应用TD—PCR技术和限制性内切酶技术鉴定猴B病毒

从DNA水平上鉴定猴B病毒，并区别人单纯疱疹病毒(HSV-1)；用PCR技术对猴B病毒和HSV-1进行扩增，并用限制性内切酶技术对扩增产物进行酶切，对PCR扩增产物和酶切产物进行电泳；电泳结果显示猴B病毒和HSV-1的PCR扩增产物为128bp，酶切后，B病毒能产生72bp和56bp片段，而HSV-1不能产生酶切产物；该方法能较好地鉴定猴B病毒，同时也将有密切抗原关系的HSV-l区分开来。     

B病毒PCR检测方法的建立

目的建立B病毒核酸的PCR检测方法。方法设计引物,用PCR方法扩增B病毒,并验证其灵敏性和特异性。结果引物P1、P2及P3、P4在以B病毒为模板时有特定大小的目的片段出现,在以其他病毒为模板时无目的片段出现;引物P5、P6以B病毒和人单纯疱疹病毒I型(HSVI)为模板能扩增出382bp的产物,经SacⅡ酶切后,B病毒产生176bp和206bp的两个片段,HSVI无变化。结论通过PCR方法成功的区分开B病毒,并且鉴定区分了B病毒和HSVI。     

利用线粒体 DNA Cytb 基因 PCR-RFLP 分析方法鉴别青鱼和草鱼

建立了一种以线粒体细胞色素 b（Cyt b）基因为标靶,应用 PCR -RFLP 技术进行草鱼和青鱼种质鉴定的分析方法。设计一对引物 QYCYT -S 和 QYCTY -A 分别对青鱼和草鱼的 Cyt b 基因进行了 PCR 扩增,并选用 BglⅠ和 EcoRⅡ两种限制性内切酶对扩增产物进行酶切分析。结果表明,草鱼和青鱼都可以扩增出1111 bp 的条带,两种酶切检验发现,草鱼扩增产物能被 BglⅠ切成247 bp 和864 bp 两个片段,而青鱼的 PCR 产物能被 EcoRⅡ切成140 bp 和971 bp 两个片段,这表明,mtDNA Cyt b 基因 BglⅠ和EcoRⅡ的酶切位点都可作为鉴定青鱼和草鱼的有效分子标记。利用 PCR -RFLP 分析 mtDNA Cyt b 基因的方法操作简单,是一种快速鉴别草鱼和青鱼的可靠方法。     

SHBV的PCR检测方法的建立及其检测

以新分离的猴B病毒毒株为材料,建立了一种PCR快速鉴定SHBV的方法,并通过对PCR产物的限制性酶切分析可与HSV－1相区分,并对这一新分离的B病毒毒株的克隆片段进行了序列分析。     

利用PCR和限制性酶切技术鉴别3种鳗鱼

根据日本鳗、欧洲鳗和美洲鳗3种鳗鱼的16S rRNA基因序列,设计特异性引物,进行16SrRNA基因的PCR扩增,然后对PCR产物进行Apa I酶切反应.结果显示,日本鳗和欧洲鳗的PCR产物均出现211 bp的特异性扩增条带,美洲鳗的PCR产物出现两条DNA条带;日本鳗的PCR产物经Apa I酶切产生大小为135bp和...     

PCR扩增ZFY及ZFX基因对奶牛的性别鉴定

根据人及鼠 ZFY 及 ZFX 基因设计一对引物(ZF_1;ZF_2),利用 PCR 方法对牛的ZFY 及 ZFX 基因进行扩增.将扩增片段用 RStI 酶切,再通过聚丙烯酰胺凝胶电泳后判定牛的性别.公牛 ZFY 基因的 PCR 扩增片段有一个 RStI 酶切位点,ZFX 基因没有 PSTI 酶切位点.所以公牛的 PCR 片段经酶切后出现三个片段(468bp;356bp;112bp).而母牛的 PCR 扩增片段酶切后仍只有一个片段(468bp).据此就可区别雌雄性别.     

我国猕猴群中B病毒分离鉴定和检测方法研究初报

本实验从野外捕获的恒河猴的口腔溃疡灶中分离到一株病毒。该病毒在Vero细胞上具有B病毒特征性细胞病变 ,电镜观察具有疱疹病毒的典型形态与结构。经PCR扩增、SacⅡ酶切、PCR产物测序并与美国分离的BVE2 4 90株的部分基因序列进行比较 ,初步证实该分离株为B病毒 ,并命名为BV1 4 7株。用BV1 4 7株制备抗原片 ,并与国产HSV 1抗原片同时进行猴血清中B病毒抗体检测 ,可明显提高阳性检出率。B病毒的分离成功 ,对于提高我国实验猕猴的质量和检测水平 ,建立无B病毒猴群 ,增加出口创汇均具有十分重要的意义。     

枣实蝇及其他5种检疫性实蝇的PCR-RFLP快速鉴定

枣实蝇(Carpomya vesuviana Costa)是一种新入侵检疫性有害生物。应用PCR-RFLP技术,快速区分鉴定了枣实蝇与我国口岸截获频率较高的5种检疫性实蝇。研究表明:设计出的2对引物对6种供试实蝇线粒体DNA(mtDNA)进行PCR扩增,其扩增片断大小分别为350 bp和450 bp。PCR扩增产物用2种限制性内切酶Dra I和MseI进行酶切,根据不同的酶切位点准确区分了6种供试的实蝇。此方法可用于口岸截获实蝇的快速检疫鉴定。     

马立克氏病病毒疫苗CVI988株囊膜糖蛋白gI基因的序列分析

根据马立克氏病病毒(MDV)国际标准株GA株的基因序列设计合成了可扩增gI基因(1060bp)的引物.用PCR技术,以CVI988基因组为模板,扩增得到了预期大小的PCR产物.将此PCR产物和pUC18经同样的限制性内切酶KpnⅠ和BamHⅠ处理后,连接、转化、鉴定,得到了含有gI基因的质粒.将此质粒进行序列分析,比较了它与其他强毒和超强毒株的同源性.用DNAstar软件对其编码的氨基酸的疏水性和抗原性进行了预测.     

两重巢式PCR检测母体外周血中胎儿游离DNA

使用两重巢式PCR技术检测母体外周血中胎儿游离DNA,为非损伤性产前鉴定胎儿性别和诊断单基因疾病奠定基础.采用改良的chelex100方法提取60例孕龄为16~36周孕妇的外周血浆中游离胎儿DNA,依据NCBIX染色体长臂ATL1位点,Y染色体上DYS14位点序列,设计并合成引物,用巢式PCR同时扩增2个基因片段,以鉴定胎儿性别.结果表明:有ATL1位点和DYS14位点的扩增产物261bp和198bp鉴定为男性胎儿,而仅有261bp扩增产物鉴定为女性胎儿.均以真实出生性别进行确认后发现,此方法能有效提高检测特异性.两重巢式PCR能够简便并准确地鉴定胎儿性别,对单基因疾病特别是X-连锁遗传病的诊断有积极意义.