钙调蛋白与酸枣仁皂甙A作用的~1H核磁共振谱研究

利用高分辨的１Ｈ核磁共振技术研究了 Ｃａ２＋对钙调蛋白（ＣａＭ）分子构象的影响以及酸枣仁皂甙 Ａ与 ＣａＭ的作用机制。研究结果表明；随着 Ｃａ２＋的加入． ＣａＭ分子的构象处于不断的变化之中。前两个Ｃａ２＋的加入主要结合在ＣａＭ的第Ⅲ，ⅣＣａ２＋结合位点（Ｃ结构域）上，后两个Ｃａ２＋的加入，则主要结合在ＣａＭ分子的第Ⅰ，Ⅱ Ｃａ２＋结合位点（Ｎ结构域〕上：酸枣仁皂甙 Ａ在 ＣａＭ上也有两类结合位点，一类是位于 ＣａＭ分子 Ｎ结构域上，只能结合一个药物分子的高亲合点；另一类是位于ＣａＭ分子Ｃ结构域上的至少能结合两个药物分子的低亲合点。     

钙离子对光暗适应罗氏沼虾感光细胞中膜结合Gq蛋白α亚基的影响

用蛋白质提取液提取膜结合Gq蛋白α亚基并SDS-PAGE电泳,利用Tanon G IS凝胶图像处理系统分析其含量.光暗条件下,在3种溶液孵育后的感光细胞中都提取到了42 kDa的膜结合Gq蛋白α亚基.高钙溶液、生理溶液、低钙溶液孵育后的感光细胞中膜结合Gq蛋白α亚基的含量,光适应组分别是4.58%、4.63%、5.05%;暗适应组分别是4.56%、4.94%、5.13%.     

胆红素钙对胆汁蛋白二级结构的影响

本文采用二阶导、退卷积及曲线分峰拟合等高分辨红外光谱技术分析了胆汁蛋白结合胆红素钙前后二级结构的变化。结果显示，胆红素钙与胆汁蛋白的相互作用使后者的二级结构有序性增加。     

Ca^2＋和Mg^2＋对54kD钙结合蛋白荧光强度影响的研究

猪血小板 5 4kD钙结合蛋白 (calciumbindingprotein ,CaBP)是一个等电点为 5 .5的弱酸性蛋白质 ,其N 末端为丙氨酸 (Ala) ,且未经修饰 ,在 2 80nm波长的紫外光激发下 ,该蛋白质具有λmax为 335nm的内源荧光发射光谱 ,Ca2 +、Mg2 +均能减弱其发射荧光的强度 ,但对其λmax没有影响 .通过测定不同Ca2 +浓度下荧光强度的变化 ,可计算出在无Mg2 +存在时 ,该蛋白质的钙结合常数为 3.2× 10 - 8mol/L ,而在Mg2 +饱和条件下 ,钙结合常数为 7.4× 10 - 6 mol/L .乙醇亦不影响该蛋白质荧光的λmax,而对其荧光强度的影响则依赖于是否与钙结合 .未与Ca2 +结合时 ,乙醇浓度的增加导致荧光强度增强 ,与Ca2 +结合后 ,在低浓度乙醇溶液中 ,蛋白荧光强度减小 ,至乙醇浓度大于 16 .6 %后 ,其荧光强度逐渐增强 ,在 35 %乙醇溶液中 5 4kDCaBP对Ca2 +不敏感     

小麦幼苗微管结合蛋白MAP65s体外对微管聚合影响的研究

微管结合蛋白与微管特异地结合在一起,参与调节微管的结构与功能,目前已成为植物细胞骨架研究的前沿领域。以"临优2018"小麦幼苗为材料,通过免疫印迹实验鉴定了小麦幼苗中微管结合蛋白MAP65s的存在并利用紫外吸收法和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法初步探究了小麦幼苗MAP65s体外对微管聚合的影响,为进一步研究MAP65s蛋白的生理功能提供了重要的依据。     

苏云金杆菌晶体蛋白Cyt1A对营养期杀虫蛋白Vip3A杀虫毒力的影响

为检测苏云金杆菌晶体蛋白Cyt1A对Vip3A表达和杀虫活性的影响,将p20和cyt1A基因与vip3A基因连接构建了重组质粒pHVC20,然后电激转化至苏云金杆菌无晶体突变株CryB中进行了共表达,以单独表达Vip3A蛋白的CryB(pHPT3)作为对照菌株。Westernblot结果显示,Vip3A蛋白在CryB(pHVC20)菌株中的最大表达量约为在CryB(pHPT3)菌株的2倍,这可能是由于前者中的辅助蛋白P20增加了Vip3A表达量的缘故,晶体蛋白Cyt1A的存在对Vip3A的正常表达没有影响。生物测定结果表明,CryB(pHVC20)和CryB(pHPT3)菌株对斜纹夜蛾初孵幼虫的LC50值分别为10.62!g/ml和78!g/ml,前者的毒力比后者提高了6倍,这表明Cyt1A蛋白和Vip3A蛋白对目标昆虫的毒力可能存在着协同增效作用。     

燕麦分离蛋白消化特性和消化产物对STC-1细胞分泌胆囊收缩素的影响

为研究燕麦分离蛋白的消化特性及其消化产物对肠内分泌细胞分泌胆囊收缩素(CCK)的影响,以燕麦为原料,采用碱提酸沉法得到燕麦分离蛋白,分析燕麦分离蛋白在模拟胃肠道消化过程中的分子质量变化、氮释放规律、消化产物的氨基酸组成,计算氨基酸评分、化学评分和必需氨基酸指数,并以STC-1细胞为肠内分泌细胞模型评价消化产物对STC-1细胞分泌CCK的影响。实验结果表明:燕麦分离蛋白经胃肠消化后,消化产物的分子质量小于10kDa,释放的可溶性氮的比例为90.11%,消化产物可溶性部分中游离氨基酸的比例为22.8%,肽的比例为67.31%,并且肽的分子质量主要在1000Da以下(约74%);燕麦分离蛋白消化产物中必需氨基酸总量占38.75%,必需氨基酸与非必需氨基酸的比值为0.63,且必需氨基酸指数(0.95)大于0.90。燕麦分离蛋白消化产物对STC-1细胞影响的实验结果表明,燕麦分离蛋白消化产物对STC-1细胞生长具有显著的促进作用,且能够增加CCK的合成和分泌。研究结果表明,燕麦分离蛋白作为一种优质的蛋白质原料,不仅具有优良的营养功能,而且具有促进肠内分泌细胞分泌CCK的生物活性,在食品领域具有较大的应用潜力。     

茜素红S与蛋白质作用的光散射光谱及其分析应用

研究了茜素红S作为光散射探针测定蛋白质的分析方法．在pH=4．0的Britton-Robinson缓冲溶液中。茜素红S与蛋白质结合后有强烈的光散射作用，在λ=353nm处，光散射强度最大，且光散射强度与蛋白质浓度成正比．由此建立了测定蛋白质含量的分析方法．方法灵敏度高，检测限达0．01mg／L，线性范围为0．02～6mg／L．方法适用于人血清蛋白含量的测定．     

轻度脑损伤早期S-100蛋白及S-100mRNA的水平变化

目的　探讨轻度脑损伤早期血清和脑脊液中S 100蛋白(S 100),脑组织中S 100mRNA水平的变化.方法采用雄性SD大鼠应用改良Feeney's方法制造模型,应用聚合酶链反应和酶免疫法动态观察S 100蛋白及其S 100mRNA的变化.结果　模型建立后血液中S 100蛋白12,48h分别为(0.825±0.171)μg/L和(1.43±0.082)μg/L,脑脊液中S 100蛋白12,48h分别为(1.21±0.175)μg/L和(1.43±0.082)μg/L,脑组织中S 100mRNA相对灰度值12,48h分别为(25.0±2.6)和(31.4±3.4),与对照组比较都有明显增加(P<0.05).结论　S 100能作为轻度脑损伤的标志物,在损伤后12～48h取样本比较合适.     

脐静脉血S100B蛋白水平与孕龄的相关性研究

目的　研究足月产儿和早产儿脐血中S100B蛋白含量与孕龄的关系.方法　采用ELISA方法定量检测52例正常足月新生儿和早产儿脐静脉血中S100B的含量.结果　早产儿脐血中的S100B(0.94±0.33)明显高于足月产儿(0.44±0.25),P<0.005,而且无论早产儿还是足月产儿女性脐血中S100B含量(1.10±0.36和0.63±0.26)明显高于男性(0.65±0.19和0.25±0.03),P<0.05.足月产儿和早产儿脐血中S100B蛋白含量与孕龄呈负相关(r=-0.39),P<0.01.结论　足月产儿和早产儿脐血中S100B蛋白含量与脑成熟有关.     

S100A8 mediates the activation of P65/HLA-B/S100A8/BCL-2/Caspase-9 (-3) pathway in laryngeal carcinogenesis

S100 calcium binding protein A8 (S100A8),a possible novel member of NF-kappa B signal pathway in laryngeal squamous cell carcinoma (LSCC),interacts with human leukocyte antigen B (HLA-B) which carries an NF-kappa B binding site within the enhancer A. The objective of this study was to explore the molecular mechanism of S100A8 in laryngeal carcinogenesis. RT-PCR,Western blotting and immuno-histochemistry staining were applied to evaluate the expression levels of IKKα,P65,REL-B,S100A8,APAF-1 and BCL-2 genes. The signal transduction passway in which S100A8 might participate was explored by RNA interference. Flow cytometry,TUNEL assay and cell invasion in vitro were used to detect the biological behavior of Hep2 cells induced by S100A8 gene. Our results showed that high expression of S100A8 was related to tumorigenesis in LSCC and negatively correlated with the degree of differentiation,indicating that S100A8 gene could inhibit apoptosis and promote metastasis in LSCC. Additionally,the suppression of S100A8 by RNA interference down-regulated BCL-2 but not APAF-1,P65 and IKKα,while,the suppression of P65 could significantly down-regulate the expression of S100A8 gene. In conclusion,S100A8 plays an important role in P65/HLA-B/S100A8/BCL-2/Caspase-9 (-3) pathway in laryngeal carcinoma.     

SARS病毒的S1蛋白基因的克隆、表达及其ELISA检测方法的建立

为了建立方便、敏感和特异的SARS病毒血清学诊断方法,利用PCR扩增,克隆了SARS冠状病毒S蛋白基因中从第68～918位碱基的基因序列(S1蛋白).并通过pGEX-4T1表达系统在大肠杆菌BL21中高效表达了SARS病毒S1蛋白,用超声波破碎菌体及用不同浓度的尿素洗涤包涵体,纯化了S1蛋白,纯度可达75%以上.以在E.coli高效表达的S1蛋白为抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗人IgG为二抗,建立了检测SARS抗体的间接ELISA方法.经检测,筛选出最佳反应条件为5μg/孔.用纯化的E.coli表达的抗原包被酶标板,用5 g/L的小牛血清进行封闭,以正常E.coli裂解上清液稀释待检血清.实验表明,应用表达的蛋白作为诊断SARS抗原具有特异性高、抗原易纯化和成本低等特点.     

共振光散射光谱法测定微量蛋白质

利用光吸收和共振光散射(RLS)光谱研究了铝试剂(ATA)与蛋白质在水溶液中的相互作用.在pH2.50时,蛋白质可使弱的ATA光散射信号曾强.基于这种现象,我们运用RLS技术,建立了测定纳克级蛋白质的方法.该方法简单、实用、灵敏.BSA的线性范围为0.010~27.4μg/mL,HSA的线性范围为0.010~30.5μg/mL.BSA的检测限为10.7 ng/mL,HSA的检测限为10.2 ng/mL.对实际人血清样品中的蛋白质进行了测定,其结果与临床方法一致.氨基酸、金属离子或其它共存化合物的干扰很小.     

蛋白质光谱探针研究进展

蛋白质分析是生命科学研究中的重要课题。蛋白质内源紫外吸收光谱和荧光光谱可以用于蛋白质分析，但其灵敏度不能满足微量分析的要求。蛋白质光谱探针（包括金属离子、有机试剂和金属络合物）能够与蛋白质相互作用生成超分子复合物并引起体系光谱信号的变化，由此可以提供蛋白质含量或结构方面的信息。根据光分析方法的不同，蛋白质光谱探针可以分为吸光探针、荧光探针和光散射探针3类。本文中，笔者综述了蛋白质光谱探针的研究进展，讨论了发展趋势。     

锌试剂-蛋白质体系的共振光散射光谱研究

 在pH 3.0的B-R缓冲溶液中,锌试剂能与蛋白质结合形成复合物.此结合反应能显著加强锌试剂的瑞利光散射信号.详细研究了此结合反应的最佳反应条件,并以此反应为基础,利用共振瑞利散射光技术,建立了一个测定蛋白质的新方法.该方法对牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)以及免疫球蛋白测定的线性范围分别为0.25~12.5,0.10~15.0μg/mL和0.10~12.5μg/mL,检出限均小于0.05μg/mL,且大量的常见金属离子、氨基酸等共存物质不干扰测定.方法具有很高的灵敏度、很好的选择性及重现性.用于血清样品中蛋白质的测定,结果满意.