克氏原螯虾原肌球蛋白的纯化及过敏原性分析

以13份甲壳类动物过敏患者血清的Western—blotting分析,确定克氏原螯虾主要过敏原为36ku蛋白质．通过盐析、等电点沉淀及热处理等方法纯化该蛋白质,以兔抗拟穴青蟹原肌球蛋白（Tropo-myosin,TM）多克隆抗体的Western—blotting分析,确定该蛋白质为TM．同源性分析表明,克氏原螯虾TM与南美白对虾TM、拟穴青蟹的氨基酸序列相似性较高（〉90％）．酶切位点预测显示,它分别有49个胰蛋白酶和6个胰凝乳蛋白酶的酶切位点．模拟胃肠液消化实验结果显示,纯化TM不易被胃蛋白酶降解,易于被胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶降解,进一步的Western—blotting和抑制性ELISA分析结果显示,其消化产物仍具有一定的免疫活性．采用蒸煮处理可降低TM的消化稳定性及免疫活性,且蒸煮处理时间越长,效果越显著．说明。TM为克氏原螯虾主要过敏原．与其他甲壳娄动物TM的序列相似件较高．     

鳙鱼原肌球蛋白的结晶与电镜观察

本文对鳙鱼的原肌球蛋白(Tropomyosin以下用TM表示)进行提取、纯化和结晶,并对TM晶体做了光学显微镜和电子显微镜观察。在光镜下可见到TM或聚或散的针状结晶,在电镜下可见到TM结晶具有清晰的、明暗相间的横纹周期结构,横纹主周期为39nm,主周期间另有横纹细节。     

鳙鱼原肌球蛋白的提取、结晶及分子量测定

原肌球蛋白(Tropmyosin 以下用 TM 表示)是动物肌肉收缩的一种重要的调节蛋白。本文对我国四大家之一鳙鱼肌肉的 TM 进行了提取,纯化和结晶。并用 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定了鳙鱼 TM亚基的分子量为36,500。     

松墨天牛原肌球蛋白基因的克隆和表达检测

利用先前构建的cDNA文库和RACE方法,克隆了松墨天牛原肌球蛋白基因的cDNA全长,该序列长1 203 bp,命名为MaTm(GenBank登录号:KM099072),其中开放阅读框长852 bp,编码283个氨基酸.MaTm的氨基酸序列与赤拟谷盗 (Tribolium castaneum)相似性最高,为97%,与家蚕相似性 (Bombyx mori)为94%.松墨天牛与赤拟谷盗处在系统发育树的同一个分支上.用 RT-qPCR 分析了MaTm的相对表达量,结果显示:蛹和幼虫的表达量低于成虫;成虫足和头的表达量高于对照;在幼虫各组织中均有表达,且差异显著(p0.05),其中在体壁的表达量最高.     

草鱼原肌球蛋白基因的克隆及其组织表达

为揭示原肌球蛋白基因在草鱼肌肉中的作用,利用RT-PCR和RACE技术克隆获得了草鱼原肌球蛋白基因c DNA,并对该基因在普通草鱼和脆肉鲩不同组织中的表达情况进行研究分析。结果表明原肌球蛋白基因c DNA全长序列为1 705 bp,包含387 bp的5′UTR序列,1 307 bp的3′UTR序列和855 bp开放阅读框(ORF)。其ORF编码284个氨基酸。系统进化分析表明普通草鱼与斑马鱼、墨西哥脂鲤的原肌球蛋白基因核苷酸同源性分别是93%和87%,氨基酸同源性分别是96%和93%。在聚类上普通草鱼原肌球蛋白基因与其他鲤科鱼类同源性较高,表明亲缘关系最近,与传统分类相一致。Real time-PCR结果表明原肌球蛋白基因在所检测的普通草鱼和脆肉鲩7个组织中均有表达,原肌球蛋白基因在普通草鱼腹肌中表达最高,其次为前肠。原肌球蛋白基因在脆肉鲩腹肌中的表达低于普通草鱼,而脆肉鲩中肌肉、肝脏、肾脏、前肠、后肠中原肌球蛋白基因表达量大于普通草鱼相对应组织,但差异不显著。     

基于转录组学分析日本沼虾原肌球蛋白对小鼠巨噬细胞极化的影响

为研究日本沼虾原肌球蛋白对巨噬细胞极化的影响,运用转录组学分析原肌球蛋白诱导的巨噬细胞极化过程中基因表达的差异性。结果表明:与磷酸盐缓冲溶液组(PBS组)相比,原肌球蛋白诱导组(TM组)有69个基因表达上调,154个基因表达下调,富集到180条通路;TM组相较于脂多糖和IFN-γ联合诱导M1型巨噬细胞组(LPSIFN组)有1346个基因表达上调,1360个基因下调,富集到308条通路;TM组与IL-4诱导M2型巨噬细胞组(IL4组)相比,有455个基因上调,446个基因下调,富集到269条通路。根据KEGG结果选择5条可能涉及巨噬细胞极化的信号通路,包括NOD样受体信号通路、Jak-STAT信号通路、NF-κB信号通路、Toll样受体信号通路和PI3K/Akt信号通路,对这5条通路中的NOD2、TLR2、AKT3、NLRP3、Caspase-1、CD14、Lat、Myd88、NFKBIA和STAT1基因的表达进行验证,检测到TM组NOD2、TLR2、NLRP3、STAT1这4个基因表达量相较于PBS组显著升高,与这4个基因相关的NOD样受体信号通路、Jak-STAT信号通路、Toll样受体信号通路参与原肌球蛋白诱导巨噬细胞极化的过程。研究旨在为进一步分析巨噬细胞极化与食物过敏的关系提供理论依据。     

罗氏沼虾原肌球蛋白基因的克隆表达及变应原性鉴定

通过NCBI查找到罗氏沼虾原肌球蛋白的mRNA,根据其CDS区域设计特异引物,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)克隆出目的基因片段,测序后将该片段克隆到原核表达载体 pET-28a 上,转化到 E. coli BL21(DE3)和E. coli Rosatta后,经异丙基-B-D-硫代乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Ni2+亲和层析柱对重组变应原进行纯化.采用免疫印迹检测其与对虾过敏患者血清的 IgE 结合活性.对罗氏沼虾变应原进行了表达、鉴定及纯化,成功地获得了具有变应原活性的重组罗氏沼虾原肌球蛋白,为罗氏沼虾过敏性疾病的诊断、治疗奠定了基础.     

克氏原螯虾主要变应原原肌球蛋白的一个片段区基因的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定

克隆克氏原螯虾主要过敏原原肌球蛋白的一个片段区基因,表达并纯化该蛋白,检测其免疫原性.提取克氏原螯虾总RNA,设计特异性引物,RT-PCR克隆得到目的基因;将目的基因连入pMD19-T载体,提质粒酶切鉴定并测序;将测序正确的片段连入原核表达载体pET-32a(+)上,并转入BL21(DE3)宿主表达菌中;IPTG诱导表达;通过Ni2+亲和层析(FPLC)纯化目的蛋白;利用Western-blotting和ELISA检测该重组蛋白的免疫原性.克隆获得目的基因,其片段长为291 bp,编码97个氨基酸.重组蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符.Western-blotting和ELISA结果表明该蛋白与克氏原螯虾过敏病人混合血清中IgE结合,具有免疫原性.     

质子,同步辐射（超软x）和γ射线辐照高粱的生物效应研究

３ＭｅＶ质子和同步辐射辐照高梁种子的当代生物效应相似，幼苗１￣３片叶均出现条状叶绿素缺失变异，其缺失率接近１００％而＾６０Ｃｏγ射线辐照则未出现此变异。     

抑制肌球蛋白Ⅱ对NRK细胞分裂的影响

研究肌球蛋白Ⅱ在NRK细胞分裂中的作用。分别于分裂中期和后期施加肌球蛋白Ⅱ抑制剂,对细胞分裂进行动态图像采集,采用显微图像分析软件对细胞间桥形态学进行测量分析,采用细胞免疫荧光技术检测肌动蛋白的分布,研究表明:抑制肌球蛋白Ⅱ可引起NRK细胞核分裂受阻或延迟,使子细胞丧失极性,但不影响胞质分裂进程;在胞质分裂早期,抑制肌球蛋白Ⅱ使分裂沟相对直径迅速变细,曲线明显变陡,胞质分裂晚期各组无明显差别。肌球蛋白Ⅱ抑制组与对照组分裂沟处均有肌动蛋白分布,提示肌球蛋白Ⅱ参与了细胞核分裂和子细胞极性的维持,但不影响肌动蛋白在分裂沟定位。在肌球蛋白Ⅱ受抑制的情况下,NRK细胞胞质分裂模式发生了改变。     

苏州阳澄湖大闸蟹行业协会成立两年来,协会上下孜孜以求--精心架设大闸蟹产业桥梁

据说著名武侠作家金庸先生每年秋季都会买数百斤的大闸蟹招待宾客，而且每次都指定要购买阳澄湖大闸蟹。棋圣聂卫平去金家做客，一次就吃掉12只蟹，大呼过瘾，一时之间传为佳话，章太炎夫妇也曾经发出“不是阳澄湖蟹好，此生何必住苏州”的感慨。作为华人世界中最为著名的农副产品，阳澄湖大闸蟹的威名已经传播到港澳台甚至欧美，带动了阳澄湖周边餐饮、旅游、住宿等相关产业，形成了一个有着四五十亿规模的产业链，小小螃蟹爬出了一条闪闪的金光大道，而连接蟹农和市场这条金光大道的金色桥梁就是阳澄湖大闸蟹行业协会。     

爪哇苔藓在河蟹早期仔蟹发育中的作用

研究了爪哇苔藓对河蟹早期存蟹存活率和生长速度的影响，实验结果表明，投放爪哇苔藓的实验组存活率比无水草组高３２．４４％，平均体重增长快１．６７９倍。     

辐照对烤鳗制品品质影响

采用60Co-γ射线对烤鳗进行处理,研究其感官、质构特性、微观结构和理化指标的变化. 结论：辐照剂量大于5kGy的实验组,感官与质构特性均出现下降;微观结构在实验辐照范围内变化较小;酸价、挥发性盐基氮含量随辐照剂量的增大而增大,表明辐照促进烤鳗贮藏时脂肪氧化;辐照对维生素A影响明显,3kGy时含量下降了372%,维生素E在辐照剂量9kGy时,含量下降106%;各实验组烤鳗中类氨基酸含量变化不大.     

多波形超声波辐照对啤酒酵母细胞生长的影响

研究了四种波形的超声波对啤酒酵母细胞生长的影响。在细胞生长的调整期进行超声辐照时,各种处理对细胞生长都有不同程度的促进作用,其中第三波形的效果最好,在对数生长期进行处理时,对细胞生长有抑制作用,且前期处理效果最发的波形对后期的抑制作用也最明显,在平衡期进行处理,对细胞生长没有明显影响。     

辐射对半导体霍尔器件输入电阻的影响

用60Co、137Cs、90Sr-90Y放射源低剂量率对恒流激励、无磁场作用时的InSb、GaAs、Si、Ge等半导体霍尔器件进行短时辐照,测量了辐照过程中各器件输入电阻的变化。结果表明:因为位移效应所引起的辐射缺陷,三种辐照均导致各器件输入电阻增加,并与辐照时间成正比。比较相同射线、相同时间辐照所引起的输入电阻变化量,可以判定Ge器件的抗辐射能力最强,Si器件次之,InSb、GaAs器件最差。     

三唑磷对海水虾类、蟹类的急性毒性试验

报道了三唑磷对浙江沿岸常见的脊尾白虾，日本大眼蟹和长毛对虾的24hLC50,48hLC50,96hLC50值，以及中国对虾不同发育阶段的24hLC50,48hLC50,72hLC50值，对处理有关的污染事故和评价海洋环境方面具有重要的实用价值和参考作用。     

蟹爪式耙取机构的优选

本文将确定由曲柄摇杆机构转化为曲柄直导杆机构的三个转化参数，并指出由耙取机构插入段开始时的转化角θ（Ｎｙ）所对应的曲柄导杆机构为最佳转化机构。     

激光诱变生物效应机理探讨

提出在激光生物工程中应如何预选激光参数,并对激光诱变生物效应的机理进行了探讨.     

钒酸盐和脲对锯缘青蟹碱性磷酸酶的抑制作用

钒酸盐（偏钒酸钠、钒酸钠、偏钒酸铵、联吡啶过氧钒酸钠）和脲作为养殖环境的污染物对锯缘青蟹碱性磷酸酶的酶活力有明显的抑制作用,抑制程度随着抑制剂浓度的增大而增强。钒酸盐对酶的抑制类型均为竞争性抑制,而脲为非竞争性抑制;在脲浓度低于７．０ｍｏｌ／Ｌ时,２５℃与脲处理２．５ｈ的酶的抑制失活作用是可逆的。钒酸盐和脲对酶有协同抑制作用。