植物抗坏血酸过氧化物酶基因家族研究进展

抗坏血酸过氧化物酶(APX,EC1.11.1.11)是植物体内尤其是叶绿体中清除H2O2的关键酶.就抗坏血酸过氧化物酶的酶学特性、基因家族成员组成与细胞内分布、基因诱导表达特性与其在基因工程中的应用做了介绍,并讨论了其进一步的研究方向.     

过氧化物酶催化的硝化反应研究进展

过氧化物酶是一类广泛存在于动植物体内的氧化还原酶,可催化多种反应;在H2O2／NO^- 2体系下,过氧化物酶可以催化酚类以及其他芳香族化合物的硝化,对过氧化酶用途、催化的硝化反应及其硝化机理做简要的综述。     

酵母中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的分析

分解H2O2和有机过氧化物的含硒谷胱甘肽过氧化物酶(Se-GSH-Px)活性和只分解有机过氧化物的不含硒谷胱甘肽过氧化物酶(non-Se-GSH-Px)活性都存在于酵母中.酵母在无氧的条件下培养,Se-GSH-Px活性减弱,non-Se-GSH-Px活性增强;在含有H2O2或CuSO4的培养基中生长,两种形式的谷胱甘肽过氧化物酶的活性均增加;在含硒的培养基中生长,只有Se-GSH-Px活性增加.实验结果表明,GSH-Px在酵母抗氧化作用中起着重要的作用.     

水稻OsDHHC13基因参与氧化胁迫响应的初步研究

DHHC型锌指蛋白参与细胞内蛋白质的棕榈酰化修饰,对细胞和个体的生长发育起着重要的调控作用.OsDHHC13是典型的DHHC型锌指蛋白基因.生物信息学分析发现,OsDHHC13的启动子区域含有胁迫及光响应元件,而且其编码蛋白是具有4个跨膜结构域的典型膜蛋白.对OsDHHC13过表达株系进行H2O2的氧化胁迫处理发现,过表达株系幼苗的根显著长于野生型,说明OsDHHC13能解除H2O2对根生长的抑制,提高了抗氧化胁迫的能力.随后H2O2含量测定发现,OsDHHC13过表达株系幼苗根部的H2O2含量显著低于野生型.进一步的qRT-PCR分析发现,与清除H2O2相关的酶基因的转录水平在过表达株系中显著升高,说明OsDHHC13能促进清除H2O2的相关酶基因的表达,调节内源性H2O2的动态平衡.总之,本研究结果初步证明锌指蛋白基因OsDHHC13正调控水稻的抗氧化胁迫能力.     

过氧化物酶(POD)对协定糖化麦汁品质的影响

麦芽中的过氧化物酶(POD)具有活性高、热稳定强的特点,这为糖化阶段酶促氧化酚类物质的反应创造了条件.本文研究了大麦麦芽中POD活性对协定糖化麦汁品质的影响.结果表明:POD对麦汁的显著影响受限于H2O2的可得性,当H2O2的浓度为2 mmol.L-1时即可对麦汁酚类物质含量、抗氧化力、过滤速度和外观特性产生显著的不利影响.而在O2存在的情况下,高活性的POD同样可以氧化酚类物质,但对麦汁过滤速度和外观品质的影响不及H2O2显著.在实际糖化过程中由于底物H2O2和O2受限,使得POD酶促氧化多酚的反应未能充分表现.     

黄孢原毛平革菌锰过氧化物酶基因（MnP2）的克隆

应用RT-PCR技术,从黄孢原毛平革菌5.766（Phanerochaete chrysosporium）总RNA中成功扩增出预期大小约为1.3 kb的特异性条带,将扩增产物提纯后克隆入PUC19载体,经转化、筛选及酶切鉴定后,获得锰过氧化物酶（MnP2）基因的克隆。序列分析表明,扩增的MnP2基因片段其cDNA长度为1 149 bp,编码358个氨基酸,与其它已发表文献报道的MnP2序列一致,与其同工酶MnP1和MnP3的核苷酸同一性分别为81%和66%。     

6A,6A′-苯胺-6B,6B′-硒桥联-β-CD底物的特异性

运用双酶偶联体系分别测定6A,6A′-二苯胺-6B,6B′-二硒桥联-β-CD（6-AnSeCD）催化谷胱甘肽（GSH）还原过氧化氢（H₂O₂）、 叔丁基过氧化氢（t- BuOOH）和枯烯过氧化氢（CumOOH）3种结构不同氢过氧化物的谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活力, 并考察6-AnSeCD催化这3种氢过氧化物的稳态动力学. 结果表明: 6 AnSeCD还原CumOOH的GPx活力最高; 6-AnSeCD的催化机制为乒乓机制; 6 AnSeCD的假一级反应速度常数（k_max）、 米氏常数（K_m）和二级反应速率常数（k）均显示CumOOH为6-AnSeCD的最适底物.     

共振光散射测定辣根过氧化物酶

辣根过氧化物酶(HRP)催化H2O2氧化四甲基联苯胺(TMB)生成大分子聚合物并产生强烈的共振光散射,由此建立了操作简单快速、高灵敏度测定HRP的新方法. 探讨了酸度、TMB浓度、H2O2浓度、温度等对散射信号的影响. 在最佳实验条件下测定HRP的线性范围为1×10-7～1×10-6 g/L,最低检出限1.8×10-8 g/L.     

谷胱甘肽过氧化物酶模拟物6-CySeCD对过氧化氢诱导小鼠成纤维细胞损伤的保护作用

考察不同剂量的H2O2作用于小鼠成纤维细胞(NIH3T3)后,细胞脂质过氧化、存活率、DNA片段化的变化情况,并研究谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的模拟物6A,6B-环己胺-6A′,6B′-硒桥联-β-CD(6-CySeCD)抗H2O2诱导小鼠成纤维细胞损伤的能力.结果表明:H2O2对NIH3T3细胞有严重损伤;6-CySeCD能有效保护细胞,防止紫外线引起的损伤.     

盐度对互花米草氧化和抗氧化系统的影响

研究了互花米草幼苗在不同盐度培养下,其叶片超氧阴离子(O2-)、过氧化氢(H2O2)、丙二醛(MDA)、谷胱苷肽(GSH)、抗坏血酸(AsA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)、过氧化氢酶(CAT)等氧化和抗氧化指标的变化.结果表明,各指标在不同盐度间都有显著差异(p<0.05).经研究发现,随着盐度的升高,O2-含量有所下降,H2O2含量稍有上升,膜脂过氧化产物MDA含量虽有上升,但幅度很小且保持在一个较低的水平,而各抗氧化保护酶的活性和小分子抗氧化剂GSH和AsA的含量都升高了,且都保持在较高的水平,说明互花米草是一种耐盐性较高的滨海盐沼植物,在盐胁迫下,其体内的抗氧化保护酶和抗氧化剂在清除O2-的过程中发挥了重要的作用.     

外源过氧化物酶提高植物抗性酶活性及可能机制分析

外源酶类常用于生物学研究,探讨外源萝卜过氧化物酶对苗期心里美萝卜根、茎、叶中抗性酶的影响.实验结果表明外源过氧化物酶能提高萝卜幼苗苯丙氨酸解氨酶和过氧化氢酶活性,降低H2O2含量,这些作用具有组织差异;质膜L-型钙通道阻断剂硝苯吡啶在单独应用时,对植物的抗性酶也有较明显的影响,并改变外源过氧化物酶的作用效果.因此,外源...     

白花泡桐根分化过程中过氧化物酶、IAA氧化酶和过氧化氢酶的变化

为了解过氧化物酶、IAA氧化酶和氧化氢酶在植物不定根分化,发育过程中的作用,在实验室分析测定白花泡桐[Paulownia foutunei (Seem.)Hemsl]不定根分化过程中过氧化物酶、IAA氧化酶和过氧化氢酶活性的变化。结果表明：过氧化物酶在根分化0d-2d的活性下降37．6％,随后逐步上升;IAA氧化酶活性在0d-2d内迅速下降了52．6％,随后逐步上升;过氧化氢酶的活性在不定根化化过程中逐步上升,0d-4d酶活性从5．1上升到10．5,从第4天开始活性增加减慢。     

孔雀石绿的催化共振散射法测定痕量过氧化氢

在pH4.8的HAc-NaAc缓冲液中,辣根过氧化物酶(HRP)催化H2O2氧化过量KI生成I3-,I3-与孔雀石绿(MG)结合形成缔合微粒,导致体系的共振散射强度急剧增强.过氧化氢分别在6.86～274.8 чg/L和6.86～343.4чg/L与486、720 nm处的共振散射光强度成良好线性关系,检出限(3σ)为O.569、O.496чg/L.据此,建立一种测定痕量过氧化氢的共振散射光谱新方法.该法简便、快速,灵敏度高,用于雨水中过氧化氢的测定,结果满意.     

金属胶束模拟辣根过氧化物酶催化过氧化氢氧化苯酚

研究了咪唑衍生物钴配合物Co(biap)·Cl2和胶束形成的金属胶束作为模拟辣根过氧化物酶(HRP)催化H2O2氧化苯酚反应;探讨了过氧化氢浓度、反应温度、酸度和胶束性质影响催化反应的原因;提出了金属胶束催化氧化苯酚的反应历程;建立了金属胶束催化苯酚氧化的动力学数学模型.     

辣根过氧化物酶在石墨电极上的固定化及其对H_2O_2的响应

基础电极的选择和酶、抗体、DNA等生物活性分子的固定化方法都是影响生物传感器性能的关键因素.以石墨电极(GE)为基础电极,基于辣根过氧化物酶(HRP)对H2O2氧化邻苯二胺(OPD)生成2,3-二氨基吩嗪(DAP)反应体系的高效催化作用,研究了HRP固定化技术.分别利用再生丝素、聚乙二醇、壳聚糖包埋固定HRP,并以HRP修饰GE为指示电极,通过电位法测定H2O2浓度,对不同的固定化方法进行评价.结果表明,利用再生丝素包埋法制备的HRP/GE电极对H2O2具有更好响应性能,其工作曲线斜率为54.97,检测下限为8.82×10-8 mol.dm-3,线性范围为3.53×10-7～8.82×10-4 mol.dm-3.所提出的HRP/GE具有制备简单、成本低廉、响应快、灵敏度高等优良性能,具有较好的应用前景.     

二苯胺-H_2O_2-HRP伏安酶联免疫分析新体系的研究

提出了以二苯胺为底物的伏安酶联免疫分析新体系测定辣根过氧化物酶 (HRP)的方法 .通过线性扫描二阶导数极谱法测定 HRP催化 H2 O2 氧化二苯胺的产物 ,从而间接的测定 HRP的浓度 ,进而用于酶联免疫分析 .在 p H=8.5的 Britten-Robinson(BR)缓冲溶液中 ,二苯胺的氧化产物可以在 -0 .53V(vs.SCE)左右处产生一个灵敏的极谱还原峰 .在选定的最佳条件下 ,应用此峰测定 HRP的检测限可达 1 .0× 1 0 - 9g/m L,测定 HRP的线性范围是 4 .0× 1 0 - 9～ 2 .0× 1 0 - 7g/m L.另外 ,还推导了酶催化反应和电极还原反应方程式     

生长素对红叶石楠组培苗过氧化物酶和多酚氧化酶活性的影响

试验对红叶石楠组培苗根诱导分化过程中过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)活性的变化进行了研究.结果表明,在使用IBA和NAA后,过氧化物酶活性在0～15 d先迅速下降,然后急剧上升,在根开始伸长时,活性又开始下降;多酚氧化酶活性在0～15 d内逐步上升,在根开始伸长时,活性也开始下降.而在不使用任何生长调节剂的情况下则不生根,过氧化物酶活性在0～15 d内逐步上升,15 d后开始下降;多酚氧化酶活性在整个根诱导过程中都维持在较低水平.同时还发现,在生根过程中,处理与对照相比,各酶的活性差异达极显著水平,表明红叶石楠组培苗的不定根发生和发育与过氧化物酶、多酚氧化酶的活性密切相关.     

伏安酶联免疫分析中一类新的HRP底物体系的初步研究

提出了以酚红、1,2,5,8－四羟基蒽醌、1,8－二羟基蒽醌三种染料类物质作为电化学酶免疫分析中辣根过氧化物酶（FRP）催化氧化反应的底物,这三种具有电化学活性物质,在HRP的催化作用下,被H2O2氧化生成非电活性的产物,导致测定的电流下降,其减少程度和HRP的浓度有一定的关系,从而建立了三种底物测定HRP的新体系,比较了它们测定HRP的灵敏度,对酶催化反应机理进行了初步的探讨。     

辣根过氧化物酶活性的电化学研究

将辣根过氧化酶固定在铜电极的表面制成酶电极,利用循环伏安法从pH值、富集时间、H2O2浓度三方面寻求酶活性的最佳条件,得出pH=6.7,富集时间为25 min时,酶的活性最大,且H2O2浓度在1.0×10-4~4.0×10-3mol/L之间呈良好的线性关系.     

稀土铽离子与微过氧化物酶-8作用的紫外光谱

稀土农用为中国科学家首创 .稀土在一定浓度范围内对农作物的增产效应已成为事实 ,但其作用机理尚不确切[1,2 ] .从细胞和分子水平对稀土与生物酶及遗传物质作用化学机制的系统研究国内外鲜为报道 .过氧化物酶POD是广泛存在于生物体内的一类以H2 O2 为电子受体的氧化酶 ,多数POD含Fe(Ⅲ ) 原卟啉IX辅基 ,属氧化血红素蛋白[3 ] .微过氧化物酶 8(MP 8)是细胞色素C(Cyt.C)的水解产物 ,保留了Cyt.C中 1 4 2 1位的氨基酸以及血红素活性中心 ,相对分子质量较小 ,卟啉环更加裸露 ,结构相对简单 ,与POD具有相同的活性中心[4 ] .因此 ,M…