运用荧光素酶报告基因建立PPARγ1的转录激活系统

核转录因子PPARγ与多种重大的疾病有密切关系 ,是近年来基础研究的热点及重要药物筛选靶点 .作者将一个表达PPARγ1全蛋白的重组质粒转染人Jarket细胞 ,通过RT PCR确定其表达后 ,与另一个含有PPRE元件和荧光素酶报告基因的质粒 pTK PPRE瞬时共转染细胞 ,检测到较高水平表达的荧光素酶 .将共转染的细胞以PPARγ的强激活物 15d PGJ2刺激后 ,荧光素酶的表达水平大幅度上升 .实验结果表明 ,已成功地建立了PPARγ转录激活系统 .这对于PPARγ激活剂的研究开发及相关基础研究具有重要作用 .     

双荧光素酶报告基因系统的应用研究进展

双报告基因即在一个信号系统内同时表达,但独立测量的两个荧光酶的报告基因。在双报告基因系统中,一个报告基因活性的改变,与基因表达的特定实验条件相关,而另个报告基因的组成型活性则提供内对照,使实验值正态化。目前很多实验都采用了荧光素酶报告基因(Luc),但从检测速度、灵敏度和线性范围来考虑,双荧光素酶即萤火虫荧光素酶(firefly luciferase)和海肾荧光素酶(Renilla luciferase)的组合,可以较好地体现检测结果的精确性。本文以萤火虫双荧光素酶报告基因系统为重点,综述了该报告系统的特点、应用和近年来的研究进展。     

昆虫细胞中共表达人糖基转移酶对重组蛋白SEAP表达的影响

杆状病毒-昆虫细胞表达系统有表达量高及蛋白翻译后修饰较完善等特点,但与哺乳动物相比其缺乏几种关键的糖基转移酶.许多研究表明将哺乳动物的糖基转移酶基因转入昆虫细胞中,能使得昆虫细胞表达蛋白的修饰得到有效改善.本研究通过RT-PCR克隆了人Ⅱ型N-乙酰葡萄糖胺转移酶(β-1,2-N-acetylglucosaminyltransferaseⅡ)和Ⅰ型β-1,4-半乳糖基转移酶(β-1,4-galactosyltransferase)基因,并将它们分别插入重组杆状病毒上,获得了表达GnT2和β4GalT1的重组杆状病毒.以具有糖基化修饰位点的人分泌型碱性磷酸酶(Secreted Alkaline Phosphatase,SEAP)为对象,将表达糖基转移酶的重组杆状病毒和表达SEAP的重组杆状病毒共感染细胞,Western blot分析结果表明共感染时所表达的SEAP蛋白条带分子量明显大于其单独表达时的分子量.结果表明重组病毒共感染对杆状病毒-昆虫细胞表达的SEAP有修饰作用.     

GATA-3启动子报告基因载体构建及其活性鉴定

目的转录因子GATA-3在人乳腺癌的发生发展中扮演重要的角色,研究其转录调控有重要意义.方法从人乳腺癌细胞系MCF-7提取基因组DNA为模板,以PCR方法扩增获得GATA-3启动子序列,将片段克隆到pGL3-Basic载体内,鉴定后通过报告基因检测系统检测GATA-3启动子报告基因的荧光素酶活性.结果双酶切、基因测序鉴定结果显示,成功构建了GATA-3启动子报告基因,并在MCF-7细胞内鉴定了其具有荧光素酶的表达活性.结论本实验成功构建了GATA-3启动子报告基因载体pGL3-GATA-3pro-Luc,为后续GATA-3在乳腺癌中表达及其调控通路以及以GATA-3为靶标的抗肿瘤药物研究提供了有效工具.     

如何建立ISO9000品质系统的标准化体系

ISO9000需要公司或工厂的品质系统必须被定义、标准化,必须照此标准实行。标准化是ISO9000的基本要求,求也是法治企业的开始,所有管理的开始。 标准化是品质管理的规范化和准则化,使材料、设备,制品等的作业拥有管理     

网络设备配置标准化系统研究

网络设备配置标准化平台的设计紧密结合实际工作的需要,注重实际应用,操作简单.网管人员只需填写设备的基本信息即可自动生成配置脚本.通过网络设备配置标准化平台的应用,可大大减少网管人员配置设备的工作量,同时可以降低因配置不规范引发的设备运行风险,减轻运维工作量,提升工作效率,确保业务系统稳定运行.     

纤维素酶测活方法的分析——基于构建统一的工业化纤维素酶测活标准

本实验分析了国内外常用的测活标准IUPAC标准(Ghose, 1987)、中国农业行业标准（NY/T 912-2004）及各大公司的企业标准,结果显示采用IUPAC标准推荐的方法测定纤维素内切酶活力和总酶活力操作简单,稳定性、重复性较好.实验进一步对国内生产厂家的一系列产品进行了测定分析,为工业化纤维素酶测活体系的统一奠定了基础.     

基于CRISPR/Cas9基因编辑技术构建PD-L1-GFP报告基因HT29细胞株

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术和同源重组技术在PD-L1基因的特定位置敲入绿色荧光蛋白(GFP)序列,构建含有PD-L1-GFP报告基因的结肠癌细胞(HT29)稳定细胞株。根据CRISPR-Cas9靶点设计原则,针对PD-L1基因终止密码子设计两对sgRNA,退火形成双链后连接至Lenti-V2空载质粒中,转化培养后提取质粒并测序验证。对于正确的Lenti-V2-sgRNA重组质粒,T7E1酶切验证其基因编辑效率。根据靶点位置设计左同源臂+GFP+右同源臂序列合成Donor片段,双酶切后连接至pUC19,重组载体转化扩增后同样进行质粒提取和测序验证。将验证成功的Lenti-V2-sgRNA和pUC19-donor-GFP共转染HT29细胞,荧光显微镜检测GFP表达情况,菌落PCR及基因测序验证GFP报告基因的靶向插入效果。经酶切和测序鉴定,靶向编辑PD-L1的Cas9载体Lenti-V2-gRNA和含GFP基因的Donor质粒pUC19-donor-GFP构建成功。两个重组质粒转染HT29细胞后,显微观察、多克隆验证、单克隆筛选及鉴定结果显示,GFP成功转入HT29细胞并进行了...     

智能家居系统标准化初探

当前智能家居系统由于缺乏统一的技术标准的支持,使其不能满足现阶段社会需求。为此,利用SIP协议对智能家居各种中间件技术较好的兼容性,及其本身对网络用具控制良好的支持能力,文中提出了一种以SIP协议为基础的智能家居标准化方法,给出了系统架构和中央处理系统的软硬件结构,并实现了应用层软件系统。     

肝癌细胞能量代谢中三种酶活力的比较研究

对健康小鼠肝细胞，实验性肝癌小鼠肝细胞及肝癌实体瘤细胞中的琥珀酸脱氢酶，乳酸脱氢酶和细胞色素氧化活力进行测定，发现：１）与健康鼠肝细胞比较，肝癌细胞中琥珀酸脱氢比活力显著降低（Ｐ〈０．０１），乳酸脱氢酶，细胞色素氧化酶比活力显著升高（Ｐ〈０．０１）。２）与正常肝细胞比较，荷瘤小鼠肝细胞中乳酸脱氢酶，细胞色素氧化酶比活力显著升高（Ｐ〈０．０１）。琥珀酸脱氢酶比活力无明显变化（Ｐ〉０．０５）。结果提示     

The GUS reporter gene system

The GUS reporter gene system is already a powerful tool for the assessment of gene activity in transgenic plants. Further developments may lead to routine in vivo analysis and fusion genetics.     

利用报告基因表达系统快速鉴定骨诱导活性材料

通过构建真核表达质粒,使增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein, EGFP)报告基因的表达受骨形成相关转录因子Cbfa1基因启动子的调控,再用该质粒转染大鼠成肌细胞L6,建立稳定细胞株.在成骨培养基中诱导培养后,该细胞株呈现较明显的绿色荧光,表明细胞在经诱导的成骨分化过程中,Cbfa1基因表达增强,Cbfa1启动子驱动了EGFP的表达.将该细胞株接种到有较强骨诱导活性的羟基磷灰石/磷酸三钙(hydroxyapatitetricalcium phospha     

中国标准化治理体系的发展策略

通过借鉴美国、欧洲、日本标准化治理体系成熟模式和发展实践,根据国内外新形势的发展需求,从健全优化标准化组织管理机制、建立多方主体共同参与标准制修订长效机制、建立标准化复合型专业人才队伍培养机制、健全中国标准国际化工作机制4个方面,提出了推动健全中国标准化治理体系的发展策略。     

浅谈警用地理信息系统的标准化建设

警用地理信息指的是空间地理环境中公安工作所涉及的各种地形地物信息。警用地理信息系统标准化是数据共享和系统集成的重要前提,同时也是提高综合效益的必由之路。在当前,警用地理信息系统没有统一的标准。警用地理信息系统标准的建设,不仅提出了统一的标准,也统一了数据资源,使各地方、各警种在统一的标准下建设一个可行的警用地理信息系统。     

面向产品标准化的齿轮分类编码系统

通过设计以成组技术相似性原理为基础的28位齿轮分类编码系统,获取齿轮产品关键技术特性,分析齿轮分类编码的结果,汇集相似结构工艺的零件组,形成齿轮产品标准。结合齿轮产品核心特征,并参照滚动轴承代号的排列顺序设计了11位产品标识码方案,在专业齿轮制造型企业推行齿轮产品标准化。采用Visual Basic6.0语言和SQL Server2000数据库技术开发出基于客户机/服务器(Client/Server)的计算机辅助齿轮分类编码系统并给出了一齿轮零件的编码实例。实际运用表明,该系统能有效地将齿轮产品编码分类成组,将具有相同分类代码的齿轮的技术特性汇总,有利于实现齿轮零件设计和生产的标准化,进而以大批量零件生产的方式改进多品种、中小批量生产的状况,最终在齿轮行业实现大规模定制的专业化标准生产模式。     

小微企业安全生产标准化体系建设研究

随着我国经济的持续健康发展,小微企业在我国经济中起的作用越来越大,但由于小微企业往往在发展中缺乏统一管理和健康规划,其在安全生产方面也有着很大的隐患。本文从基础管理、设备设施、作业环境安全与职业健康等几个方面阐述了小微企业如何实现安全生产标准化,并提出了可行性建议,对小微工贸企业的安全生产标准化创建工作具有一定的借鉴和指导意义。     

基于WEB的电力企业标准化信息管理系统研究

结合电力企业标准管理和使用的特点,设计实现了基于WEB的电力企业标准化信息管理系统.该系统功能完善.具有很高的可靠性和实用性,对提高电力企业标准化管理工作的效率和水平具有重要意义.     

危化品从业单位安全标准化体系的模糊综合评价

以危险化学品从业单位安全标准化体系为研究对象,引入层次分析法(AHP),建立判断矩阵,计算该体系中10个一级要素和53个二级要素的权重系数。然后根据模糊数学理论,通过专家打分和计算,建立一级模糊评判矩阵和二级评判矩阵,与层次分析法所得的相应的指标权重进行模糊矩阵运算。最后通过对某中海油企业的安全标准化体系进行模糊综合评价,验证其可行。     

建立完整的实践教学体系培养学生的实践能力和创新意识

文章介绍了东北石油大学华瑞学院机械电子工程系为了培养学生的实践能力与创新意识,强化了实践教学环节,在机械设计制造及其自动化专业建立了完整合理的实践教学课程体系的具体做法。在短时间内组建了具有一定规模的机械实验室,组织学生到国内知名企业进行生产实习,进行了多门课程的课程设计以及定期举办学生优秀作业作品展。经过几年的实践,有效地提高了学生的实践能力和创新精神。