同时检测小鼠微小病毒(MVM)和小鼠细小病毒(MPV)的荧光定量PCR的建立及应用

目的 建立同时检测小鼠微小病毒(MVM)和小鼠细小病毒(MPV)的荧光定量PCR方法,并进行初步应用。方法 比对NCBI上发表的MVM和MPV基因组序列,设计1对引物和探针,可同时检测MVM和MPV。考察MVM-MPV引物探针的特异性和灵敏度,并对178份清洁级小鼠粪便DNA样本进行检测。结果 MVM-MPV荧光定量PCR方法最佳线性范围为109～104拷贝/μL,标准曲线的线性关系良好,R2值可达0.99,灵敏度为101拷贝/μL,特异性强。应用MVM-MPV探针对178份小鼠粪便DNA检测,结果为2份阳性样本,经MVM、MPV特异性探针鉴定,2份阳性样本均为MPV感染。阳性样本经全基因组测序后与NCBI网站上MPV(NC_001630.1)序列比对,一致率为96%。结论 建立的MVM-MPV荧光定量PCR方法,能够有效快速地同时检出小鼠细小病毒和小鼠微小病毒。     

细小病毒与致癌蛋白质序列同源性比较佐证细小病毒无致癌潜力

在Micro Vax II及IBM/PC机上用Framis,Genepro软件,蛋白质、核酸序列数据库Swissprot,PIR,EMBL和Genbank,比较了H-1或MVM的四种蛋白质与现已报道的致癌蛋白质序列的同源性。结果表明,它们之间的配对百分数很低且是随机的,这可能是细小病毒没有致癌潜力的佐证。本实验室还初步证明PV MVM可以杀死经人Ha-ras与v-myc共转染大鼠胚胎成纤维细胞形成的转化细胞,这将为临床治疗抗放射线的人癌提供新途径。     

犬细小病毒单克隆抗体在治疗上的应用研究

本试验采用犬细小病毒单克隆抗体（ＣａｎｉｎｅＰａｒｖｏｖｉｒｕｓＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｙ，ＣＰＶＭｃＡｂ）对２８７例患细小病毒性肠炎的病犬，经股内侧肌肉注射进行治疗，取得令人满意的结果。１．在收治的２８７例病犬中，治愈２７９例，治愈率高达９７．２１％，尤其是小于３月龄的幼犬，治愈率高达９７．９２％，显著高于其他治疗方法的治疗效果。２．在收冶的２８７例病犬中，６月龄以下幼犬占９３．７３％。冬季发病犬占９２．６８％，说明本病主要发生于６月龄以下幼犬，冬季发病较多，其次为初春或深秋，夏季发病较少。３．在临床治疗中发现，发病一天的病犬仅注射ＣＰＶＭｃＡｂ，而不采取其他对症措施，病犬即可在２天内完全康复。发病３天以内的病犬２４１只，在注射ＣＰＶＭ＿－ｃＡｂ同时，结合对症措施，治愈２４Ｏ只，仅死亡１只。随病程延长，治愈率下降。另外，８８．５３％的治愈犬在注射ＣＰＶＭｃＡｂ４天内完全康复，说明采用ＣＰＶＭｃＡｂ治疗还可缩短病程。４，注射ＣＰＶＭｃＡｂ后７ｈ以内死亡的病犬，主要是由于发病后期，全身性衰竭、肠道广泛性出血、坏死和严重脱水，注射的ＣＰＶＭｃＡｂ未能起作用。３天后死亡的病犬，可能是由于ＣＰＶＭｃＡｂ虽     

犬细小病毒的诊治与预防

报告了犬细小病毒感染的临床症状，治疗技术，提出了预防措施。     

细小病毒抑瘤活性研究的历史与现状

细小病毒（PV）（包括自主性的及依存性的）有抗肿瘤活性。本文在介绍PV绵结构及理化性质、病毒复制后，阐述了PV与肿瘤的关系，即其对自发肿瘤及诱发肿瘤的抑制作用，特别虽本实验室多年来利用离体细胞培养系统广泛地测试了PVH－1及MVM抑制转化细胞及癌细胞活性得到的结果，对33株细胞及人癌（肝、肾）与癌周组织原代培养的细胞测得的抑瘤效应亦列于表内。PV抑瘤机理仍在分子水平上研讨之中，文中强调了非结构蛋白NS／rep的细胞毒作用，它可部分地阐明了PV的抗肿瘤机制。     

PCR法检测小鼠自身携带的细小病毒

小鼠是 2种细小病毒ＭＰＶ和ＭＶＭ的终宿生。它们均可感染淋巴细胞 ,抑制体内肿瘤形成 ,污染细胞培养。由于细小病毒感染会干扰研究结果 ,因此确定小鼠感染ＭＰＶ还是ＭＶＭ是很重要的。本研究的目的是建立检测排泄物中病毒的ＰＣＲ方法 ,在血清抗体产生之前能够活体检测出ＭＶＭ和ＭＰＶ。排泄物中ＤＮＡ的提取最好用商品化的过柱方法 ,通过增加洗涤步骤帮助去除排泄物中的抑制物。为了提高敏感性 ,比较了4 5个循环扩增排泄物ＰＣＲ和只有 35个循环的组织ＰＣＲ。通过检测 37只来自同一群自然感染ＭＶＭ和ＭＰＶ成年Ｓｅｎｃａｒ小鼠的粪…     

雏番鸭细小病毒的理化特性测定

对首次从广东分离的雏番鸭传染性“三周病”病毒南海里水株MPLI进行理化特性的测定.试验表明本病毒株能耐热、酸、氯仿、乙醚,对紫外线敏感,将本病毒的番鸭胚液经差速离心浓缩,以Sepharose 4B柱层析纯化,用电镜观察,病毒是晶格排列,有实心和空心两种粒子,直径为20～24nm,无囊膜.经SDS—PAGE测定,病毒含有4种结构蛋白,即Vp1(85kd),Vp2(72kd),Vp3(56kd),Vp4(39kd),其中Vp3 为主要结构蛋白.病毒核酸经提取和酶切分析,证明为DNA,分子量约5.1kb.综合前期对本病毒进行的一系列实验室诊断和本次的理化特性测定结果,确认MPLI毒株为雏番鸭细小病毒.     

大鼠细小病毒KRV株培养方法的建立

目的 建立用大鼠胶质瘤细胞系( Rat glial cell line C6)替代大鼠原代胚细胞(Primary rat embryo cells,RE)来 培养大鼠细小病毒（Kilham Rat Virus,KRV）的方法。方法 将500 TCID50 KRV培养物接种到75T-C6细胞培养瓶 中（ 细胞接种量为2×105/mL）, 培养过夜, 待细胞病变CPE达++～+++时, 分别用免疫荧光(FITC)鉴定所培 养病毒的特异抗原,用血球凝集试验(HA)测定培养物上清的效价,用DNA测序鉴定所培养的病毒,最后用96孔 板培养法测定KRV的TCID50。结果 KRV在接种到C6细胞的第4～5天, 细胞发生明显的病变,CPE可达++++, FITC鉴定呈KRV抗原阳性, 病毒的培养上清中HA效价为1:5 120,测序结果表明, 该病毒序列与NCBI中KRV序 列同源性达98％ , 确定为KRV。收获的KRV的TCID50为104.6/0.1 mL。结论 通过对C6细胞系培养KRV方法 的标准化和对所培养病毒的一系列鉴定表明,用大鼠胶质瘤细胞系可以替代大鼠原代胚细胞系进行大鼠细小病毒 的培养。     

猪细小病毒血清学检测方法的建立

目的建立猪细小病毒血清学检测方法。方法用抗猪细小病毒的猪源性血清,通过IFA和IEA两种方法,首先将阳性血清吸附PK-15细胞抗原,以排除非特异反应,通过对阳性血清及3种二抗(其中IFA以FITC标记的抗猪IgG抗体,IEA分别以HRP标记的抗猪IgG抗体和SPA-HRP作为二抗)进行浓度梯度滴定,确定最佳工作浓度,并比较三种反应体系的敏感性。结果IFA最高能检测出PPV-猪组织混合感染PK-15细胞模型中1个TCID50,而其它两种反应体系均只能检测100个TCID50。结论间接免疫荧光检测方法比其它两种方法敏感性更高。     

Win32侵染式病毒的宿主入口技术

分析了Win32病毒编制中宿主入口技术的原理并给出了实现这种技术的流程,并基于此原理,初步提出了利用加壳和校检码检测来对抗宿主入口技术的设想.     

小鼠微小病毒( MVM) 荧光定量PCR 检测方法的建立及初步应用

摘要: 目的建立小鼠微小病毒( MVM) 荧光定量PCR 方法,并初步应用于实验小鼠中。方法根据NCBI 上发表的MVM( NC_001510) 基因组序列,设计引物和探针,建立MVM 荧光定量PCR 方法。考察引物探针的最佳线形范围,特异性及灵敏度,并使用该方法对178 份清洁级小鼠粪便DNA 样本进行检测。结果MVM 荧光定量PCR 方法最佳线性范围为109 ～ 104 拷贝/μL,标准曲线的线性关系良好,R2 值可达0. 99,灵敏度为101 拷贝/μL,特异性强,与大鼠细小病毒H-1 株和KRV 株、猪细小病毒均无交叉反应。应用荧光定量PCR 方法对178 份小鼠粪便DNA进行检测,结果均为阴性。结论建立的MVM 荧光定量PCR 方法具有特异、灵敏的特点,为MVM 的流行病学调查、检测提供了有效的技术支持。     

三种寄生鱼对圆背角无齿蚌寄生效果的研究

选用了罗非鱼、黄颡鱼和鳙鱼作为圆背角无齿蚌的寄生鱼,并对寄生效果进行了分析,结果表明:罗非鱼的平均寄生量达2045只/尾,黄颡鱼287只/尾,花鲢为220只/尾;在寄生过程中,罗非鱼成活率高达100%,黄颡鱼为60%,花鲢仅为30%;圆背角无齿蚌钩介幼虫在水温为(19±1)℃的条件下,变态期为11～19 d.罗非鱼为圆背角无齿蚌的最佳寄主.本研究结果将用于指导圆背角无齿蚌规模性的人工繁殖生产.     

两种槐糖脂抑制人宫颈癌Hela细胞活性比较研究

采用MTT比色法测定分别以豆油和葡萄糖为底物发酵合成的两种槐糖脂抑制人宫颈癌Hela细胞的抑瘤率,对两种槐糖脂的抗肿瘤活性进行了初步研究.研究结果表明,两种槐糖脂对人宫颈癌Hela细胞有一定的抑瘤活性,其中以葡萄糖为底物的槐糖脂较以豆油为底物发酵合成的槐糖脂抑瘤效果明显,这为今后槐糖脂的应用提供关键参数.     

流行性出血热病毒的细胞培养

用灭活的流行性出血热病毒（EHFV）L99株感染传代培养的Vero-E6细胞,第4d50%的Vero-E6细胞浆内可查到对EHFV鼠血清的特异性荧光,第7-10d阳性细胞数达到100%。用感染第3d的细胞培养上清大批量盲种,第7-10d荧光强度均达到 ,电镜下病毒呈圆形或卵圆形,外膜为电子致密层,界面清楚,包绕着比较疏松的内浆,内浆中有若干个颗粒丝状结构。     

甲型肝炎病毒(H2株)在三种细胞中的感染性滴度比较

本文用恒河猴胚肾传代细胞（ＭＥＫ）、人胚肺成纤维二倍体细胞（ＫＭＢ１７和２ＢＳ）对ＨＡＶ－Ｈ２株感染性滴度进行了初步研究,结果显示Ｈ２株在ＭＥＫ上感染性滴度（ＣＣＩＤ５０／ｍＬ）最高,ＣＣＩＤ５０／ｍＬ比ＫＭＢ１７,２ＢＳ平均ＣＣＩＤ５０／ｍＬ高１．２８ｌｏｇ和１．５９ｌｏｇ．经统计学分析,Ｐ＜０．０５,有显著性差异,证实ＭＥＫ对Ｈ２株最敏感．ＭＥＫ可能是测定ＨＡＶ感染性滴度和繁殖ＨＡＶ较理想的细胞     

LR—98对肝癌细胞增殖的抑制性效应

利用在体和离体实验相结合 ,以动物接种肿瘤细胞后的生存时间、瘤重与体重比值、肝癌细胞生存率、超氧化物歧化酶 (SOD)活性及肝癌细胞凋亡为指标 ,研究了不同剂量榄仁树叶提取物 (LR 98)对肝癌细胞增殖的抑制性效应及可能机制 .在体实验结果表明 ,5× 10 - 3g/mLLR 98处理组动物的生存时间较对照组明显延长 (P <0 .0 1) ,不同剂量处理组 (5× 10 - 3g/mL ,2× 10 - 2 g/mL ,5× 10 - 2 g/mL)的瘤重与体重比值均较对照组明显减小 (P <0 .0 5) .体外培养的细胞经不同剂量LR 98(1× 10 - 5g/mL ,5× 10 - 5g/mL ,1× 10 - 4 g/mL)作用后 ,生存率及SOD活性均显著下降 (P <0 .0 1) .流式细胞仪分析表明 ,不同剂量LR 98作用于肝癌细胞 8h后 ,在G1 期前均出现一亚二倍体峰 ,表明均能诱导肝癌细胞发生凋亡 ,凋亡率分别达 2 9.4 4 % ,2 4 .4 5%和 2 5.2 2 % .以上结果说明LR 98可显著抑制肝癌细胞增殖 .降低SOD活性 ,诱导肝癌细胞凋亡可能是LR 98抑制肝癌细胞生长的机理之一 .     

XL-HO_1在人和动物细胞培养中的应用

本文报道了9种细胞,在含有不同浓度的XL-HO_1加小牛血清(NBSC)的RPMI-1640培养基(M2-M4)中的生长率,以及这些细胞在仅含有20%NBSC的RPMI-1640培养基(Ml)和仅含有20%XL-HO_1,的RPMI-1640培养基(M5)中的生长率进行比较。实验结果表明:各种细胞在5种培养基(Ml-M5)中的生长率并无显著差异,证明XL-HO_1,和NBSC的效用相同,可作为NBSC的代用品,或者与NBSC配合,作为人和动物细胞培养基的添加成分。     

丝素包埋SPA成膜的理化性能和生物效应研究

研究将丝素溶液包埋金黄色葡萄球菌A蛋白(staphylococcal protein A)(简称A蛋白或SPA ),制成不溶性SPA丝素膜.用粘附生长因子RGD(序列为GLY-ARG-GLY-ASP-SER-PRO-L YS)的抗体IgG结合IgG到该丝素膜的表面,再将RGD结合到不溶性SPA丝素膜表面RGD抗体IgG 上,制备成RGD-IgG-SPA丝素膜.用酶联免疫吸附试验(简称ELISA)方法,证明RGD-IgG -SPA丝素膜是稳定的.种植培养血管内皮细胞(vascular endothelial cell,简称EC细胞) 于该改性丝素膜的表面,用四甲基偶氮唑盐比色方法(简称MTT法)检测细胞的生长,证明改性丝素膜能有效地促进EC细胞的生长.     

Find基于TMS320VC5410的两种引导方式的比较

介绍了基于TMS320VC5410的两种引导方式-主机端口接口引导方式和并口引导方式，就它们的各自工作机理和特点给予了描述，另外，基于这两种引导方式本文给出了在实现过程中的电路框图和注意事项等。     

Effect of Nano Red Elemental Selenium on GPx Activity of Broiler Chick Kidney Cells in vitro

0　IntroductionSelenium(Se)isanessentialtraceele mentwithaverynarrowmarginbe tweennutrientlevelsofintakeandtoxicity .Anti oxidationisthemostimportanteffectofSe’sbiologicalfunction .Seisanessentialcomponentandactivesiteofcellularglu tathioneperoxidase (GPx) [1 ] .GPxistheoneofmainanti oxidizingenzymes,clearingdeleteriousperoxides,suchasH2 O2 ,fattyacidperoxide,phospholipidhydroperoxide,andsoon[2 4] ,toprotectbiologicalmem braneandbiologicalbigmoleculefromoxida tivedamageintissues[5 \〗.It…