2种致病疫霉拮抗真菌混合发酵及抗菌物质稳定性研究

为获得防治马铃薯晚疫病稳定的生防制剂,对能够有效抑制致病疫霉的拮抗菌梨黑斑病菌LH-03和白菜黑斑病菌BH-09混合发酵的可行性及发酵条件进行了确定和优化,同时对混合发酵产物的抗菌稳定性进行了初步研究.结果表明,2种真菌之间无桔抗作用,可进行混合发酵,并且发现混合发酵后可有效提高2种真菌发酵液的抑菌活性;混合发酵的最佳...     

致病疫霉产孢子囊培养基及诱导方法的筛选

致病疫霉(Phytophthora infestans)A2交配型菌株P7723不易产生孢子囊。为了获得大量的孢子囊,试验研究比较了5种不同培养基及7种不同诱导方法对致病疫霉孢子囊产量的影响。研究结果表明:5种培养基中只有燕麦培养基(OMA)和大豆培养基(BA)能产生孢子囊,分别为(106±6.29)、(273±6.86)个/cm~2,其余培养基均未产生孢子囊。在7种诱导孢子囊产生的方法中,40℃处理、菌丝丛水培处理(10%V8)、皮氏溶液处理和土壤浸出液处理4种方法能诱导原本不产生孢子囊的3种培养基产生孢子囊;其中,40℃处理的诱导效果最好。此外,40℃处理也使原本产生孢子囊的OMA、BA培养基上的孢子囊量显著增加。在所有培养基的不同处理中,40℃处理的CA培养基上菌株产生的孢子囊量最多,可达到(767±7.98)个/cm~2。试验为研究致病疫霉菌生长发育过程中的基因表达分析及遗传转化奠定了基础。     

拮抗菌HT-6对致病疫霉的竞争及诱导性抑制

为深入了解细菌HT-6对致病疫霉(Phytophthora infestans)菌丝生长的抑制机理,采用琼脂柱对接法观察细菌HT-6对致病疫霉空间位点的竞争,铬天青(CAS)培养基观察嗜铁素的产生,硫酸-蒽铜比色法和水杨酸浓硫酸比色法分别比较葡萄糖和硝态氮的利用率,同时以致病疫霉及其细胞壁制剂(CWP)为诱导物,采用平板透明圈法观察HT-6产生的纤维素酶和β-1,3-葡聚糖酶,DNS法测定酶活并评价含有2种酶的无菌体发酵液对致病疫霉的抑制活性.结果显示,单独接种在PDA琼脂柱上的致病疫霉能沿琼脂柱生长并迅速扩展至黑麦固体培养基(Rye)表面生长,与致病疫霉菌饼对接的HT-6也能沿着琼脂柱生长并扩展至Rye培养基表面迅速蔓延,而与HT-6对接的致病疫霉菌丝体仅在PDA琼脂柱上生长,没有扩展至Rye表面,被HT-6的生长所阻止;HT-6能产生嗜铁素,致病疫霉不产生嗜铁素;HT-6对葡萄糖和硝态氮的利用率(75.66%和69.05%)均显著高于致病疫霉(55.97%和56.87%);HT-6菌株单独培养时不产生纤维素酶和β-1,3-葡聚糖酶,但致病疫霉菌体和CWP均能诱导HT-6产生这2种酶,其中菌体诱导后的2种酶活,分别为6.638、2.913 U,均显著高于CWP的诱导处理(1.326、1.289 U,P<0.05);CWP诱导后含有2种酶的HT-6无菌体发酵液对致病疫霉菌丝生长具有明显抑制作用(抑菌率为33.25%),但显著低于单独培养的HT-6菌液原液的抑菌活性(抑菌率为81.33%).这表明HT-6能够通过空间和营养竞争以及致病疫霉诱导产生的细胞壁降解酶抑制致病疫霉,其中以空间和营养竞争为主.     

致病疫霉拮抗菌LH-03的抗菌物质分析及其防病作用

为了明确对致病疫霉(Phytophthora infestans)菌丝生长有显著抑制作用的梨黑斑病菌(Al-ternaria alternata)LH-03发酵液中的抗菌物质,通过硫酸铵和乙醇的交互沉淀、蛋白酶K和酚-氯仿变性处理以及SDS-PAGE电泳分析抗菌物质的基本性质,并在马铃薯块茎切片上测试防病效果.结果显示,抗菌物质为蛋白质类物质,其分子质量大小约为40ku,粗蛋白与发酵液原液相比,抑菌活性略有下降,其最适抑菌质量浓度为3.5mg/mL,抑菌率为72%,在马铃薯块茎切片上对致病疫霉侵染的保护率可达95%以上.表明LH-03产生的蛋白类抗菌物质对马铃薯晚疫病具有较大的防病潜力.     

拮抗菌HT-6引起致病疫霉菌体的生理变化

为了解核桃内生细菌HT-6对致病疫霉的抑制作用机理,采用对峙培养和传统培养相结合的方法检测了受拮抗菌HT-6抑制不同阶段后致病疫霉菌丝体内部分活性物质、抗性相关酶活、电导率以及溶氧量的变化.结果显示,随对峙培养时间延长,受抑制组与对照组中致病疫霉菌丝体内可溶性糖和淀粉含量虽然均呈增加趋势,蛋白质含量均呈下降趋势,但受抑制组可溶性糖、淀粉及蛋白质含量均远低于对照组,且均在对峙培养第15天时差异最大(P<0.01);受抑制组和对照组菌丝体内苯丙氨酸解氨酶、多酚氧化酶和过氧化物酶3种酶活的变化趋势与上述3种物质的变化趋势相似,但均在培养的第12天达到最高,且受抑制组菌体内3种酶活均远高于对照组,与对照达到极显著差异(P<0.01).此外,受拮抗菌HT-6抑制后致病疫霉菌丝体内的电导率(162.77 μS/cm)显著高于对照组(60.03 μS/cm),而溶氧量(47.13%)显著低于对照组(56.1%).这些结果表明:HT-6菌株可通过抑制或大量消耗致病疫霉菌丝体内部分活性物质,同时增加细胞膜透性、降低呼吸作用实现对致病疫霉菌丝体生长的抑制作用.     

樟疫霉(Phytophthora cinnamomi)的研究进展

我国樟科植物众多,国外有关樟疫霉对樟科植物造成严重危害的报道较多,而国内对其研究较少。笔者从樟疫霉的分类地位、危害分布情况以及鉴定方法、遗传关系、生活史等方面进行综述,在此基础上认为应从以下方面深入研究:(1)对极易受到樟疫霉危害地区的樟属重要种植地的樟疫霉病害发生情况进行调查,明确樟疫霉的危害状况;(2)对来自不同地区的樟疫霉进行亚磷酸盐敏感程度研究;(3)对亚磷酸盐不同敏感程度菌株之间的遗传特性进行研究,明确亚磷酸盐的作用机制。     

植物真菌致病基因的研究进展

通过标记突变技术,从真菌中找到79个致病基因。这些基因在侵染结构形成、细胞壁降解、克服和避免寄主的防卫反应、毒素产生、信号传递以及对寄主体内环境应答等方面发挥重要作用。随着技术的不断完善,陆续发现了一些具有其它功能的致病基因。本文介绍了近几年这方面的研究进展。     

疫霉属真菌的分类研究（综述）

疫霉属（ＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｄｅＢａｒｙ）是１８７６年由ＡｎｔｏｎｄｅＢａｒｙ创建的。目前,世界公认的疫霉属有６７个种和变种（其中包括１０个海生种）,我国报道的大约有２６个种,其中仅报道于台湾的有９个种。人们对疫霉菌的认识及其分类地位的确定经历了一个十分复杂的过程,该菌的研究对植物病理学的发展起了十分重要的推动作用。本文从疫霉属的建立、其分类地位的确立过程,疫霉菌种的分类标准及其分种特征评价等方面,对疫霉菌的分类研究进行了综述。     

对放线菌Sy11有诱导作用的致病疫霉信号分子研究

致病疫霉(Phytophthora infestans)能产生一种信号分子,诱导放线菌Sy11菌株产生抑菌物质从而抑制致病疫霉.为明确在哪种培养方式下致病疫霉更易产生这种信号分子以及信号分子的物质类别,本文采用生长速率法对致病疫霉单独培养(单独固体培养和单独液体培养)以及与Sy11共培养(对峙培养和混合培养)产生的信号分子诱导Sy11抑菌作用的活性进行了比较,并以不同有机溶剂对信号分子的物质类别进行了初步分析.结果显示,致病疫霉无论单独培养还是与Sy11共培养,均可产生诱导Sy11抑菌作用的信号分子,其中以在固体黑麦培养基上与Sy11对峙培养产生的信号分子的诱导活性最强,菌落直径为24.79 mm,但与其他3种培养方式所产生的信号分子的诱导活性并无显著性差异;对致病疫霉单独液体培养后无菌体发酵液的分析表明,其中脂类粗提物的诱导活性(菌落直径32.8 mm)远高于糖类(菌落直径61.5 mm)和蛋白质类(菌落直径60 mm)粗提物,进一步对其中脂类物质的萃取显示,乙酸乙酯的萃取效果明显优于乙醇和石油醚.乙酸乙酯萃取物诱导Sy11后对致病疫霉菌丝生长有显著的抑制作用(菌落直径为35 mm)与乙醇萃取液的处理达到显著性差异.以上结果表明,致病疫霉生长过程中无论单独培养还是与Sy11共培养均可产生能诱导Sy11抑菌作用的信号分子,该信号分子以脂类物质为主,可用乙酸乙酯萃取得到.     

马铃薯块茎抗晚疫病性与休眠状况关系

通常马铃薯块茎薯片在熟休眠关头吵感染晚疫病亲合性生理小种，或轻微感染晚疫病亲合性这与热休眠块茎中咖啡酸，植物保卫素和钩吻萤光素含量多有关系。     

辣椒疫霉菌拮抗细菌的筛选、鉴定及防效测定

从天津、河北、山东、山西、福建、河南及江苏等地蔬菜根际土壤中分离细菌1万余株,从中筛选出对辣椒疫霉菌Phytophthora capsici有明显拮抗作用的细菌802株,进一步用立枯丝核菌Rhizoctonia solani、番茄灰霉菌Botrytis cinerea及瓜果腐霉菌Pythium aphanidermatum为靶标筛选出对以上病原真菌有较好拮抗作用的菌株62株。对辣椒疫病防效温室盆栽实验结果表明,6个菌株防效在70%以上,其中菌株TB1340防效最高,达到82%。菌株TB1340生物学特性测定结果表明其具有较强的产生几丁质酶、纤维素酶和β-1,3-葡聚糖酶活性。经16S rRNA基因序列分子鉴定结合形态学观察,菌株TB1340被初步鉴定为芽孢杆菌Bacillus sp.。     

马铃薯对晚疫病病原菌的特异性

评述了Phytophthora infestans生理小种毒性的研究进展、呼和浩持P.infestans生理小种组成、P.infestans生理小种出现时间、侵袭力和毒力与植株感染关系.并报道了P.infestans单游动孢子获得的方法.     

河北省和黑龙江省马铃薯晚疫病菌SSR基因型分析

用SSR分子标记,对致病疫霉群体结构进行分析,完善了中国研究晚疫病菌的分子标记体系。利用两个SSR引物Pi4B和Pi4G对来自河北和黑龙江两个省份的58个马铃薯晚疫病菌株基因组DNA进行SSR基因型鉴定,分析其遗传多样性。河北省的菌株共鉴定出4个SSR基因型:D-03,F-01,G-02和F-06。其中,F-06是首次报道的新的SSR基因型。黑龙江的菌株共鉴定出2个SSR基因型。在两省的菌株中,基因型F-01所占比例都最大,且占绝对优势。不同交配型可存在于同一SSR基因型中,同一SSR基因型的菌株对甲霜灵的敏感性存在差异。聚类结果还显示占被测菌株群体最大比例的F-01基因型与国外的对照菌株的亲缘关系较远。     

马铃薯叶肉细胞感染Phytophthorainfestans（Mont.）dby的变化

Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ游动孢子在０．４ｍｏｌ／Ｌ甘露醇溶液的Ｒｏｓｓ原生质体培养基中生长表明。在最初几小时生长的差别不大，只有经过２０ｈ之后，在培养基中游动孢了孢芽长度比对照（水中）较长。在液体培养基中共同培养原生质体和孢芽，没有发现游动孢子孢芽营养趋向。同时，Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ不同生理小种菌丝体潜育的原生质体的存活率，经过５－６ｈ有显著差别。贝拉（Ｂｅｅｌｌａ）（Ｒ１）品种原生质体在生理小种     

YX拟青霉菌发酵浓缩物对马铃薯晚疫病菌的抑制作用

 测定YX拟青霉菌发酵浓缩物(YFC)对马铃薯晚疫病菌的抑制作用,发现YFC对晚疫病菌菌丝生长具有明显的抑制作用,2 g/L的YFC对菌丝生长的相对抑制率达63.00%;经YFC处理后的晚疫病菌丝扭曲、分枝增多、菌丝膨大、变形甚至断裂;盆栽实验中YFC质量浓度为4 g/L时对马铃薯晚疫病的预防和治疗效果分别为83.35%和35.63%.