鸡传染性法氏囊病高免卵黄抗体液的研制

为防治鸡传染性法氏囊病毒地方性毒株所致的疾病,进行了高免卵黄抗体的制备、安全检验、保存期试验、鸡体里消长试验、治疗试验,为应用高免卵黄抗体防治鸡传染性法氏囊病取得了可参考性资料。     

新型嗜硫膜亲和纯化鸡传染性法式囊卵黄抗体研究

以普通定性滤纸为基质 ,经碱处理 ,二乙烯砜活化和巯基乙醇偶联后 ,制备成嗜硫膜 (thiophilic -mem brane ,TM) ,考察了其对鸡传染性法式囊 (IBD)卵黄抗体 (IgY)的特异性亲和吸附作用 .卵黄经醋酸钠 -醋酸缓冲液 10倍稀释于 4℃自然沉降脱脂后 ,所得上清液 (WSF)经嗜硫膜亲和吸附分离 ,可一步纯化得到SDS-PAGE电泳纯的卵黄抗体 .IgY在嗜硫膜上的吸附速度随着流速的增加而增大 ,吸附量则随着流速的增加而减少 .     

鸡新城疫Ⅰ系、Ⅱ系疫苗早期免疫扩大试验

对成都、江油、中江三个养鸡场的六批次,具有不同水平母源抗体的11450只雏鸡采用新城疫Ⅱ系苗1日龄滴鼻首免,Ⅰ系苗20日龄饮水二免,经过鸡群定期检测血清HI抗体效价和攻击强毒保护结果,证明雏鸡首免和二免后,HI抗体效价能在长期内维持在较高水平,对强毒攻击具有坚强抵抗力,Ⅰ系苗饮水免疫后,经长期观察,未见免疫鸡群与同群感染哨鸡出现任何不良反应。本次扩大试验表明:雏鸡采用Ⅱ系,Ⅰ系疫苗早期免疲,效果确实,安全可靠,方法简便易行,具有生产实用价值。作者并结合大量研究文献论证了早期免疲的应答机制和重要意义。     

DNA疫苗及其在卵黄抗体制备中的应用

DNA疫苗技术由于其独特的作用和优势,现已成为最有发展潜力的新兴免疫技术之一。将DNA疫苗技术和卵黄抗体技术联合起来,可获得效价更高、亲和性更好和成本更低的卵黄抗体。就DNA疫苗和卵黄抗体的各自特点以及DNA疫苗技术在卵黄抗体制备中的应用优势进行综述。     

抗禽腺病毒4型纤突蛋白-2的卵黄抗体的治疗效果评估

目的 为研究防治禽腺病毒4型(fowl adenovirus type 4, FADV-4)的卵黄抗体的治疗效力。方法 利用FADV-4纤突蛋白-2(fiber-2)亚单位疫苗对蛋鸡进行免疫,制备和纯化抗FADV-4 fiber-2的卵黄抗体后,评估该卵黄抗体不同治疗剂量、不同治疗时机对FADV-4的治疗效果。结果 Fiber-2亚单位疫苗中fiber-2蛋白的空间结构预测为同源三聚体;利用该疫苗制备的卵黄抗体可用水稀释法和PEG-4000沉淀法得到初步纯化,其抗体效价可达10^5.597。卵黄抗体的治疗试验表明,在FADV-4感染后1 d内进行卵黄抗体治疗,鸡的存活率为100%,治愈率超过90%,且高剂量抗体治疗效果要优于低剂量;而在FADV-4感染后两天进行抗体治疗,鸡的存活率为70%,治愈率为50%,能够显著改善攻毒后的临床症状,延长鸡的存活时间,降低死亡率。结论 制备的抗fiber-2卵黄抗体可以有效治疗FADV-4的感染。     

卵源性多价抗蝮蛇毒IgY的制备及检测

采用短尾蝮(Gloydius brevicaudus)、乌苏里蝮(Gloydius ussuriensis)、岩栖蝮(Gloydius saxatilis)、原矛头蝮(Protobothrops mucrosquamatus)和菜花原矛头蝮(Protobothrops jerdonii)5种蛇毒的混合物制备类毒素,免疫20~22周龄莱航母鸡并收集鸡卵,用冻融法、水稀释法和PEG法提取卵黄多价抗蝮蛇毒IgY,并用酶联免疫法和蛋白印迹法对所得IgY效价进行检测.结果表明:母鸡在免疫期间产下的鸡卵中,均存在可有效中和上述5种蛇毒的卵黄抗体IgY,且诱导量随免疫强度的提高而增加;不同方法所得有效抗体的含量存在一定差异,且同一提取法所得抗体对不同蛇毒的交叉中和能力也不同,这可能与动物对5种蛇毒的免疫应答存在差异有关.     

人A组轮状病毒结构蛋白VP7原核表达及其卵黄抗体效价的研究

为获得人A组轮状病毒重组结构蛋白VP7及其高效价的卵黄抗体,使用PCR技术扩增VP7 DNA片段并将其克隆到原核表达载体pET28a上形成重组质粒pET28a-VP7。将重组质粒转化基因工程菌E.Coil BL21(DE3),用0.5 mM IPTG诱导VP7重组蛋白的表达。通过包涵体纯化和蛋白复性后,将VP7重组蛋白与弗氏佐剂混匀免疫产蛋鸡,收集鸡蛋。用水稀释-盐析法纯化卵黄抗体IgY。进一步应用SDS-PAGE、ELISA和点杂交技术,分析该卵黄抗体的纯度、效价和特异性。结果表明在基因工程菌E.coli BL21(DE3)中能够实现VP7重组抗原的表达,将重组抗原VP7免疫产蛋鸡,提取纯化得到滴度为1:100 000的抗VP7卵黄抗体,且特异性的识别野生型A组轮状病毒。     

煤炭微生物絮凝剂的研究

微生物絮凝剂属于新型天然高分子絮凝剂,它与传统化工类絮凝剂相比具有絮凝效果显著及环保等优点。本文把酱油曲霉作为煤炭微生物絮凝剂的产生菌,采用离心沉降和超声波破碎等方法,研究了酱油曲霉的培养液原液、培养原液离心上清液、破碎液、破碎液离心上清液等含有不同成分的四种菌体提取液对煤泥水的絮凝效果。絮凝试验结果表明:酱油曲霉具有不同成分的菌体产生液对煤泥水都具有一定的絮凝作用。其中采用破碎液离心上清液,当菌液量为1.5%,在添加助凝剂(CaCl2)用量为0.2g/L的条件下。絮凝率最高可达到90.76%。作为煤炭生物絮凝剂酱油曲霉具有优良的絮凝效果。     

新城疫Ⅱ系、Ⅰ系疫苗早期免疫的探讨及其免疫应答的形态学观察

试验对具有母源抗体的雏鸡采用新城疫Ⅱ系苗滴鼻首免,20日龄Ⅰ系苗饮水二免,通过对1000羽试验雏鸡血清HI抗体效价的连续检测和攻击强毒试验结果,证明雏鸡首免和二免后,HI抗体效价维持在较高水平,对强毒攻击具有坚强的保护力,至100日龄时保护率仍可达80％,而对照鸡在30日龄时保护率即降至0。Ⅰ系苗饮水二免后,经80天观察,未见鸡群出现任何明显不良反应,二免后3天采取免疫鸡和同日龄同群感染鸡的脑,肺脏、脾脏,腔上囊和血液分别作成匀浆接种9日龄鸡胚,未能分离到Ⅰ系病毒。关于新城疫苗免疫应答的形态学变化,国内外尚乏报道,本试验作了比较系统的观察,注意到雏鸡首免和二免后各个时期的免疫器官:胸腺,腔上囊,脾脏,盲肠扁桃体,肠道淋巴组织和气管,肺脏,肝脏及肾腔等器官的免疫应答表现,特别在Ⅰ系苗二免后,更为明显,免疫后淋巴母细胞和浆细胞的增多反应了HI抗体效价提高的相关免疫状态,气管和肺脏次级支气管上皮下淋巴细胞的大量集聚和形成淋巴小结是另一突出特点,提示采用滴鼻和饮水免疫途径可以诱导呼吸道的局部免疫应答和增强呼吸道的局部抵抗力。试验表明:1日龄雏鸡Ⅱ系苗滴鼻首免,20日龄Ⅰ系苗饮水二免,效力可靠,安全,方法简便易行,具有一定的实用价值,并在形态上对免疫效力予以佐证,结合文献论证了呼吸道局部免疫力在抵抗新城疫强毒感染中的重要意义。     

大肠杆菌K88ac-ST1-LTB融合蛋白多价卵黄抗体的制备

对已构建的重组菌株BL21(DE3)(pETXKSL3)进行鉴定,酶切鉴定证实重组质粒pETXKSL3含有K88ac-ST_1-LT_B融合基因且阅读框架正确.Western blot分析表明K88ac-ST_1-LT_B融合蛋白能够被ST_1单抗、K88ac和LT_B抗体识别.以K88ac-ST_1-LT_B融合蛋白为抗原免疫蛋鸡制备卵黄抗体,ELISA法测定卵黄抗体效价可达1∶13 200.仔猪攻毒实验表明制备的卵黄抗体对仔猪黄痢和仔猪白痢的预防有效率为96%,上述研究结果说明K88ac-ST_1-LT_B多价卵黄抗体对由ETEC引起的新生仔猪腹泻具有很好的预防效果,从而为最终开发出一种新型高效、可替代抗生素的防治新生仔猪大肠杆菌性腹泻的特异性卵黄抗体生物防治制剂打下坚实基础.     

鸡卵黄抗体的制备及其不均一性

介绍了免疫期卵黄液中白蛋白（牛）抗体效价和亲合力的变化。研究了ＰＨ对稀释卵黄液去脂效果,以及硫酸铵浓度对ＩｇＹ浓缩、纯化效果的影响。探讨了抗白蛋白ＩｇＹ的异质性。实验表明稀释卵黄液酸化处理和ＩｇＹ盐析的最适合条件分别是ＰＨ５．１和２．２ｍｏｌ／Ｌ。经免疫亲和柱层析或金属螯合亲和柱层析后,白蛋白抗体样品均出现多个不同层析行为的抗体峰。实验提示免疫卵黄液中不仅可能存在不同亲合力、特异性的白蛋白抗体,还     

抗弓形虫IgY抗体在酶免疫试验中的应用

IgY是从鸡蛋黄中提取的免疫球蛋白,不但具有高免疫活性,而且不受类风湿因子、血清补体等干扰,在免疫学试验中具有优越性。用纯化的弓形虫虫体抗原免疫白菜杭鸡获得特异性的IgY抗体,用辣根过氧化物酶标记后与抗人IgM单抗配伍建立捕获法酶免疫试验,与同类试剂对照,平行检测192份临床血样,检测结果二者吻合,表明该IgY具有良好的特异性和敏感性。     

聚乙二醇一步沉淀提取卵黄抗体

利用聚乙二醇一步沉淀法提取卵黄抗体 .当聚乙二醇浓度为 5 %时 ,可获得 66%抗体回收率 ,抗体纯度达 92 % ;当聚乙二醇浓度为 10 %时 ,抗体纯度为 85 % ,但可获得 99%的抗体回收率 ,且抗体活性没有损失 .     

鸡ND—IBD二联高免卵黄抗体的研制与应用

应用秦皇岛市流行的IBDV,配合ND弱毒疫苗免疫蛋鸡制备出ND—IBD高免卵黄抗体,经各项检验、初步应用符合治疗和预防ND、IBD的要求,具有特异、快速、成本低、易制备的特点。     

鸡卵黄免疫球蛋白的嗜硫性色谱一步分离纯化

采用重力沉降法对卵黄液进行脱脂预处理 ,利用嗜硫性色谱 ,实现鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的一步分离纯化 ,蛋白质的回收率高达 91% .鸡卵黄免疫球蛋白IgY经SDS -PAGE检测为电泳纯 ,活性回收率达 70 %以上     

鸡传染性法氏囊病病毒VP5基因的克隆及其序列分析

从病变鸡法氏囊组织中分离纯化IBDV,提取其基因组RNA.以IBDVRNA为模板,进行反转录反应合成cDNA第1链.采用PCR技术扩增VP5基因.将PCR产物经酶切后与pcDNA3.1(+)载体连接,经转化、筛选得到重组质粒pIBDV-VP5.对VP5基因进行了测序并对其序列进行了分析.     

鸡脾转移因子对传染性法氏囊疫苗的作用

中等偏弱毒力的传染性法氏囊病毒(IBDV)疫苗免疫鸡不产生免疫抑制而中等毒力以上的传染性IBDV疫苗免疫时会导致鸡不同程度的免疫抑制,给养禽业造成很大的经济损失,为了试验转移因子(TF)拮抗这种免疫抑制的作用,将180只试验AA肉鸡10日龄雏鸡分为6组,每组30只,其中第6组为对照组.第1组免疫中等偏弱Bj836株IBDV疫苗,第2、3、4、5组鸡在10日龄时免疫中等毒力B87株IBDV疫苗,其中第3、4、5组使用不同剂量的TF.免疫24h后,6组鸡均免疫新城疫(ND)疫苗.在鸡17日龄、24日龄、31日龄时,各组随机抽取鸡检测免疫器官指数和ND抗体水平.试验结果显示:第3、4、5组鸡免疫器官指数及ND抗体水平明显高于第2组,且分别稍低、接近、高于健康鸡第6组.表明了TF可拮抗IBDV免疫时引起的免疫抑制,效果显著.     

卵黄抗体在防治中华鳖气单胞菌病中的应用

探讨了卵黄特异性抗体在防治中华鳖气单胞菌病中的应用 .产蛋鸡经嗜水气单胞菌免疫后 ,产生了高效价的卵黄抗体 ;冻干过程中抗体活性基本没有损失 ;体外抑菌试验表明 ,该特异性抗体具有较强抑制嗜水气单胞菌的效果 ;鳖场被动免疫防治试验证明 ,该抗嗜水气单胞菌卵黄抗体对中华鳖气单胞菌病具有良好的防治效果 .     

鸡传染性法氏囊病毒LS株的分离与鉴定

用SPF鸡胚,从江苏溧水某鸡场病死鸡的法氏囊组织中分离到一株病毒,接种健康非免疫鸡,能致鸡3～5 d内全部发病,死亡率达55%以上,腿肌和腺胃出血,肝和肾肿大出血,脾脏出血,法氏囊肿大出血;该病毒不能凝集鸡红细胞,可以与IBDV阳性血清产生沉淀;应用RT-PCR进行检测,扩增IBDV VP2基因,并与GenBank中的已知序列进行比较.结果表明,所分离的病毒为IBDV毒株.     

一步洗脱离子交换色谱法分离纯化蛋黄中IgY

报道了一步洗脱离子交换色谱法分离纯化蛋黄水溶性组分 (WSF)中IgY的新方法 .通过将含IgY的WSF用pH7.0磷酸盐缓冲液 (PBS)调整至盐浓度为 0 .0 75mol L ,上样到DEAEToyoprarl6 50M阴离子交换色谱柱 ,用 0 .15mol LpH7.0PBS洗脱、收集 ,再经SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳检验为单一组分 .分离方法简单、分离纯化效果好 ,总蛋白回收率达 93%以上