茶叶多糖的分离纯化及分析

通过对茶叶浸泡提取粗多糖,经Ｓｅｖａｇｅ法去除粗多糖中的蛋白质ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析得纯化茶叶多糖（ＴＰＳ）。以聚丙烯酰胺凝胶电泳对其进行分析,得出 此多糖是由多种单糖组成的不均一多糖,同时对茶叶在不同温度的水溶液中浸取的茶叶粗多糖进行了分析。     

杏鲍菇菌糠多糖对小鼠脾指数、脾淋巴细胞增殖及免疫因子的影响

目的 观察杏鲍菇菌糠多糖对小鼠脾指数、脾淋巴细胞增殖及免疫因子的影响。方法 将超声法提取制备的杏鲍菇菌糠多糖与基础饲料混合制成低剂量(200 mg/kg)、中剂量(400 mg/kg)及高剂量(800 mg/kg)三种多糖饲料。用48只KM小鼠,随机分为空白组,杏鲍菇菌糠多糖低、中、高剂量组。连续饲养60 d后,测定小鼠脾指数、脾淋巴细胞增殖和免疫因子IFN-γ、TNF-α及IL-6含量指标。结果 杏鲍菇菌糠多糖组与空白组相比,低剂量组显著提高脾指数(P<0.05),中剂量组能显著提高脾指数和脾淋巴细胞增殖(P<0.05),同时能提高免疫因子TNF-α、IL-6含量(P<0.05);高剂量组能显著提高小鼠的IFN-γ含量(P<0.05),极显著提高小鼠的脾指数、脾淋巴细胞增殖、TNF-α及IL-6含量(P<0.01)。结论 杏鲍菇菌糠多糖对小鼠的脾指数、脾淋巴细胞增殖及免疫因子具有调节作用。     

小远志多糖的提取及纯化

微波辐射下经水提取得到小远志粗多糖(提取率4.86%),经过脱蛋白、二乙氨基乙基纤维素(DEAE-52)离子交换和Sephadex G-200凝胶色谱法分离得到两个主要组分PP-1和PP-2,纸层析、HPLC、比旋光度法证明两者均为均一组分,经凝胶层析法测得两者的相对分子质量分别为40 800和97 300.     

莪术多糖的分离纯化

研究莪术多糖分离纯化的最佳条件,优化莪术多糖的提取纯化工艺,为进一步探讨莪术多糖的生物活性奠定基础.莪术经热水提取,酒精沉淀,脱色,脱蛋白得粗多糖.粗多糖用50%、75%乙醇分级沉淀得2个级分CZ1、CZ2,进行DEAE-纤维素柱层析.调节DEAE-纤维素的pH值,比较洗脱曲线的不同.CZ1经DEAE-纤维素柱层析得到1个组分,CZ2在酸性、中性条件下层析得2个组分,在碱性条件下得1个组分,随pH升高,回收率降低,纯度增高.各纯化得到的多糖组分经纸层析、琼脂糖凝胶电泳鉴定为单一成分.实验证明,pH是影响层析的一个重要因素,因此莪术多糖的最佳纯化pH值为7.0.     

桑黄粗多糖对肿瘤细胞增殖及转移相关能力的抑制作用

研究了桑黄粗多糖（PL）对高转移卵巢癌细胞（HO-8910PM）和乳腺癌细胞（Bcap-37）增殖和转移相关能力的影响及其作用的机制.研究结果表明,桑黄粗多糖能有效抑制裸鼠移植瘤的生长,抑制率为65.37%;对离体培养的HO-8910PM和Bcap-37细胞的抑制率分别达到15.53%和23.81%;500 ind/ml PL作用于HO-8910PM细胞96 h可诱导其凋亡,通过细胞周期G0/G1期阻滞而抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡;PL能显著抑制HO-8910PM的黏附、侵袭和迁移等肿瘤转移相关能力.桑黄粗多糖具有抑制肿瘤细胞增殖及肿瘤转移的作用.     

多糖的提取纯化研究

研究了多糖的提取纯化方法,提出了将来的研究和发展方向.     

巴戟天多糖的分级纯化及结构分析

对巴戟天多糖的柱层析分级纯化和一级结构进行了研究．采取热水浸提、乙醇沉淀的工艺获得巴戟天粗多糖MOHP,经离子交换和凝胶柱层析得到了MOHP-I,MOHP-Ⅱ,MOHP－Ⅲ和MOHP－Ⅳ4　个组分,通过红外光谱、液相和气相色谱等分析手段对分级后的MOHP－Ⅰ和MOHP-Ⅲ进行了初步的结构分析．结果表明：MOHP—Ⅰ的单糖组成为葡萄糖和果糖,分子质量约为2ku,呋喃糖环结构;MOHP-Ⅲ是一种均一的糖蛋白物质,其组成单糖为阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、果糖以及半乳糖,分子质量约为35ku;高效凝胶渗透色谱显示两组分均达到了较高的纯度．     

鹿茸水提取物及其蛋白酶解物对小鼠 脾淋巴细胞增殖的影响

研究了鹿茸水提取物中非蛋白成分、粗蛋白酶解物及分离组分对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响.非蛋白成分和酶解物的分离分别采用HPLC法和超滤法.应用WST-8法检测各分离组分对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响,采用高分辨质谱对非蛋白成分进行初步鉴定.结果显示,非蛋白成分对未经刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠脾细胞增殖的促进作用优于其分离组分,Fr.Ⅲ和Ⅳ对ConA诱导的脾淋巴细胞增殖有抑制作用,初步鉴定其为碱基和核苷酸的混合物.分子量大于10 kDa的肽段,单独可刺激小鼠脾细胞增殖,且对ConA诱导的T淋巴细胞增殖有抑制作用.肽段分子量大小对其免疫调节活性影响较大,但并未呈现直接的相关性.肽的氨基酸组成、序列及构型等也是影响其活性的重要因素.     

两性壳聚糖的制备及其对小鼠淋巴细胞增殖的影响

化学修饰壳聚糖可得到磺化壳聚糖(SC)和羧甲基壳聚糖(CMC),再经过醇沉分级,每一类多糖可分别得到两个级分:磺化壳聚糖A级分(SCA)、磺化壳聚糖B级分(SCB),羧甲基壳聚糖A级分(CMCA)、羧甲基壳聚糖B级分(CMCB).在小鼠体内和体外探讨了4种两性多糖对小鼠淋巴细胞增殖的影响.体内结果显示羧甲基化的两性多糖CMCA及CMCB对T淋巴细胞的增殖有显著的刺激活性,而体外结果显示4种两性多糖对小鼠淋巴细胞增殖无显著影响.因此,推断壳聚糖中的羧甲基在刺激体内淋巴细胞增殖过程中起重要作用.     

章鱼内脏胰蛋白酶抑制剂的分离纯化与性质研究

通过热处理、硫酸铵盐析、膜超滤及SP-Sepharose 离子交换层析,从章鱼内脏中纯化得到一种胰蛋白酶抑制剂 (Octopus Trypsin Inhibitor ,OTI)．Tricine-SDS-PAGE 电泳结果显示,OTI的分子质量约为6500 u．性质分析结果表明:OTI在pH=1.0~11.0缓冲液中孵育30 min,抑制活性稳定;在100 ℃下加热1 h、2 h 后仍分别具有90% 和65% 的抑制活性,具有良好的pH值稳定性和热稳定性;OTI能够显著抑制胰蛋白酶的活性,对胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶几乎无抑制活性;OTI能够有效抑制蓝圆鲹肌肉中肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶 (MBSP) 引起的肌球蛋白降解．     

长蛸消化道的组织学与组织化学研究

用组织学和组织化学方法对长蛸消化道进行了研究,长蛸消化道由口、食道、嗉囊、胃、胃盲囊、肠和直肠组成,消化管壁由３层组成：粘膜层、粘膜下层和肌层。粘膜层为单层上皮,由柱状或立方细胞组成,在胃盲囊、肠和直肠还含有粘液细胞、食道、嗉囊和胃粘膜上皮表面衬有护膜,胃盲囊内壁形成长的侧褶,胃盲囊和肠柱状细胞呈现蛋白酶、非特异性酯酶、脂酶和碱性磷酸酶活性,细胞表面有密集的微绒毛,是食物消化和吸收的主要部位,胃盲     

穿山龙多糖的提取与纯化工艺条件优化

通过单因素法,研究从穿山龙中提取水溶性多糖的工艺条件,以及分析原料质量与提取液体积的比(料液比)、浸提温度和提取时间3个主要因素对提取量的影响,并对热水浸提穿山龙多糖的工艺条件进行优化.实验表明,水提多糖最佳提取工艺条件:料液比(g∶mL)为1∶4,浸提温度为90℃,浸提时间为2.5 h.按最佳工艺条件水煮提,醇沉干燥得到粗多糖(CP),经柱层析分离纯化后,可得组分CP-Ⅰ,CP-Ⅱ.采用柱层析、纸电泳检测组分的纯度,并利用高效液相色谱法和纸层析法分析组成,结果表明,CP-Ⅱ为单一多糖,由鼠李糖(Rha)、果糖(Fru)和葡萄糖(Glu)3种单糖组成,其量比n(Rha)∶n(Fru)∶n(Glu)为1∶1.08∶48.6.     

金雀异黄素对小鼠黑色素瘤B16BL6细胞增殖、迁移和黏附的影响

利用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法、细胞划痕实验和细胞黏附实验等研究了金雀异黄素对小鼠黑色素瘤B16BL6细胞增殖、迁移以及与血管内皮细胞黏附的影响;利用免疫荧光实验观察了金雀异黄素对B16BL6细胞中微管和肌动蛋白分布的影响.结果表明,与对照组相比,金雀异黄素可以抑制B16BL6细胞的增殖、迁移和与血管内皮细胞的黏附,影响B16BL6细胞中肌动蛋白的组装,但不影响细胞中微管的组装.这些结果提示,金雀异黄素抑制B16BL6细胞的增殖、迁移和与血管内皮细胞的黏附可能是通过诱导细胞中肌动蛋白的重排来实现的.     

短蛸血细胞的形态结构、类型、细胞化学特性及其吞噬活性研究

血细胞作为免疫防御的第一道防线,在软体动物的非特异性免疫系统中具有重要作用.为了揭示头足类动物血细胞的形态结构、生物学性质及其免疫学功能,实验利用活体染色、细胞化学和电镜技术等对短蛸血细胞的形态结构、类型、细胞化学性质及其弧菌吞噬活性进行了研究.研究结果显示：短蛸血细胞具有大透明细胞、小透明细胞、小颗粒细胞和大颗粒细胞4种类型.大透明细胞约占血细胞总数22.6%,平均直径为11.64±0.82?μm,胞质中没有或仅含有很少量的颗粒,细胞表面光滑无伪足伸出;小透明细胞约占血细胞总数的1.7%,平均直径为8.88±0.88?μm,胞质中仅含有少量颗粒,细胞核对台盼蓝呈阳性反应,核质比较大;小颗粒细胞约占血细胞总数的50.7%,平均直径为12.82±1.54?μm,胞质中具有许多大小较为均一的嗜碱性小颗粒,有些细胞内还含有小空泡,不为中性红所着色,疑为颗粒脱内容物所致,细胞表面有较短伪足伸出;大颗粒细胞约占血细胞总数的25.20%,平均直径为13.66±1.50?μm,胞质中具有大小不匀的许多嗜碱性颗粒,有些细胞内也含有不为中性红所着色的较大空泡,细胞表面有许多长伪足伸出.颗粒细胞中所含有的大量嗜碱性颗粒可能与蛋白质等分泌物的活跃合成有关.大颗粒细胞还具有全质分泌的特性,小透明细胞极可能是大颗粒细胞全质分泌后的一时性残余胞体.弧菌吞噬实验结果表明,两类透明细胞均没有弧菌吞噬活性,两类颗粒细胞均具有弧菌吞噬活性,暗示这两种颗粒细胞很可能是短蛸发挥细胞免疫功能的关键性细胞,不仅与某些物质的活跃合成与分泌有关,而且可能还直接参与了外来病原的吞噬及清除.研究结果为揭示短蛸血细胞在非特异性免疫防御中的作用奠定了基础,对于丰富软体动物免疫学也具有重要的科学价值.     

鳗弧菌和副溶血弧菌对短蛸感染的病理学研究

为了今后养殖病害的防治,了解病原微生物在养殖过程中对头足类动物产生的影响,选择在海水养殖中发病频率较高的弧菌,包括鳗弧菌(Vibrio anguillarum)和副溶血弧菌(Vibrio Parahemolyticus),研究它们对短蛸的毒力水平。通过将稀释菌液直接注射短蛸腕部的方式,观察感染后短蛸的致死率、半致死时间,以及各菌对短蛸肝脏、鳃、鳃心、白体等器官结构的影响。结果显示:鳗弧菌和副溶血弧菌均对短蛸有较强的致病性,分别在60、48 h时达到半致死,且发病的短蛸活性减退,虚弱无力,腹部肿大,解剖可见部分内脏肿胀明显,如肝脏;通过对病变组织和健康组织的石蜡切片和HE染色,以及超显微结构的观察,发现患病短蛸的肝脏、鳃、鳃心和白体均出现不同程度组织、细胞结构上的破坏。以上结果表明这两种弧菌对短蛸均具有明显的致病性,副溶血弧菌更强一些,合适条件下将会成为短蛸规模化养殖的重要威胁之一。     

多级色谱纯化牛胎盘免疫调节多肽及性质测定

使用DEAE Sepharose CL-6B阴离子交换色谱、Sephadex G-25 凝胶色谱和Sephasil C18反相高效液相色谱等分离纯化技术,采用体外培养淋巴细胞增殖试验,从牛胎盘提取液中分离出了具有免疫调节活性的多肽。免疫调节多肽对淋巴细胞增殖的促进作用具有剂量依赖性。纯化后的免疫调节多肽经过毛细管电泳(CE)鉴定为单一组分。毛细管等电聚焦电泳(CIEFE)测定多肽的等电点是3.82。基质辅助激光解吸附飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定多肽的相对分子质量为2134。蛋白质测序仪测定多肽的序列为Tyr-X-Phe-Leu-Gly-Leu-Pro-Gly-X-Thr。     

CpG ODN增强rHBsAg免疫小鼠抗体产生及淋巴细胞增殖效应

目的：探讨合成含CpG基序的寡核苷酸（CpG ODN）对重组乙型肝炎表面抗原（rHBsAg ）增强小鼠特异性抗体产生及淋巴细胞增殖反应的效应.方法：采用BaIb/c小鼠作为免疫实验动物,经后腿胫骨前肌免疫2次,ELISA法检测血清乙型肝炎表面抗体（抗-HBs）效价;3H-TdR掺入法测定淋巴细胞增殖反应.结果：加CpG ODN组的抗-HBs效价较rHBsAg组明显增高,且维持时间长;淋巴细胞增殖反应显著增强.结论：CpG ODN对小鼠抗-HBs产生具有明显的增强作用,且可以有效刺激小鼠淋巴细胞的增殖反应.