人类精子膜抗原的生殖免疫学研究

用脱氧胆酸钠去垢剂溶解的人精子膜蛋白,经过Lens柱亲和层析后,洗脱得与Lens凝集素亲和性高的抗原蛋白,以此主动免疫雌兔可以诱发雌兔产生特异性抗体。因此抗体作体外精子凝集试验,精子制动试验和间接免疫荧光试验(以下简称免疫特性三项指标)均呈阳性反应,说明特异性精子膜蛋白可以诱发机体产生特异性抗体。从抗血清中用饱和硫酸铵沉淀和葡聚糖凝胶G—200柱层析纯化得到的IgG,在体外对人精子试验的免疫特性三项指标亦为阳性,表明这种兔抗人精子膜蛋白的抗体是免疫球蛋自G类。在原因不明的不育症者检查中,发现有些原因不明的不孕症病例具有抗精子抗体,因此,我们获得的抗血清有助于作免疫不育症的临床诊断。我们曾用兔抗鱼精子膜蛋白的抗血清和IgG对人精子作免疫特性三项指标试验,结果亦为阳性反应,说明此抗血清有种间交叉反应。     

非哺乳动物精子膜抗原的研究 Ⅰ.鲤鱼精子膜蛋白组分Ⅲ的分离纯化及其理化性质的研究

本文用离子型去垢剂脱氧胆酸钠溶解鲤鱼精子膜蛋白,制备性聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳进行分离,电泳洗脱结合葡聚糖凝胶柱层析纯化,得到对小白鼠具有良好抗生育效果的鲤鱼精子膜蛋白组分III,并对其理化性质进行了研究.     

非哺乳动物卵透明带的成熟度和其免疫小白鼠抗生育效应的关系

前言应用卵透明带免疫进行生育控制的研究,近年来取得了较大的进展。不仅发现这一层包被在卵子外层的非细胞性透明带物质,有强的抗原性,而且进一步发现由它诱发的抗透明带的抗血清,有组织特异性,可以阻止体外及体内的精卵结合,起到抗生育效应。其作用原理可能是在卵表面形成抗原抗体免疫复合物,改变了卵透明带的理化特性,这表现在透明带折光性的变化和抵抗蛋白酶的消化作用等方面,从而影响精子在卵表面的粘附,以及干扰精子的穿透,抑制精卵的结合。     

牛奶中过敏原组分的分离纯化及主要过敏原的鉴定

目的:分离纯化并鉴定牛奶中引起过敏反应的主要致敏原组分,并分析其与组胺释放的关系.方法:等电点沉淀、Sephadex G-50凝胶层析和DEAE-Sepharose离子交换层析等技术分离纯化牛奶过敏原组分.脱脂乳浸液免疫C57/BL6小鼠制备抗血清.Western-Blotting分析脱脂乳致敏原组分.间接ELISA检测抗血清中slgE和sIgG;同时荧光法检测各致敏组分体外诱发免疫小鼠腹腔肥大细胞组胺释放率.结果:分离纯化出酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳白蛋白等致敏组分(纯度>90%).免疫印迹表明酪蛋白是主要致敏原组分.抗血清sIgG水平差异显著,sIgE水平没有大的变化;组胺释放率与sIgG水平是一致的,而与sIgE水平没有明显相关性.酪蛋白抗血清sIgG效价最高为1:25 600,组胺释放率高达(73.28±9.31)%.结论:牛奶中主要过敏原组分鉴定为酪蛋白,对牛奶过敏症的体外诊断治疗以及低/无过敏原配方奶的研制有一定的意义.     

斜纹夜蛾核型多角体病毒多角体蛋白和病毒粒子的血清学研究

斜纹夜蛾核型多角体病毒多角体蛋白的抗血清与其同源抗原,在双向免疫扩散和免疫电泳中产生一条沉淀线和一条沉淀弧,病毒粒子的抗血清与其同源抗原,在双向免疫扩散和免疫电泳中形成两条沉淀线和三条沉淀弧。异源系统之间无交叉反应。凝胶内吸收试验表明多角体蛋白与病毒粒子之间不存在共同抗原,两种组分无血清学关系。     

魚卵透明带分离纯化方法及其对小白鼠抗生育效应的比较研究

前言早在1928年前曾有人证实卵组织皮下移殖可以引起不妊,但未引起人们重视。直到五十年代初期perlmann和他的同事对受精卵、精子和胶质的匀浆注射兔子所获得的抗血清的作用进行了广泛的研究,证明其中存在着一系列的抗原抗体反应,指出卵子的皮层具有一系列高度复杂而又与胶膜不同的抗原结构。到六、七十年代由于免疫技术的突破性进展,先后发现这些抗原位于卵的表面、卵泡的内膜和闭锁卵泡之中。1976年国外已报导应用哺乳类透明带作兽用抗生育疫苗专利。近年来,对非哺乳动物中的鱼卵透明带在哺乳类的抗生育效应开展了研究,并初步从透明带中分离提取出有抗生育作用的热溶性蛋白组分。国外对哺乳动物卵透明带的分离提取多用热溶解法,日本有报导应用植物凝集素作亲和层析分离提纯,1980年美国有报导用物理和化学相结合的分离提纯方法。鱼卵透明带的分离纯化方法及其理化性质一直未有报导。     

基因工程菌株产生含人类绒毛膜促性腺激素抗原的研究 Ⅱ.β—galactosidase—hCG聚体蛋白免疫原性

基因工程菌株产生的含人类绒毛膜促性腺激素(hCG)β亚单位C末端36肽的β-半乳糖苷酶杂交蛋白(简称β-galaclosidase-hCG),在未经解聚处理前免疫新西兰种白兔和昆明种小白鼠,其抗血清在免疫双扩散试验和对流免疫电泳中对hCG没有形成沉淀线作用。而此杂交蛋白经解聚处理后,其抗血清与hCG相作用,在对流免疫电泳和免疫双扩散试验中都出现抗原抗体反应的免疫沉淀线。从多种蛋白质解聚系统中,经过反复试验,筛选出对β-galactosidase-hCG杂交蛋白有良好解聚作用的解聚剂为2M脲、0.9MSDS、0.005M巯基乙醇;解聚作用最适温度是60℃,最适时间为40分钟。     

抗精子抗体对阴道黏膜的刺激性研究

研究抗精子抗体的体外杀精效果及其对金黄地鼠阴道粘膜的刺激性,以初步评价该药作为外用避孕药应用的可能性.将抗精子抗体与新鲜精液直接混合后镜检;用导管将抗精子抗体凝胶涂布于地鼠阴道内,每天一次,两周后解剖做病理切片观察并评分.抗精子抗体的的最低杀精浓度为0.31 mg/mL;抗精子抗体凝胶对地鼠阴道粘膜刺激性评分值为5.0±0.9,在可接受的范围内.抗精子抗体具有体外杀精作用,但同时也有轻度、可接受的阴道刺激性,作为外用避孕药是可行的.     

猪丹毒杆菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)有效抗原的分离纯化及其免疫学性质

一、用0。05M、PH7.5磷酸缓冲液抽提 C43—5猪丹毒菌株丙酮粉,用 DEAE—纤维素柱层析分离抽提液,得到 A、B 两个峰。二、将 A、B 两峰的冻干粉用去离子水配成一定浓度后,分别同马抗猪丹毒高度免疫血清起反应,结果均有沉淀线出现,表明 A、B 两峰所包含的组分具有血清学活性。但用小白鼠作保护性试验,组分 A 无免疫原性,对小白鼠的保护率为零,面组分 B 有免疫原性,对小白鼠的保护率为100%。三、用 Sephadex G—100层析组分 B,在层离曲线上出现Ⅰ、Ⅱ两峰,两峰所包含的组分具有血清学活性。用主动免疫法对小白鼠作免疫原性检定,结果峰Ⅰ组分的保护率为90%,峰Ⅱ组分的保护率为零。四、用圆盘电泳分析,峰Ⅰ呈三条区带,峰Ⅱ呈两条区带。峰Ⅱ两条区带的电泳迁移率与峰Ⅰ三条区带中的两条相同。峰Ⅰ中有一条迁率较慢的为峰Ⅱ所没有。五、实验结果证明固体培养的 C43—5猪丹毒杆菌的有效抗原存在于 SephadexG—200分子筛层析的Ⅰ峰,即圆盘电泳中泳动较慢的大分子组分.其分子量大于200,000。     

红芪水提物抗炎作用的动物实验研究

探讨红芪水提取物（Radix hedysari water extract, RHWE）对小白鼠的体外抗炎活性。选取体重20~28 g SPF级Balb/c小白鼠100只,通过小白鼠腹股沟棉球肉芽肿增生抑制试验和二甲苯致小白鼠急性耳肿胀试验检测红芪提取物抗炎效果,将小白鼠急性耳肿胀试验打下的耳片制作石蜡切片,观察其形态学变化。红芪提取物高、中、低浓度组对小白鼠腹股沟棉球肉芽肿增生抑制率分别是18.63%、15.69%和6.87%;红芪提取物高、中、低浓度组对小白鼠急性耳肿胀抑制率分别是27.90%、5.58%和2.05%;病理切片观察显示,红芪提取物低浓度组和阴性对照组弹性软骨和皮肤层之间空隙明显,真皮层内组织结构散布存在,中高浓度组耳组织相对完整,未见明显炎症反应。研究表明,红芪提取物具有一定的抗炎活性,且其抗炎活性在一定范围内与浓度呈正相关。     

兔抗猪α_1－AT抗血清的制备及其效价测定

采用完全弗氏佐剂乳化抗原，成功地制备了兔抗猪α＿１－ＡＴ抗血清，经免疫双扩散反应为单一沉淀线，抗血清的效价为１：１．６。     

双链核糖核酸的免疫化学研究——Ⅱ.几种真菌病毒双链核糖核酸的免疫化学鉴定

用国产多聚[I]:多聚[C]制备成双链RNA特异性的抗血清。在Ouchterlony免疫双扩散中此抗血清能和产黄青霉803,316及小麦全蚀病菌的病毒核酸产生沉淀线,而和106℃加热迅速冷却变性的上述病毒核酸以及酵母RNA,TMV-RNA均不产生沉淀线。证明三株真菌的病毒核酸为ds—RNA。试验也证明在免疫双扩散中,多聚[I]:多聚[C]抗血清和产黄青霉803,316的病毒体也可产生沉淀线,但和小麦全蚀病菌的病毒体不产生沉淀线。依同法也可直接测定由感染真菌病毒的菌丝体中提取的病毒ds-RNA。从而可用这一简易灵敏的免疫化学方法筛选双链RNA真菌病毒。     

幼年小白鼠睾丸内精子出现的时间

用睾丸的分散细胞悬滴法制备玻片标本，观察幼年小白鼠睾丸内出现精子的确切时间．实验研究结果表明，小鼠出生后第３７ｄ于睾丸内见有精子出现，当小鼠出生后至第３８ｄ时，睾丸内的精子数量明显增多．     

幼年小白鼠睾丸内精子出现的时间

用睾丸的分散细胞悬滴法制备玻片标本，观察幼年小白鼠睾丸内出现精子的确切时间。实验研究结果表明，小鼠出生后第３７ｄ于睾丸内见有精子出现，当小鼠出生后至第３８ｄ时，睾丸内的精子数量明显增多。     

青钱柳叶多糖不同组分体外降血糖及抗氧化活性研究

【目的】研究青钱柳叶多糖的体外降血糖及抗氧化活性。【方法】以对α-葡萄糖苷酶的抑制作用表示青钱柳叶多糖体外降血糖活性,以总抗氧化能力、清除DPPH自由基、羟基自由基能力和Fe²⁺螯合能力评价其体外抗氧化活性。【结果】青钱柳叶多糖各组分对α-葡萄糖苷酶均有一定的抑制作用,且呈现一定的剂量-效应关系。不同醇沉多糖组分中,50%醇沉组分对α-葡萄糖苷酶的抑制作用最强; 青钱柳叶多糖各组分均具有一定的抗氧化活性,不同醇沉组分清除DPPH自由基能力以及总抗氧化能力由强到弱依次为50% 组分、60% 组分、70%组分、80%组分,而清除羟基自由基能力以及对Fe²⁺螯合能力的强弱正好相反。【结论】青钱柳叶中含有的多糖组分具有良好的体外降血糖和抗氧化活性,可进一步加工利用。     

含钛微合金钢的强度组分的研究

用ＴＨＥＲＭＥＣＭＡＳＴＯＲ－Ｚ型热模拟试验机模拟热连轧生产，研究终轧温度和轧后冷却工艺对Ｃ０．０７９，Ｓｉ０．０９５，Ｍｎ０．０５７，Ｐ０．０１２，Ｓ０．０２０，Ｔｉ０．０２０，Ｔｉ０．０６４，Ｃｕ０．０６钢屈服强度的影响。发现采用轧后立即水冷工艺方案时，水冷中止温度和卷取温度仅影响钢的沉淀强化组分，而终轧温度变化及轧后延迟水冷时的水冷开始温度对晶界强化组分和沉淀强化组分都有影响。文中给出了相应的强化组分定量估计公式。     

精子膜抗原提取、纯化及SDS—PAGE分析

目的：分析正常生育男性精细胞膜抗原，以便进一步应用精子抗原于其抗体的检测。方法：1．精子膜抗原粗制方法，按“全国临床检验操作规程”(第二版，1998年，P398)描述的方法进行，即收集20名正常生育男性精子样品，用含0．5％NP—40的Tris—Hcl缓冲液抽提。2．粗提液蛋白含量测定采用紫外分光光度法。3．蛋白抗原纯化方法，采用冰冷乙醇沉淀法，以粗提液：冰冷95％乙醇(—20℃)＝1：9(v/v)混合，并按1／50容量加入饱和乙酸钠混匀，于—20℃放置48h。取出后于—10℃，1800g离心30分钟，弃上清，例放试管，沥干沉淀，—20℃保存备用。4、SDS—PAGE分析，步骤3所获样品，以NS溶解，通过紫外分光光度计测定含量，并调节到6mg/ml。SDS—PAGE分析条件的点样量25μl，分离胶17．5％，隔层胶5％，电泳缓冲液用甘氨酸—Tris，PH18．6，电压20v过夜，次日再150V4h。电泳后凝胶经考麦斯亮兰染色、乙酸—甲醇洗脱，直至显示清晰电泳图谱。结果：1、粗提液经紫外分光光度计测定，其原液含蛋白质为24mg/ml，最大吸收峰值280nm。2．纯化的精子膜抗原溶液经SDS—PAGE分析，图谱显示2个蛋白斑，与标准蛋白比较，其分子量一个为35—45KD，另一个为15—25KD；75—85KD处出现微量痕迹。结论：我们成功地进行了精子膜抗原提取、纯化及SDS—PAGE分析实验，结果有清晰记录，为进一步应用精子抗原检测精子抗体的研究提供物质基础。     

一种牛精子膜蛋白的纯化及在生殖中的作用

牛精子经ψ=0.5%的NP-40洗脱后,先经伴刀豆凝集素Con A(Concanavalin A)亲和层析分离,经SDS-PAGE电泳,得到相对分子质量Mr分别为32×103,26×103,20×103的3种与Con A结合的糖蛋白CBG(Con A binding glycoprotein).再将亲和层析分离所得蛋白成分经葡聚糖凝胶(Sephadex G-100)层析柱进一步纯化,得到Mr为26×103的单一成分.将26×103 CBG免疫兔后制得抗血清,经PAP免疫组织化学染色发现:26×103的CBG抗原主要分布于牛精子的顶体区,同时鼠精子表面也有同样分布,说明26×103的CBG抗原具有种同保守性.后将26×102的CBG免疫雌鼠,发现其产仔率由对照组的(8.5士2.6)只(n=12)减少到(4.3士1. 8)只(n=24),经t检验(不配对,单尾),二者间差异极显著(p＜0.001).本实验结果表明:26×103的CBG在精卵结合中可能发挥重要作用,并有可能开发为人工避孕疫苗.     

阴沟肠杆菌(Enterbacter Cloacae)糖蛋白活性组分抑瘤效应的研究

从水体中分离到阴沟肠杆菌（Enterbacter Cloacae)，利用该菌制剂对荷肉瘤S180（实体型）小鼠有抑瘤作用，该菌大量培养后，将菌体超声波破碎，十六烷基三甲基溴化铵（Cetyltrimethylaminonium bromide,CTAB)沉淀，乙醇沉淀得粗提物，再经DEAE纤维素柱层析，分步收集，聚乙二醇浓缩得F1、F2、F3和F4 4种主要组分，形态观察法体外抑瘤实验证明F2、F3组分对肝癌QGY7703细胞有明显杀伤作用，F3作用显著，MTT法检测F3对肝癌QGY7703，肺腺癌A549，胃癌KatoⅢ，肠癌SW1116瘤细胞株均有明显杀伤作用，其IC50分别为0．024，0．0123，0．0035，0.012mg/mL。体外抑瘤试验证明F3对小鼠无急性毒作用，并且对小鼠Lewi肺癌有抑制作用，蛋白电泳，红外和核磁共振表明F3是含木糖成分的糖蛋白，其相对分子质量为38ku.     

苦瓜子蛋白的体外抗氧化活性研究

测定了苦瓜子蛋白提取过程中不同提取物的体外抗氧化活性,从而获得不同目标活性的蛋白组分.结果表明,90%饱和度的硫酸铵沉淀蛋白的柱纯化组分抗氧化活性较强,30%的次之,60%的最弱,三种饱和度硫酸铵沉淀纯化得到的苦瓜子蛋白在不同抗氧化体系中存在抗氧化活性差异.