-1和聪P-1-2．利用原核表达载体pET-29a获得大肠杆菌重组子，重组子经过IPTG诱导以包涵体的形式表达相应的多肽片段．再对包涵体进行体外溶解、纯化，得到了目的多肽．     

Observation and Analysis of in vitro Expression of Mouse Heart Nuclear DNA Fragments by AFM

Using AFM,we observed linear chain-like complexes formed by some specific proteins and the multi-mRNAs during the in vitro expression of some active genes on the DNA fragments. The LDH mRNA in the multi-mRNA complex can in vitro translate LDH. Via AFM, we also discovered that nmRNA prepared from heart muscles, along with some specific proteins can form linear chain-like nmRNA complexes in which LDH mRNA can also translate LDH in vitro. Our work shows the prospective application of AFM in the research of the biological reaction of the active genes on the DNA fragments.     

基于运动轨迹分析的储罐爆炸碎片拦截方法研究

对于已建成投产使用的工厂或规划用地无法满足爆炸碎片防护所需的安全距离时,考虑在事故源和目标之间用拦网的方式来降低所需的防护距离.在碎片抛射分析的基础上,利用蒙特卡罗方法计算出碎片从抛射到落地之间的轨迹,进而得到爆炸碎片在有拦网的情况下碰撞周围目标的概率.研究结果表明:碰撞概率随着拦网高度的增加呈现严格的线性衰减关系;较低处的拦网对碎片的拦截效果较差.因此,在实际布局时,为了给应急逃生留出空间,同时节约拦截成本,可以从某一高度开始设置满足需要的拦网.     

SARS冠状病毒基因片段变异分析

采用基因序列和生物信息分析法，研究了SARS-CoV复制酶基因中4个片段。结果发现，片段Ⅰ与已报道的SARS冠状病毒ZJ01有2个位点不同，片段Ⅲ与CUHK-W1、CUHK-Su1O、HKU-39849和Hong-Kong各有1个位点的差别；片段Ⅳ与GZ01间有1个位点的变化。同时对已公布的17个全基因组序列进行比对分析。可找到共137个变异位点，其中仅出现1次的变异位点119个，间约信息位点18个。     

磨削温度场通式及其计算机仿真分析

在分析并给出磨削温度场积分解析通式的基础上,编程实现了磨削温度场通式的计算机仿真·用户可以方便地通过修改仿真软件界面的磨削参数对话框中参数来模拟并自动生成各种磨削条件下的磨削温度分布图及主要参数对温度的影响规律曲线·这为定量地分析包括断续磨削温度在内的各参数对磨削温度的影响提供了依据,并为生产实践中正确设计诸如开槽砂轮的沟槽参数及合理选择磨削用量等提供了一定的参考依据·给出了一些算例和不同磨削工艺参数对磨削温度的影响规律·     

爆炸碎片抛射速度及飞行轨迹分析方法

通过对爆炸碎片生成特点及飞行规律的分析,建立了爆炸碎片速度及飞行轨迹分析方法。根据爆生产物膨胀做功原理及多方过程状态方程,推导了爆炸碎片抛射初速度计算公式;在爆炸碎片进行抛射飞行阶段后,根据碎片在重力及空气阻力作用下加速度变化规律,通过对飞行过程中加速度方程的推导及边界条件的确定,确定了爆炸碎片飞行轨迹及飞行速度的分析过程。该方法能够分析得到爆炸碎片影响范围、破坏性等相关信息,进而可以为定量分析爆炸碎片诱发多米诺效应奠定基础。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒SCM株ORF5基因抗原表位克隆表达及其免疫性研究

为鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒SCM株(PRRSV-SCM)囊膜糖蛋白GP5的免疫原性,利用RT-PCR方法从PRRSVSCM株ORF5中扩增大小为231bp的目的基因并构建表达载体PET32-GP5,将其转入大肠埃希菌Rosetta,运用IPTG通过条件优化诱导其表达.检测结果表明:最佳诱导条件为IPTG浓度1mmol/L在37℃下作用5h,表达大小约28kU的融合蛋白.通过Western-blot和间接酶联免疫吸附试验检测表达蛋白,结果显示该原核表达的融合蛋白可与PRRSV阳性血清发生反应,证明该蛋白具有免疫反应性.这为将来研制检测试剂盒以及后续研究PRRSV亚单位疫苗提供了重要依据.     

TRAIL与kallistatin联合表达载体的构建及抗肿瘤活性分析

为研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与组织激肽释放酶结合蛋白(kallistatin)联合用药的抗肿瘤作用,构建TRAIL与kallistatin双表达的重组质粒pAM-CAG-Kal-IRES-TRAIL,将重组质粒转染A549,LO-2,NCI-H446和Hela细胞,考察其抗肿瘤活性.实验结果表明:构建的双表达载体能同时表达TRAIL与kallistatin,且均能分泌至培养基中;TRAIL与kallistatin联合表达对肿瘤细胞活力的抑制作用明显增强,诱导肿瘤凋亡的作用也明显增强,说明联合表达TRAIL与kallistatin能够增强抗肿瘤活性.