荧光原位杂交在微生物学中的应用及进展

荧光原位杂交技术广泛用于分析复杂环境的微生物群落构成,可以在自然生境中监测和鉴定微生物,并能对未被培养的微生物进行检测.rRNA为靶序列寡核苷酸或PNA探针的荧光原位杂交能提供微生物的形态学、数量、空间分布等信息,现已成为环境科学研究领域中的热点技术.本文对荧光原位杂交技术的发展和在环境微生物学中的应用进行了综述,探讨了该技术应用和发展前景.     

荧光原位杂交技术的应用进展

从荧光原位杂交技术的实验方法和技术要点出发,介绍了最近几年荧光原位杂交技术在环境微生物监测、医学诊断和分子生物学研究中的应用进展.     

分子生物技术在污水处理系统内硝化菌群研究中的应用

分子生物技术近几年来得到了飞速发展,广泛应用于环境微生物的研究,本文详细介绍了最近几年研究人员在荧光原位杂交技术和聚合酶链式反应技术的基础上发展的几种新技术,并分析了这些技术的应用现状,对分子生物技术的发展做出了展望,希望能为污水处理系统稳定运行提供参考。     

植物原位杂交研究的进展

原位杂交是上世纪60年代建立起来的一种将特定基因或DNA序列直接定位到染色体上的技术.几十年来发展的非常迅速.已有基因组原位杂交(GISH)、多彩荧光原位杂交(FISH)、原位PCR(in situ PCR)、DNA纤维原位杂交(Fi-bre-FISH),应用于遗传学的各个领域,特别是用于外源DNA的鉴定.     

麦类作物基因组原位杂交技术要点分析

基因组原位杂交是在分子水平上检测外源染色质的一种有效方法,其探针是总基因组DNA．该技术广泛应用于植物进化和亲缘关系的鉴定上．本文主要对麦类作物中基因组原位杂交技术的要点进行了分析。     

MADS-box基因cDNA片段在甜菜染色体上的定位

以甜莱MADS-box基因cDNA片段为探针,采用Southern杂交证实了其在甜菜基因组中为低拷贝序列;利用荧光原位杂交技术(FISH)将其初步定位在二倍体栽培甜菜(Beta vldgaris)A2Y的第2号染色体上.研究成功地实现了小片段低拷贝的功能基因在甜菜染色体上的定位,为今后甜菜遗传物理图谱的构建提供了有效可行的方法.     

植物染色体C-分带和原位杂交的研究应用

染色体C-分带和原位杂交技术是染色体识别和基因定位研究中较为直接和简便的方法,本文综述了染色体C-分带和原位杂交的研究进展及应用。     

荧光原位杂交法检测厌氧反应器中的硫酸盐还原细菌实验条件优化及应用

通过正交试验筛检荧光原位杂交(FISH)技术在检测厌氧反应器中的硫酸盐还原细菌时的最佳及适合的实验条件.结果显示,样品预处理较优的条件为:pbs固定3～4 h,乙醇脱水3 min;FISH技术检测环境样本中硫酸盐还原细菌的最佳实验条件为:杂交温度46℃,杂交时间2～3 h,洗脱液中NaCl浓度90mmol/L.FISH技术检测厌氧反应器样品中硫酸盐还原细菌与传统检测方法相比具有快速、简便、准确的优点,在研究环境微生物方面有较好的应用前景.     

荧光素二聚体荧光探针同步荧光法测定阿米卡星

基于阿米卡星（AMK）能增强荧光素二聚体的荧光信号，建立了以荧光素二聚体荧光探针同步荧光光谱技术测定AMK的新方法．结果表明，在△λ=30nm，最优条件下，测定AMK的线性范围为0．5～20．0μg／mL，检出限（LOD）为0．51μg／ml．用于实际样品分析，测定回收率为96．9％-104．5％，相对标准偏差（RSD）为3．7％～5．3％．     

金属离子印迹聚合物的制备方法及应用研究

分子印迹技术是指制备对目标分子具有特异识别能力的高度交联聚合物的技术.本文综述了金属离子印迹聚合物的制备方法以及在固相萃取、荧光传感器、膜分离、污水处理和生物医药等领域的应用,并对金属离子印迹聚合物的应用局限与未来发展做了讨论.     

慢性淋巴细胞白血病的分子细胞遗传学

研究慢性淋巴细胞白血病（ＣＬＬ）的方法最初是建立在细胞遗传学水平上的,但由于慢性淋巴细胞白血病的癌细胞在体外有丝分裂行为低,再者,染色体显带技术分辨率不高,使得这一方法具有局限性。荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）是细胞遗传学与分子遗传结合的技术,宁可以检测染色体的各种畸变,如三体、缺失和易位断裂等,它不要求有详细的物理图谱和了解相关基因,也不需要分离出单细胞。用ＦＩＳＨ分析ＣＬＬ的染色体畸变,畸变类型按发     

小麦-黑麦易位系的诱发与鉴定

染色体易位可以人工诱发来产生,利用Ph基因突变体、5B缺体、远缘杂交和远缘杂交与辐射相结合的方法都可以获得染色体易位.其发生频率与亲本类型、杂交组合、辐射剂量的大小有关.对小麦与黑麦杂交后代的花粉母细胞进行Giemsa-C带分析,证实在杂种中黑麦染色体与小麦染色体有同祖配对和黑麦染色体的组内配对现象.利用C-带技术对十二个初步稳定的小麦-黑麦易位品系进行鉴定,其中四个品系为6RS/5RL易位;五个品位为1RS/7BL易位;对于无明显黑麦染色体端带的三个品系根据性状表现,推测为5RL易位或含有5RL片段的易位.实验结果表明用C-带技术鉴定小麦-黑麦的染色体易位是可行的.     

GAS41基因在斑马鱼胚胎发育中的时空表达谱

为了深入研究GAS41在胚胎发育中的作用机理,应用生物信息学软件分析了斑马鱼GAS41基因的序列特征;采用RT-PCR、整体原位杂交和整体免疫组织化学方法检测其在斑马鱼胚胎发育中的时空表达谱.结果显示斑马鱼GAS41蛋白与人类、小鼠、大鼠同源蛋白都有91.2％的同源性,具有高度的保守性.RT-PCR结果表明GAS41在检测的成体组织中均有表达,表达丰度相当.而GAS41在胚胎受精后一直持续表达,其中受精4h后表达量升高.整体原位杂交和免疫化学结果显示GAS41特异性表达于胚胎头部,尤其是中脑、间脑(眼部)、小脑和后脑表达明显.这些都提示GAS41是一个高度保守基因,在斑马鱼中枢神经系统发育过程中可能起重要作用,同时也为GAS41在胚胎发育调控中的作用机制提供实验基础.     

G2期早熟染色体凝集技术预测肝癌细胞低LET射线辐射敏感性

应用^60Co产生的γ射线照射人肝癌细胞系SMMC-7721,以克隆形成法测定经照射后的细胞存活率,用化学诱导剂Calyculin-A．诱导的早熟染色体凝集技术研究染色体损伤．结果显示G2期细胞内的染色单体和等点染色单体断裂数与照射剂量之间存在着线性相关性,染色单体断裂数与细胞存活率之间存在较好的线性相关性．表明辐射诱导的染色单体断裂可以作为预测SMMC-7721细胞内在辐射敏感性的指标,也可为临床诊断和治疗肝癌提供依据。     

西域沙虎的核型分析

本文报导的西域沙虎（Ｔｅｒａｔｏｓｃｉｎｃｕｓｐｒｚｅｗａｌｓｋｉｉ）核型为２ｎ＝３６，由一对（１）亚端部着丝点染色体、１２对（２－１３）端部着丝点染色体及５对（１４－１８）不能明显确定着丝点位置的染色体组成。染色体均无明显的界线，不能象一般爬行类那样划分出大染色体和小染色体，这与壁虎科其它种类相一致，只是中间着丝点及亚中间着丝点染色体缺乏，故尔染色体臂数较少，另外染色体数目也较一般壁虎科种类少，表明沙虎与壁虎间既有联系、又具有一定的差异性。     

高产碱性蛋白酶工程菌的构建及鉴定

利用原生质体融合技术，使碱性蛋白酶生产菌2709与枯草杆菌BD105(含有碱性蛋白酶基因克隆载体pDW2)杂交，得到1株高产碱性蛋白酶的工程菌A16．A16的表型与生长特征与2709相似，相同条件下发酵酶活性比2709菌株高50％，摇瓶发酵的产酶水平最高可达30000u／mL。用菌落的原位杂交鉴定出该菌株携有双亲的遗传物质．     

大鼠睾丸特异表达新基因Lrrc18的克隆及表达谱分析

运用数据库消减杂交(Digital Differential Display,DDD)分析方法,从大鼠睾丸组织中分离出了一个新基因-Lrrc18(GenBank登录号:BC081908).该基因定位于大鼠染色体16p16区带,gDNA在染色体上跨度40 900 bp,含6个外显子,编码一个含256个氨基酸的蛋白,带有4个LRR(leucine-rich repeat domain)结构域.Northern杂交结果显示Lrrc18只在睾丸中表达.对出生后3~56 d不同时期的大鼠睾丸的Lrrc18基因的表达进行检测,结果表明在大鼠出生后21 d时开始在睾丸组织中可检测到Lrrc18的mRNA表达,以后其表达量逐步上升,到42 d时达到最大值.该结果提示:Lrrc18基因在精子的发生过程中可能起重要作用.