膜片钳全细胞记录法在研究谷氨酰胺转运蛋白分子机制中的应用

为了研究中性氨基酸转运蛋白-谷氨酰胺转运蛋白的结构与功能,采用膜片钳全细胞记录法测定谷氨酰胺转运蛋白2介导的电流.结果表明:谷氨酰胺转运蛋白诱导了底物氨基酸和Na+浓度依赖性电流,可用于测定底物氨基酸和Na+对转运蛋白的表观亲和常数Km,SNAT2野生型对丙氨酸的表现亲和常数KmAla为(200±5)×10-6mol/L,对Na+的表观亲和常数KmNa为(100±7)×10-3mol/L.谷氨酸转运蛋白转运底物氨基酸过程是生电的过程,在膜电势负值时氨基酸转运电流增大,可用于转运机制的研究.因此膜片钳全细胞记录法是研究谷氨酰胺转运蛋白分子机制的有效方法.     

大鼠背根神经节分离细胞离子单通道记录技术

本文探讨了在大鼠背根神经节(DRG)细胞上记录离子单通道电流的方法,研究了膜片钳实验的各个环节,研究了提高封接电阻的方法。研究结果表明,单通道记录的背景噪声取决于电极与细胞的封接水平。文中还讨论了实验系统的组装,电极制备和细胞分离等技术。     

一种豚鼠心室肌单细胞膜片钳标本制备方法

首次报道一种改良豚鼠心室肌单细胞标本制备方法．运用此方法能获取２０％～６０％的具钙耐受性的心室肌细胞．全细胞记录显示其静息电位和动作电位时程分别为（－６９．７±３．２）ｍＶ（ｎ＝７０）和（５１５±１１６）ｍｓ（ｎ＝２５），同时能检测到多种电压敏感型离子通道电流．以上结果与国外同类报道一致     

心肌细胞离子通道的研究进展

<正>Neher和Sakmann于1976年创建了"膜片钳"技术,首次记录到单通道电流。因为测量原理仍与电压(电流)钳相似,但是微电极不再插入细胞内,而是高阻封接在局部膜片上,所以把这种电压(电流)钳位测量方法称为膜片钳。[1]心电生理深入的研究离不开膜片钳技术,其基本方法与经典的微电极技术相似,它记录的是各种跨膜离子流,按方法的不同可作全细胞记录或单通道记录。心肌细胞膜电位靠膜内外离子浓度差维持,内向离子流包括(按惯用符号表示):INa为钠流,INa-B为背景钠流,ICa-L为L-型     

粉纹夜蛾传代细胞的分泌特性研究

粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)传代细胞系BTI-Tn5BI(简称5BI)在大肠杆菌的诱导下能够产生抗菌肽.通过电生理技术检测了5BI细胞分泌抗菌肽的分泌特性.实验表明:粉纹夜蛾传代细胞具有一定的可兴奋性,能够在瞬时细胞内钙浓度升高的刺激下产生分泌,且分泌的动力学特征可用双指数拟合,证明其分泌的钙依赖性.     

猪小肠抗菌肽对SPF鸡肠道黏膜免疫功能的影响

60只1日龄的SPF 鸡随机分为两组,来评价添加外源性抗菌肽对其肠道黏膜免疫功能的影响.结果表明:1)十二指肠、空肠和回肠内的上皮内淋巴细胞数量从第21日龄起,与对照组相比差异明显(p<0.05).2)自21日龄起,在抗菌肽处理组可以见到明显的肥大细胞,而在对照组少见(p<0.05).3)抗菌肽的处理能显著增加各段肠道内杯状细胞的数量(p<0.05).4)使用抗菌肽处理后,能提高各段肠道的sIgA的表达.添加外源性的抗菌物质,能显著提高SPF鸡的肠道黏膜免疫参数,并且有助于进一步深入了解抗菌肽对肠道黏膜免疫的调控机制.     

有机磷水解酶全细胞生物催化剂的特性

利用有机磷水解酶大肠杆菌细胞表面展示工程菌为全细胞催化剂,研究了其降解对氧磷的反应.确定了最适反应条件为:反应温度37 ℃、pH值8.0、底物浓度2.0 mmol/L、振荡速率120 r/min,在此条件下反应5 h,对氧磷降解率可达80%左右,且全细胞催化剂具有较好的稳定性和可重复使用性,显示了良好的应用前景.     

野金丝桃分泌囊和分泌细胞球的结构与发育的研究

野金丝桃的地上器官中存在着透明的和不透明的两类腺体，前为分泌囊，后为分泌细胞球。在叶片中，它们都起源于板状分生组织的单个原始细胞。当它分裂成为4个原始细胞后，其中，一部分继续分裂增殖形成多细胞团，以后其中央的细胞分化为分泌细胞，外层的细胞则分化为鞘细胞，成为分泌细胞球；另一部分则在4个原始细胞中央产生裂隙，以后原始细胞垂周分裂增加数目，裂隙扩大，从而形成一层上皮细胞围绕分泌腔而构成的裂生分泌囊，其外为一层来源不同的鞘细胞。分泌囊和分泌细胞球各有其分布规律。     

检测汞的全细胞生物传感器构建

汞（Hg）是环境中主要的重金属污染物,暴露于环境中的汞对人体健康有严重危害。汞的精确检测对控制环境污染和减少对健康的危害有着重要意义。该实验是基于MerR蛋白调节的启动子对应答汞毒性基因的调控机理,首先通过试验确定红色荧光蛋白mCherry为报告基因。将MerR基因片段链接到质粒pUC57得到质粒pUC57-MerR,以其为模版得到质粒pUCRR,转入到E. coli DH5α中,得到工程菌株E. coli UCRR。为提高菌株的性能和灵敏度,通过易错PCR技术获得MerR基因突变体库,筛选出菌株V109E在培养4 h时,荧光信号强度远远高于其他菌株荧光信号,对Hg2＋有高度专一性,检测Hg2＋的最低浓度为0.5nM。     

淡水湖泊富营养化的微生物全细胞传感器的构建和应用

微生物全细胞传感器是最近兴起的一种以完整微生物活细胞为载体的主要用来检测环境污染物的传感器,目前已成功地应用于水体富营养化的监测.本文中仅就用于指示淡水湖泊富营养化程度的微生物传感器的构建机理、方法、取得的进展和存在的问题进行综述和展望.     

全细胞生物转化法制备γ-氨基丁酸

γ-氨基丁酸(γ-aminobutyrate,GABA)是广泛存在于自然界的一种非蛋白质的功能性氨基酸.它是哺乳动物中枢神经中一种重要的抑制性神经递质.为了高效廉价制备GABA,采取谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase,GAD)催化L-谷氨酸生成GABA的工艺.从K12来源的大肠杆菌(E. coli)基因组中PCR扩增得到GAD基因片段,并克隆到载体p ET-23a中,得到重组质粒p ET-23a-K12gad,并将其转化至大肠杆菌E. coli BL21(DE3)中,获得了能够重组表达GAD活性的工程菌株.从反应温度、p H、菌体量这三个方面对催化工艺进行了优化.为了进一步降低成本,通过化学法将谷氨酸钠转化为谷氨酸作为催化底物,提高转化速率的同时简化了纯化工艺.     

全反式维甲酸对HL—60细胞hTERT基因表达和端粒酶活性的影响

目的：探讨全反式维甲酸（ATRA）诱导HL－60细胞分化过程中人类端粒酶逆转录酶（hTERT)蛋白表达和端粒酶活性的改变,方法：应用间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白含量的变化;采用多聚酶链反应－酶联免疫反应（PCR－ELISA）方法检测ATRA处理HL－60细胞前后端粒酶活性的改变,用碘化丙锭染色经流式细胞仪检测细胞周期的变化,结果：ATRA作用于HL－60细胞后,细胞内hTERT蛋白含量逐渐降低,细胞的端粒酶活性相应受到抑制。结论：在IL－60细胞分化过程中,可以通过hTERT基因的表达下调而抑制端粒酶的活性。     

适用于膜片钳技术的细胞分离及培养技术的研究进展

生物细胞膜片钳技术自八十年代问世以来,已经在电生理领域得到了很大的发展,但由于细胞分离及培养技术的原因,时至今日此项技术手段仍未普及. 本文综述了膜片钳技术和组织培养,主要内容包括钳技术,组织培养的历史发展以及适用于膜片钳技术的神经细胞,心肌细胞,骨骼肌细胞等的分离培养方面的进展及前景展望.     

适用于膜片钳技术的细胞分离及培养技术的研究进展

生物细胞膜片钳技术自八十年代问世以来,已经在电生理领域得到了很大的发展,但由于细胞分离及培养技术的原因,时至今日此项技术手段仍未普及。本文综述了膜片钳技术和组织培养,主要内容包括钳技术,组织培养的历史发展以及适用于膜片钳技术的神经细胞,心肌细胞,骨骼肌细胞等的分离培养方面的进展及前景展望。     

锯缘青蟹脑的神经分泌细胞

应用组织学方法和免疫组织化学技术研究子锯缘青蟹脑的神经分泌细胞的各类与分布,依据细胞形态、细胞核、细胞质的特征,将脑神经分泌细胞分为4种类型,并绘制了神经分泌细胞的分布示意图。     

子记录模式下二叉排序树的算法分析

1 引言在微型计算机文件系统支撑下设计数据处理应用系统时,提高效率的关键在于减少访问外存的次数。当应用系统数据项的大小(字节数)较小时,我们对如何提高效率的策略是在文件的一个逻辑记录中放i个数据项(i表示数据项的个数)。例如在姓名NAME的一个逻辑记录中存放i个姓名,这种方式称为子记录模式(sub-recordmode)。当文件的记录需要按关键字排序时,将文件组织成二叉排序树是一个有效的选择。在子记录模式下如何组织二叉排序树及算法的变化、性能,正是本文所要探讨的问题。     

中国古代正史31次日全（环）食记录的研究

古代日全（环）食记录一般表示为“日有食之,既”。本收集整理了中国古代正史３１次日全（环）食记录,用现代４种不同计算日食的方法,给出了当时国都等地的见食情况－食甚时刻和食分;同时对这些全（环）食资料的可靠性进行了分析和评判,并试图给出一个较为合理料,方可进一步用于地球自转长期变化等课题的研究。     

全反式维甲酸对乳腺癌MCF-7细胞MAGE家族分子表达的影响

研究全反式维甲酸（ATRA）在诱导乳腺癌MCF-7细胞分化和凋亡过程中黑色素瘤相关抗原基因（Melanoma AssociatedAntigen,MAGE）家族分子的表达水平的变化,从而为其功能研究提供线索.六孔培养板培养乳腺癌MCF-7细胞至对数生长期,给以终浓度为10-6 mol/L的ATRA的刺激,于不同时间点（0 h,12 h,18 h,24 h,36 h,48 h）收集细胞,RT-PCR检测MAGE家族中（MAGE-A1、MAGE-C1、MAGE-D1、Necdin）分子的表达水平.结果ATRA诱导不同时间的MCF-7细胞MAGE家族分子表达水平呈现MAGE酸性亚家族（Ⅰ型抗原）表达逐步下调,而MAGE碱性亚家族（Ⅱ型抗原）表达逐步上升的趋势.说明MAGE家族酸性和碱性分子均参与ATRA诱导MCF-7细胞分化、凋亡,而且可能发挥作用是相反的.