大豆蛋白废水生产单细胞蛋白的菌种选择及其培养条件

针对大豆蛋白生产废水的水质特性,选择了产朊假丝酵母(Candida utilis)、热带假丝酵母(Candida tropicalis)、白地霉(Geotrichum candidum link)、解脂假丝酵母解脂变种(Candida lipolytica)和扣囊拟内孢霉(Endomycopsis fiburiger)等5种工业生产酵母,作为以大豆蛋白废水生产单细胞蛋白(Single Cell Protein,SCP)的菌种,并通过摇瓶培养实验,对其培养生长条件进行了研究。结果表明,白地霉的最佳培养条件为C/N37(马铃薯-葡萄糖培养基),pH6.5,25℃,180r/min;产朊假丝酵母为C/N5(麦氏琼脂培养基),pH6,25℃,180r/min;热带假丝酵母为C/N37(马铃薯-葡萄糖培养基),pH5.5,25℃,210r/min;解脂假丝酵母为C/N37(马铃薯-葡萄糖培养基),pH5.5,25℃,180r/min;扣囊拟内孢霉为C/N37(马铃薯-葡萄糖培养基),pH6,25℃,180r/min。5种酵母菌基本都适合生长在含糖量较高,pH偏酸性,温度在25℃左右的环境当中,比较适合利用大豆蛋白废水生产SCP,为菌种的复配提供了依据,为实现利用大豆蛋白废水生产SCP奠定了基础。     

耐盐深绿木霉TW320和拟康宁木霉TW1876生长和产孢条件优化

为优化两株耐盐木霉-深绿木霉(Trichoderma atroviride)TW320和拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)TW1876的生长和产孢条件,研究了不同pH、不同培养基,不同碳源、氮源和不同碳氮比对两株木霉菌的菌落生长和孢子产量的影响。结果显示:耐盐深绿木霉(T. atroviride)TW320在 pH =4~11 的马铃薯葡萄糖琼脂 (potato dextrose agar, PDA)培养基上均可生长和产孢,且菌丝生长和产孢的最佳pH为5,在大豆玉米粉培养基上生长速度较快,产孢量最多,该菌株菌丝生长和产孢的最佳碳源为木糖,最佳氮源是酵母膏,当碳氮比为12:1时,最有利于TW320产孢;拟康宁木霉(T. koningiopsis)TW1876菌丝生长和产孢的最佳pH为11,最优培养基为PDA培养基,以乳糖作为最佳碳源,甘氨酸作为最佳氮源,且碳氮比为9:1时,TW1876产孢量最多。     

拮抗菌HT-6对致病疫霉的竞争及诱导性抑制

为深入了解细菌HT-6对致病疫霉(Phytophthora infestans)菌丝生长的抑制机理,采用琼脂柱对接法观察细菌HT-6对致病疫霉空间位点的竞争,铬天青(CAS)培养基观察嗜铁素的产生,硫酸-蒽铜比色法和水杨酸浓硫酸比色法分别比较葡萄糖和硝态氮的利用率,同时以致病疫霉及其细胞壁制剂(CWP)为诱导物,采用平板透明圈法观察HT-6产生的纤维素酶和β-1,3-葡聚糖酶,DNS法测定酶活并评价含有2种酶的无菌体发酵液对致病疫霉的抑制活性.结果显示,单独接种在PDA琼脂柱上的致病疫霉能沿琼脂柱生长并迅速扩展至黑麦固体培养基(Rye)表面生长,与致病疫霉菌饼对接的HT-6也能沿着琼脂柱生长并扩展至Rye培养基表面迅速蔓延,而与HT-6对接的致病疫霉菌丝体仅在PDA琼脂柱上生长,没有扩展至Rye表面,被HT-6的生长所阻止;HT-6能产生嗜铁素,致病疫霉不产生嗜铁素;HT-6对葡萄糖和硝态氮的利用率(75.66%和69.05%)均显著高于致病疫霉(55.97%和56.87%);HT-6菌株单独培养时不产生纤维素酶和β-1,3-葡聚糖酶,但致病疫霉菌体和CWP均能诱导HT-6产生这2种酶,其中菌体诱导后的2种酶活,分别为6.638、2.913 U,均显著高于CWP的诱导处理(1.326、1.289 U,P<0.05);CWP诱导后含有2种酶的HT-6无菌体发酵液对致病疫霉菌丝生长具有明显抑制作用(抑菌率为33.25%),但显著低于单独培养的HT-6菌液原液的抑菌活性(抑菌率为81.33%).这表明HT-6能够通过空间和营养竞争以及致病疫霉诱导产生的细胞壁降解酶抑制致病疫霉,其中以空间和营养竞争为主.     

云南红豆杉细胞培养和紫杉醇生产

研究了在固体和液体培养条件下云南红豆杉 (Taxusyunnanensis)细胞系TY6生长和紫杉醇积累的动态及培养基中无机氮源形式对其生长的紫杉醇形成的影响 .结果表明 ,在固体和液体培养条件下 ,云南红豆杉细胞的生长和紫杉醇积累动态相似 ,但液体培养时细胞生长周期缩短了 7d,紫杉醇含量降低了 1倍 ;新形成的细胞需要经过一段时间生长后才有较高的紫杉醇合成能力 ;培养基中硝态氮浓度高有利于细胞生长 ,铵态氮浓度高有利于紫杉醇形成 ;在培养第 1 2d时用铵态氮培养基更换硝态氮培养基可使悬浮细胞的紫杉醇产量达到 8.5mg·L- 1 ,比对照高 1 .6倍     

菌肥用光合菌在纤维素水解液中的培养

对光合菌在天然培养基、合成培养基以及来自植物纤维素水解液的半合成培养基中的培养进行了研究 ,对适宜的培养基、营养物质的稀释度、菌种接种量、pH值等进行了选择 .对选出的 4号加有纤维素水解液的培养基 ,接入 5 %的菌液 ,pH为 7.0～ 7.5 ,温度为 2 5～ 30℃ ,厌氧条件下 ,光合菌生长良好 ,菌量达 2 .2× 10 9亿个/mL ,在加入光合菌生长促进液 (1% )后 ,菌量达 4.0 1× 10 9个 /mL .     

米根霉和少根根霉产富马酸的发酵条件优化研究

以米根霉和少根根霉为研究对象,明确液体种子、培养条件、培养基成分等因素对其富马酸产量的影响.结果显示,米根霉以蛋白胨为氮源、少根根霉以柠檬酸铵为氮源,二者分别在以可溶性淀粉为碳源、发酵温度为28℃、发酵液初始 pH 为6.5的条件下,发酵120h 时获得的富马酸产量最高.并且,为缓解发酵液中不断累积的富马酸对菌体细胞生长的抑制作用、诱导其合成更多产物,本文还考察了苹果浸出液和L-苹果酸等诱导剂和 NaOH 中和剂对富马酸产量的影响.结果表明：当发酵培养基中添加1.5 g/L 的 L-苹果酸和适量 NaOH 时,米根霉和少根根霉合成富马酸的产量明显提高,分别为60.755 g/L和64.712 g/L.     

黄河三角洲湿地木霉分离与耐盐活性鉴定

木霉菌可以提高植物的抗逆性。为了获得耐盐活性好的木霉菌株,本研究从盐渍化严重的山东东营黄河三角洲湿地中采集土样和水样,分离并筛选了耐盐的木霉菌株,鉴定木霉菌株的耐盐活性。结果表明:黄河三角洲湿地48个样品共分离获得64株木霉,木霉数量与土壤深度呈负相关,与盐度没有明显相关性;通过不同浓度Na Cl胁迫下木霉菌株在固体培养基(PDA)和液体培养基(PDW)中的生长和产孢情况观察,从64株木霉中鉴定出6株具有高耐盐活性的木霉菌株;其中3株木霉(TW-304、TW-327和TW-353)在1 000 mmol/L Na Cl胁迫下,菌丝生长与对照相比,耐盐活性达到50%以上,具有极高的耐盐性;通过形态学和分子学鉴定显示TW-304、TW-327和TW-353三株木霉分别为哈茨木霉、深绿木霉、哈茨木霉。该研究筛选获得的耐盐木霉菌株为耐盐微生物菌剂的开发利用提供新的种质资源。     

霍山石斛原球茎液体培养的营养调节

文章考察了培养基、碳源、氮源及激素组合对霍山石斛原球茎液体培养生长和多糖合成的影响。在MS、B5、N6、SH及各自1/2基本培养基中,SH最适原球茎生长,1/2MS最适多糖合成,继代培养30d,原球茎增重3.73倍,多糖质量分数为2.78mg/g。蔗糖、葡萄糖和果糖3种碳源中,30g/L蔗糖促进原球茎生长,明显优于其它体积质量的葡萄糖和果糖,提高碳源体积质量抑制原球茎生长促进多糖合成。NH+4与NO-3、NAA与BA或KT的体积质量与比例可以调节悬浮培养中原球茎生长和多糖合成,低体积质量NH+4对生长有利,高体积质量的氮源及ρ(NAA)/ρ(BA)为1∶1时,多糖体积质量较高,原球茎生长和多糖合成呈负相关关系,为优化霍山石斛原球茎液体培养条件提供了依据。     

对放线菌Sy11有诱导作用的致病疫霉信号分子研究

致病疫霉(Phytophthora infestans)能产生一种信号分子,诱导放线菌Sy11菌株产生抑菌物质从而抑制致病疫霉.为明确在哪种培养方式下致病疫霉更易产生这种信号分子以及信号分子的物质类别,本文采用生长速率法对致病疫霉单独培养(单独固体培养和单独液体培养)以及与Sy11共培养(对峙培养和混合培养)产生的信号分子诱导Sy11抑菌作用的活性进行了比较,并以不同有机溶剂对信号分子的物质类别进行了初步分析.结果显示,致病疫霉无论单独培养还是与Sy11共培养,均可产生诱导Sy11抑菌作用的信号分子,其中以在固体黑麦培养基上与Sy11对峙培养产生的信号分子的诱导活性最强,菌落直径为24.79 mm,但与其他3种培养方式所产生的信号分子的诱导活性并无显著性差异;对致病疫霉单独液体培养后无菌体发酵液的分析表明,其中脂类粗提物的诱导活性(菌落直径32.8 mm)远高于糖类(菌落直径61.5 mm)和蛋白质类(菌落直径60 mm)粗提物,进一步对其中脂类物质的萃取显示,乙酸乙酯的萃取效果明显优于乙醇和石油醚.乙酸乙酯萃取物诱导Sy11后对致病疫霉菌丝生长有显著的抑制作用(菌落直径为35 mm)与乙醇萃取液的处理达到显著性差异.以上结果表明,致病疫霉生长过程中无论单独培养还是与Sy11共培养均可产生能诱导Sy11抑菌作用的信号分子,该信号分子以脂类物质为主,可用乙酸乙酯萃取得到.     

B族维生素对灵芝[Ganoderma Lucidum(Leyss.ex.Fr.)Karst.]生长发育的影响

研究了7种B族维生素对灵芝生长发育的影响。发现灵芝需要B_1,B_6或B_7,特别是B_1。在除掉维生素的蔗糖—蛋白胨—无机盐培养基中同时添加B_1和B_6,于29℃下,经过13天静置培养后,菌丝干重比对照高23.6倍;在含蔗糖—谷氨酸—无机盐的合成培养基上结果一致;在蔗糖(2%)—花生饼粉(2%)—无机盐培养基中加入B_6,30℃下摇床培养7天后,菌丝干重增加13.2%。在一定浓度范围内,菌丝生长与B_1,B_6浓度变化呈函数关系。子实体发育与菌丝生长所需要的维生素一致。在含有维生素B_1和B_6的四种蛭石合成培养基上产生了正常子实体,并释放出担孢子。     

摇瓶培养条件对Phaffia rhodozyma生物合成虾青素的影响

研究了在摇瓶间歇培养中影响 Phaffia rhodozyma生长及虾青素合成的多种因素。虾青素的合成与细胞的生长相关。初始葡萄糖浓度对 Phaffia rhodozyma的生长及虾青素的合成有较大影响。虾青素含量在含 3%葡萄糖的培养中生长时有较大值 2 .32 g/L;而细胞干重在初始葡萄糖浓度为 2 %时有较大值 2 .13g/L。低浓度的硫酸铵有利于虾青素的合成及细胞的生长。氧对虾青素的合成有最直接的影响。数值回归分析表明 ,虾青素的含量与发酵培养基溶解氧线性相关 (R2 =0 .987)     

大豆为原料的根霉纤溶酶固态发酵工艺条件

研究了以大豆为原料华根霉TK317产纤溶酶固态发酵的工艺条件。采用单因素试验对固态发酵培养基的碳源、碳氮比、初始pH、加水量和温度进行了优化;采用正交试验对接种量和培养基厚度进行了研究。结果表明,实验范围内华根霉TK317固态发酵产纤溶酶的适宜培养基组成:m(面粉)∶m(大豆)=1∶9,初始pH为5.0,加水量为0.75 mL/g。适宜培养条件:培养温度为28℃,培养基厚度为15 g/250 mL三角瓶,接种量1×107个/g,培养时间为60 h。优化条件下的纤溶酶产量平均达480.52 U/g。     

抑制姜瘟青枯假单胞菌的木霉菌株的筛选及其抑菌机理

筛选得到一株可有效抑制姜瘟青枯假单胞菌的木霉菌株SMF2(Tricoderma spp SMF2)，证实其胞外分泌的抗生素--木霉素是抑制姜瘟菌生长的主要物质，该物质对热稳定，固体发酵是培养木霉制剂的有效方法，并对培养基的组成、培养条件进行了初步优化。     

青霉“青-1”的抗生物质研究初步报告

青霉“青—1”系由青岛带来本试验室,在含蛋白质优脂培养基中生长茂盛,孢子层青绿色,菌苔甚厚,基内菌丝橙黄色,老的培养,孢子层土棕色,孢子甚多。在合成优脂培养中生长较差,菌苔薄,形成菌丝束,(2-3×1mm),孢子层青绿色,基内菌丝白色或淡棕色。“青—1”的酦酵培养基以 Czapek’s 培养基(葡葡糖30克,NaNO_3 2克,K_2 HPO_4 1.0克,MgSO_4·7H_2O 0.5克·KCl 0.5克,FeSO_4 0.01克,水1000c.c.)最为适宜,至于在胰蛋白—葡萄糖,或其他合成培养基(酒石酸盐为碳源)中,培养液抗菌性能均不如 Czapek’s 培养基。在28℃培养9日后,培养液中即呈抗菌性能,11—13日后,其抗菌性能即达最高峰。     

纤维素降解木霉菌株的筛选及其生物学特性探究

选取分离自河北安国中药材种植基地不同药用植物根区土壤的7株木霉菌,通过羧甲基纤维素钠培养基初筛及玉米秸秆、甘草药渣固态发酵培养基复筛,联合筛选纤维素降解木霉菌株,采用形态学和分子生物学相结合方法进行菌株鉴定,并对其生物学特性进行探究.结果表明,经羧甲基纤维素钠培养基初筛,有4株菌表现出纤维素降解能力,分别为HQ1、BB1、DS3和DS1.经2种木质纤维素底物固态发酵培养基复筛发现,BB1以玉米秸秆为发酵基质时滤纸纤维素酶(filter paper cellulase,FPase)活性最高,HQ1以甘草药渣为基质时FPase活性最高.结合菌落形态、显微结构和DNA分子鉴定,HQ1被鉴定为长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum),BB1为非洲哈茨木霉(Trichoderma afroharzianum).2株菌生物学特性存在趋同性,适宜生长产孢pH为5~6,适宜培养温度为28~33 ℃,且都表现出抵御干旱胁迫的能力.变差分解表明,不同培养条件对木霉菌生长速率及产孢有重要影响.本实验可为后续进一步优化HQ1和BB1降解不同木质纤维素底物固态发酵培养条件提供依据.     

不同培养基对山羊毛囊体外培养的影响研究

为得到1种简捷而适宜的山羊毛囊体外培养方法,采用3因子3水平的拉丁方正交试验设计(L9(34))方法,对比研究了无血清的Williams E培养基、无血清的DMEM培养基和添加10％FCS(胎牛血清)的DMEM培养基,及其在3种培养基中分别添加0、2和10ng／mL 3种不同质量浓度的血管内皮细胞生长因子(VEGF)和表皮细胞生长因子(EGF)时对毛囊体外培养的影响。将成年青山羊皮肤上的单根毛囊完整地分离出来,并同时平行培养在9种培养基中,借助于倒置显微镜和目镜测微尺随时不断地观察毛囊生长的形态变化和测量毛根的长度。结果发现:山羊游离毛囊在9种培养基中均能很好地生长;但以无血清的培养基和在Williams E培养基的效果最好;分别和同时添加2％～10％的VEGF和EGF时可加快毛囊的生长;添加10％FCS和不添加细胞生长因子时毛囊也能生长,但生长速度较慢。     

新疆紫草(Arnebia euchroma)细胞培养过程中内源异戊烯腺苷(iPA)与细胞生长的相关性研究

通过ELISA法测定内源iPA,在新疆紫草细胞大量培养过程中,内源iPA的动态变化与细胞的生长具有密切的相关性.在不同的培养基中,培养过程中细胞的内源iPA含量变化是明显不同的.基本培养基(不含任何外源激素)中的激素自养型细胞其内源iPA的第二峰值在细胞生长的第10天出现;生长培养基中(基本培养基中含外源IAA和KT)的细胞其内源iPA的第二峰值在细胞生长的第5天出现,比前者约提前5天时间.与之相对应,基本培养基中细胞生长延迟期比生长培养基中细胞生长延迟期长大约5天时间,不论基本培养基还是生长培养基中,培养细胞的内源iPA变化的第二峰值与细胞快速生长密切相关.当细胞生长处于停止期时,细胞内源iPA含量均很低.     

培养基组成对里氏木霉合成β-甘露聚糖酶的影响

通过改变产酶培养基中的营养成分与比例,采用酶活力测定方法,分析培养基中的碳源种类和浓度、氮源组成、碳氮比(mC:mN)等主要因素对里氏木霉合成β-甘露聚糖酶的影响。结果表明,20 g/L微晶纤维素为碳源、含氮素质量比为1∶1的硫酸铵和尿素为氮源、mC:mN=4的培养基组成,是里氏木霉合成β-甘露聚糖酶的最佳条件。在此条件下β-甘露聚糖酶酶活力在发酵96 h时达到最大,β-甘露聚糖酶酶活力和β-甘露糖苷酶酶活力分别为4.48、0.04μmol/(min.mL)。     

桔绿木霉产木聚糖酶固体发酵条件研究

对桔绿木霉(Trichoderma citrinoviride)XE-13产木聚糖酶发酵条件进行优化.采用单因素法,研究固体发酵条件下最适培养基组成、料水比以及培养温度、培养基初始p H、培养时间、接种量等条件对产酶的影响.确定培养基组成为:碳源(m(麸皮)∶m(玉米芯)=4 g∶6 g);氮源(NH_4)_2SO_4;碳∶氮=(m(C)∶m(N)=1 g∶0.05 g);料∶水=1 g∶1.5 mL.最适合的培养条件为:培养温度30℃、培养基初始pH值6.0、培养时间72 h、接种量1.0×10~7个/mL孢子悬液/培养基干料=0.3 mL/10 g.在此条件下,木聚糖酶活力可达391.5 U/g.     

不同培养基对平菇菌丝体生长的影响研究

设计10种合成培养基,用常见的佛罗里达菇P 13菌株分别接种于10种固体和液体培养基中试验研究。通过对菌株在固体培养基中菌丝生长情况以及在液体培养基中培养收集所得菌丝干重进行比较,试验结果表明,1号,5号,10号培养基是适合平菇菌丝体生长的培养基。