环状排列黄色荧光蛋白在大肠杆菌及毕赤酵母中表达的比较研究

采用基因工程方法,实现了cpYFP在毕赤酵母X33的表达,并与大肠杆菌BL21(DE3)表达做对比.结果表明,毕赤酵母胞外分泌的目的蛋白不仅背景较大肠杆菌表达的清晰,且荧光强度为前者的3倍.同时,毕赤酵母表达的重组cpYFP对超氧阴离子自由基反应的灵敏性高于大肠杆菌表达的cpYFP.这些结果表明,毕赤酵母表达体系可作为制备重组cpYFP的良好体系,也为cpYFP在自由基生物学领域的广泛应用提供充足的原料来源.     

细菌和酵母混合培养对细菌蛋白酶活性的影响

本文研究了枯草芽孢杆菌(B.subtilis)分别与3种酵母(Saccharomycescerevisiae,Pichia farinosa,Candida lipolitica)混合培养时对细菌蛋白酶活性的影响。结果表明,在接入的菌种中,当B.subtilis和酵母的细胞数量比为100:1时,啤酒酵母的存在使细菌蛋白酶活性提高1倍;粉状毕赤氏酵母的存在对细菌蛋白酶活性的提高有较小的作用(约25%);而解脂假丝酵母则无影响。当B.sub-tilis和酵母细胞的数量比为10:1时,3种酵母对细菌蛋白酶的活性均有强烈抑制作用。     

固定化酵母原生质体的研究

本文在固定酵母细胞的基础上,进一步对固定化酵母原生质体进行了初步研究.结果使产酯能力比固定化完整细跑高0.6倍.固定化原生质体经5次重复利用后其产酯性能仍为起始产酯能力的96％.     

酵母提取物对水母雪莲悬浮培养合成紫丁香苷的影响

研究了酵母提取物诱导的水母雪莲悬浮培养时紫丁香苷生产和相关次级代谢酶的活性.酵母提取物促进了紫丁香苷的生产,最优的添加方法是在培养15 d时添加1.5%的酵母提取物.最大紫丁香苷产量达671.9 mg/L,是对照实验的3.25倍.诱导子处理后G6DPH、PAL和POD活性显著增加,当处理6 h后酶活性达到最大值.     

Monellin基因在酵母中的表达研究

本实验根据毕赤酵母偏爱密码子,人工合成了高甜度monellin基因,并构建了重组分泌型酵母表达载体pPIC9KM,通过电击转化获得了可高效分泌表达有甜味活性高甜度monellin的重组毕赤酵母GS115/pPIC9M.通过PCR检测证实monellin基因已经整合进酵母基因组,SDS-PAGE和Westerm blot免疫杂交知所表达的蛋白是目的蛋白,最后通过双盲测定证实表达的蛋白比同等重量的蔗糖甜约1000倍.     

餐厨垃圾乳酸发酵残渣生产蛋白饲料的研究

以餐厨垃圾乳酸发酵残渣为研究对象,探讨其酵母发酵制取饲料蛋白的可行性.采用Plack-ett-Burman试验设计从9个因素中筛选出影响酵母发酵的正向显著性因素（尿素、不灭菌）和负向显著性因素（磷酸氢二钾、硫酸镁）.实验结果表明,残渣中残留的乳酸菌和乳酸盐对酵母发酵无影响,影响残渣酵母发酵的因素是酸性环境,酵母发酵前发酵底物无须灭菌.尿素最佳添加量为2.5%,最佳条件下发酵饲料中的真蛋白含量可高达31.1%,与餐厨垃圾乳酸发酵残渣中真蛋白含量（14.7%）相比,提高了1倍.     

核桃JrHSP20-1基因鉴定及温度胁迫响应功能分析

探讨核桃(Juglans regia)热激蛋白响应温度胁迫的分子调控机理,为核桃防寒工作等提供理论指导.通过对核桃‘香玲’转录组分析获得1个热激蛋白家族基因HSP20(命名为JrHSP20-1)的全长cDNA序列.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析在40,44,48,16,10,6℃胁迫下JrHSP20-1在核桃根、茎、叶中的表达.并将JrHSP20-1构建酵母表达载体PYES2-JrHSP20-1进行温度胁迫功能分析.结果显示,JrHSP20-1基因全长891bp,编码的蛋白分子量为33.57KD,含296个氨基酸,理论等电点为5.07.表达分析显示,JrHSP20-1在不同组织均有不同程度的表达;根中,44℃时JrHSP20-1被诱导为对照的2.3倍,48℃时达对照的74.5倍,10℃时被诱导为对照的12.0倍;茎中,48℃时上调最大为对照的300.2倍;叶中,在48℃和16℃胁迫下被诱导较高,分别为对照的82.1,53.8倍.酵母温度胁迫实验发现,在53℃和-20℃胁迫下,重组酵母INVSC1(pYES2-JrHSP20-1)的生命活力及恢复活性明显优于对照酵母INVSC1(pYES2).得出核桃JrHSP20-1基因的表达具有一定的组织特性,响应于温度胁迫诱导,且JrHSP20-1基因能有效提高转基因酵母对高温和低温的耐受力,表明JrHSP20-1基因是核桃抗寒耐高温的有效候选基因,为进一步研究JrHSP20-1的抗寒功能打下基础.     

味精废水中粘红酵母和螺旋藻混合培养生产油脂

研究了在味精废水中混合培养粘红酵母和钝顶螺旋藻，并生产油脂。将COD（化学需氧量）为32000mg/L的味精废水稀释5倍，pH值调节到5.5，接种10%粘红酵母，培养3d后接种10%螺旋藻。培养5d后，COD降解率为70.3%，油脂产量为216mg/L，分别是粘红酵母单独培养的1.75倍和5.42倍，螺旋藻单独培养的2.36倍和7.64倍。混合培养也利于废水中NH₄⁺-N、还原糖以及谷氨酸的去除。     

马克斯克鲁维酵母表达系统菊粉酶启动子的改造及活性研究

马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)作为一种食品安全级酵母,具有生长快,生物量高等特点,是一种新型的重组蛋白表达的宿主系统.启动子是供RNA聚合酶识别和结合的DNA序列,调控着转录的起始过程,直接影响基因的表达水平.本文通过易错PCR技术对马克斯克鲁维酵母菊粉酶启动子Pinu进行两轮突变,以阿魏酸酯酶(Est1E)作为报告基因,经筛选、鉴定获得了5个可以显著提高外源蛋白表达量的突变型启动子Pm1D81、Pm1F138、Pm2Q89、Pm2M73、Pm2X47,报告蛋白Est1E的酶活性是启动子改造前的2.31,2.65,5.01,5.40,5.43倍.随后测试了启动子Pm2X47对外源蛋白甘露聚糖酶和赤霉烯酮降解酶表达的影响,结果显示这两种酶的表达量均有提高,分别是启动子改造前的3.57倍和4.13倍.上述结果提示,改造后的菊粉酶启动子在提高外源蛋白表达水平方面具有一定的通用性,可作为新型候选表达元件,以提升马克斯克鲁维酵母重组表达外源蛋白的能力.     

外源因子对平菇深层发酵玉米秸秆木质素酶系分泌的影响

研究了1%-4%的豆渣、1%-3%的(NH4)2SO4和酵母菌(酿酒酵母、热带假丝酵母、产朊假丝酵母)对平菇深层发酵玉米秸秆木质素酶系活性的影响.结果表明:与对照相比,所试浓度的豆渣、(NH4)2SO4均显著提高漆酶、锰过氧化物酶的活性.其中2%、4%的豆渣分别对漆酶、锰过氧化物酶活性的促进作用最大,是对照的1.8和8.4倍;3%、2%的(NH4)2SO4分别对漆酶、锰过氧化物酶活性的促进作用最大,是对照的1.46和7.05倍.在平菇接种的同时及其培养的第2天分别接种3种酵母菌,均显著提高锰过氧化物酶的活性,其中酿酒酵母的促进作用最大,接种的同时及其培养的第2天接种分别是对照的5.97、10.2倍;平菇培养第2天接种产朊假丝酵母可显著提高漆酶的活性,是对照的1.32倍.     

发酵麦秆饲料中蛋白质含量的研究

麦秆因其纤维素含量高,在农村主要用作反刍动物饲料或者制备沼气,而不能充分利用.研究以农田麦秆为原料,通过担子菌酵母发酵,分解麦秆中木质纤维素,以提高发酵物中的蛋白质含量; 用烘干法测定麦秆含水量.结果表明：担子菌酵母繁殖较快,蛋白质含量增加2.4倍; 新鲜麦秆含水量（质量分数）约为70.3%,为麦秆的深度利用提供了有益的尝试.     

高产耐热3''''-磷酸二酯酶菌种的选育及酶性质的研究

以粘红酵母(Rhodotorula glutinis)Q0402为出发菌株,经紫外谤变,得到一株粘红酵母QX0402.5 L发酵罐的发酵液中3'-磷酸二酯酶酶活力可达250 U/mL,为文献报道过的最高酶活力的2.5倍.所产生的3'-磷酸二酯酶在70℃下保温1 h,酶活力仍有50%以上.该酶最适反应pH为5.4,最适反应温度为60℃,反应3 h的反应转化率为56.37%,底物浓度可以提高到3%,生产效率为文献报道的3倍.     

葡萄糖发酵液在双室光电化学池的制氢研究

将酵母接种于葡萄糖培养基中连续发酵,采用高速回转离心机分离酵母得到葡萄糖发酵液,并将其作为以TiO_2纳米管为光阳极的双室光电化学池的阳极电解液,在无任何外加电压条件下制备氢气.通过光催化制氢及光电化学性能测试,系统地研究了葡萄糖发酵液发酵时间对TiO_2纳米管产氢速率、光电压与光电流密度的影响.实验结果表明,TiO_2纳米管的光电化学性能受酵母培养基发酵时间影响,并随着发酵时间的延长而升高,将酵母培养基发酵48h时,TiO_2纳米管产氢速率达到21.3μmol/(cm2·h),比未发酵时增加2.13倍.     

HAC1基因过表达对重组人CTLA-4蛋白在毕赤酵母中分泌表达的影响

重组人细胞毒性T细胞相关抗原(Cytotoxic T Lymphocyte Associated Antigen 4,CTLA-4)是一类重要的基因工程药物,其在毕赤酵母中表达水平偏低使其一直无法广泛应用于临床治疗.而影响毕赤酵母中的外源蛋白分泌表达的因素,主要为内质网中的折叠速率以及不可折叠蛋白积累造成的胞内胁迫压力.本文通过在毕赤酵母细胞中过表达HAC1基因对毕赤酵母细胞中未折叠蛋白反应(Unfolded Protein Response,UPR)的信号通路进行调控,从而改善了CTLA-4蛋白的表达水平.摇瓶中改造菌株M-HAC1发酵上清液中该蛋白的分泌表达量是原始菌株表达量的2.55倍.     

8-（2′-萘磺酰）-胺基喹啉锌荧光探针的合成及其对酵母细胞的染色

合成了一种锌离子荧光探针-8-(2′-萘磺酰)-胺基喹啉(NSQ),NSQ自身具有较弱的荧光,向NSQ溶液中加入Zn2 后,荧光增强5.7倍,并且生物体系中含量较多的碱金属或碱土金属离子几乎不干扰Zn2 的荧光.酵母细胞染色实验表明,NSQ可以对酵母细胞中的锌离子进行荧光显微分析.     

8-(2''-萘磺酰)-胺基喹啉锌荧光探针的合成及其对酵母细胞的染色

合成了一种锌离子荧光探针-8-(2'-萘磺酰)-胺基喹啉(NSQ), NSQ自身具有较弱的荧光,向NSQ溶液中加入Zn2+后,荧光增强5.7倍,并且生物体系中含量较多的碱金属或碱土金属离子几乎不干扰Zn2+的荧光.酵母细胞染色实验表明,NSQ可以对酵母细胞中的锌离子进行荧光显微分析.     

基于RNA-Seq技术的毕赤酵母基因组重注释及新型强启动子的发现与序列分析

使用RNA-Seq技术,对毕赤酵母进行了转录组测序。基于测序结果,对现有毕赤酵母基因组进行了重注释,修正了基因组序列中的错误位点861处,发现了新转录本249个及可变剪切现象83个,并更正了553个转录本的错误注释。经过表达谱分析,在毕赤酵母中发现了2个新型强启动子,分别命名为P437和P1431,其驱动的转录本的最高转录水平分别为AOX1基因的1.78倍和3.40倍。序列分析显示,P437和P1431序列中存在着多个酵母转录因子的结合位点。     

磁性修饰的工程酵母吸附水中银离子研究

采用水基磁性Fe₃O₄ 纳米颗粒修饰表面展示CueR蛋白的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae), 获得磁响应性能良好的磁修饰工程酵母细胞。傅里叶变换红外光谱分析表明, 磁修饰细胞较好地保留了工程酵母细胞和磁性材料的官能团。研究吸附动力学、等温吸附模型以及不同因素(如时间、温度和pH值)对磁修饰细胞吸附Ag⁺的影响, 结果表明, 磁修饰酵母对Ag⁺的吸附速率很快, 18分钟基本上达到吸附平衡; 最适宜吸附温度为20~30℃; 最佳吸附pH值等于7。磁修饰酵母对Ag⁺的吸附符合准一级动力学模型和Langmuir等温吸附模型。多金属等摩尔浓度竞争条件下的吸附结果表明, 磁修饰后的工程酵母对Ag⁺仍具有选择吸附性, Ag⁺的吸附量为Ni²⁺的10.6 倍,Zn²⁺的9.0 倍,Co²⁺的7.5 倍,Cu²⁺的3.0 倍。     

固定化增殖酶母工业应用的研究—Ⅱ、分批和连续发酵生产乙醇试验研究

本文对固定化增殖酵母分批和连续发酵生产乙醇进行了试验研究。试验结果表明，在分批发酵中，PVA固定化增殖酵母的乙醇生产能力是游离酵母的3倍，达到24毫克／亳升凝胶／小时以上。发酵周期比游离酵母缩短了一半。在连续发酵中，发酵培养基在柱中停留时间3小时，发酵流出液中的乙醇含量平均在7．1％（v/v）以上，固定化增殖酵母的乙醇生产能力平均达到18毫克／毫升凝胶／小时以上，是传统发酵方法的8－10倍。同时，通过分批发酵22批次（重复使用）连续发酵120天的稳定性试验证实，PVA固定化增殖酵母的活性和机械强度能长期保持不变，表现出良好的反应稳定性，具有较高的工业应用价值。     

室外人工投饵间接对金鱼鱼苗生长的影响

本文运用方差分析法,检验了不同饵料配方间接对金鱼鱼苗增长的效果。结果说明:按浮游动物生物量等量投喂酵母泥,外加酵母泥量十分之一的鱼肝油乳剂,或按浮游动物生物量二倍投喂酵母泥,饲养结果与常规方法比较,长势相近。此方法具有省工、省时降低成本等特点。