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相似文献
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1.
苦参凝集素的色氨酸残基修饰与荧光光谱研究   总被引:9,自引:4,他引:5  
苦参凝集素(SFL)经等电聚焦测得其等电点为5.56,用比色法测得每分子SFL含有3个色氨酸残基,经N-溴代丁二酰亚胺(NBS)修饰表明其中2个Trp残基位于分子表面,当这2个Trp残基补修饰后,SFL的凝血活性完全丧失,糖保护试验表明,SFL专一性抑制糖Man能够保护SFL,阻断NBS对SFL的修饰作用,说明色氨酸不仅是SFL凝血活性所必需的,而且还参与其糖结合部位的组成,SFL随着NBS的逐渐修饰,其内源荧光光谱亦相应发生变化,结果表明分子表面的2个Trp残基可能位于分子的疏水袋中,而另一个Trp残基则埋藏于分子内部,荧光淬灭研究表明,丙烯酰胺能淬灭87%色氨酸残基的荧光。  相似文献   

2.
对黄牛肝菌凝集素(Boletus fulvus lectin,BFL)进行氨基酸化学修饰,结果表明,Trp残基、Tyr残基及Ser/Thr残基的修饰都会对BFL的凝血活性产生影响,表明这些残基是BFL凝血活性所必需的,可能参与了其凝血活性中心的构成.而Arg残基修饰后,BFL的凝血活性未发生改变,表明Arg不是维持BFL凝血活性的必需基团.内源荧光光谱分析结果表明,BFL所发射的荧光是由Trp残基贡献的,且Trp残基在BFL分子中所处的微环境极性较弱,屏蔽于一定的构象当中.温度、pH值及变性剂对BFL内源荧光光谱的影响与基本理化性质的实验结果一致.氨基酸修饰对荧光光谱的影响表明,Trp残基修饰会引起BFL內源荧光光谱较大变动,而Tyr、Ser/Thr残基修饰对BFL內源荧光光谱影响不大.  相似文献   

3.
以N-溴代琥珀酰亚胺作为修饰剂,对藻红蓝蛋白裂合异构酶F亚基中的色氨酸(Trp)残基与酶活性的关系进行了研究.研究表明, PecF的Trp残基均位于分子内部,NBS的修饰导致了酶活性的显著降低,但并未完全失去活性.酶被修饰后的荧光和圆二色谱均发生了变化,为酶的结构和功能间关系研究提供了重要信息.  相似文献   

4.
通过对麦冬凝集素(OJL)进行特殊氨基酸的化学修饰,揭示了OJL所含的6个Trp残基只有1个位于蛋白表面,Trp、Tyr和Ser/Thr不是OJL凝集活性所必需的氨基酸,而Arg是维持其活性的必需基团.OJL在天然状态下荧光发射峰在328 nm处,Trp周围的极性较弱,处于疏水的微环境或Trp的吲哚环有特殊的构象.丙烯酰胺可以淬灭93.46%的色氨酸荧光,而CsCl和KI淬灭的程度较小,分别为41.25%和55.56%,证明Trp主要位于疏水环境.  相似文献   

5.
用特异性化学修饰和荧光光谱的方法分析川泽泻凝集素(APL)活性位点氨基酸的分布情况.研究结果发现,色氨酸的化学修饰使活性降低80%,统计出每分子APL含有2个色氨酸残基,一个色氨酸位于凝集活性中心,另一个位于分子表面的疏水袋中,与凝集活性无关.精氨酸的化学修饰使活性降低50%,半胱氨酸的化学修饰使活性完全丧失.天冬氨酸、谷氨酸、酪氨酸、丝氨酸/苏氨酸等化学修饰后凝集活性无明显变化.表明色氨酸、精氨酸和半胱氨酸对凝集素的凝集活性中心的构成起重要作用,天冬氨酸、谷氨酸、酪氨酸、丝氨酸/苏氨酸等氨基酸位于凝集素的凝集活性中心附近,只是在维持凝集素分子的构象上具有一定的作用.  相似文献   

6.
长毛对虾碱性磷酸酶功能基团的研究   总被引:4,自引:1,他引:4  
用对-氯汞苯甲酸修饰该酶分子中的巯基,酶活力不受影响,说明该酶不是“巯基酶”.用N溴代琥珀酰亚胺修饰酶后,活力完全丧失,修饰后的酶在275nm处的紫外吸收峰完全消失,340nm处荧光发射峰也逐渐下降至完全淬灭,说明色氨酸残基是酶活性必需基因之一.用甲醛、醋酸酐修饰氨基,溴代乙酸修饰咪唑基也可以使酶活力完全丧失,说明赖氨酸残基及组氨酸残基也是酶活性功能基因.用乙酰丙酮修饰精氨酸残基,酶活力下降了50%,精氨酸残基可能与维系酶分子构象有关.  相似文献   

7.
采用荧光光谱研究了一支箭凝集素(OPA)在不同温度,pH值以及不同淬灭剂作用时,其活性和分子构象变化的关系,结果表明:OPA具有较强的温度和酸碱度的耐受性,分子构象也无较大变化,但在pH 12时,其分子构象发生较大变化,活性也基本丧失.荧光淬灭剂丙烯酰胺和琥珀酰亚胺对OPA中Trp淬灭程度达100%,KI淬灭约62.5%的Trp荧光.表明OPA发射荧光的氨基酸残基大部分位于分子表面,少部分位于分子内部疏水环境中,且发荧光氨基酸所处微环境带电荷.  相似文献   

8.
福寿螺β-葡萄糖苷酶催化功能基团   总被引:2,自引:0,他引:2  
应用化学修饰法研究福寿螺β-葡萄糖苷酶活性功能基团的性质.用5,5′-二硫代双(2-硝基苯甲酸)和对-氯汞苯甲酸为修饰剂修饰酶分子中的巯基,酶活力基本不受影响,说明该酶不是“巯基酶”.用N-溴代琥珀酰亚胺在pH6.0下修饰酶后,可使酶活力完全丧失,被修饰后的酶分子在278nm处的紫外吸收峰逐渐下降至完全消失,338nm处的荧光发射峰也逐渐下降至完全淬灭,说明色氨酸残基是酶活性必需基团之一.用碳二亚胺、溴代乙酸或甲醛修饰酶,可以使酶活力完全丧失,说明羧基、组氨酸的咪唑基及赖氨酸的氨基也与酶活性有密切的关系.用乙酰丙酮、苯甲磺酰氟修饰酶,酶活力不受影响,表明精氨酸残基和羟基与酶活性无关.  相似文献   

9.
用N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)和N-乙基丁二酰亚胺(NEM)分别对A.4041α-淀粉酶的主要组分α-Ⅲ的色氨酸(TrP)残基和巯基进行修饰.结果表明,50%的Trp残基被NBS修饰,可使酶活力完全丧失;Ca2+和底物可减少修饰酶的失活;加Ca2+或底物后修饰酶的荧光强度较对照修饰酶有显著提高.表明Trp是催化必需基团,并与结合底物和Ca2+有关.用过量NEM修饰巯基,酶活力改变不大,表明巯基不是酶的催化必需基因,并对酶的热稳定性基本无影响.  相似文献   

10.
刘隽  高成卓  邹国林 《河南科学》2009,27(9):1077-1081
分别以N-溴代琥珀酰亚胺(NBS),2,3-丁二酮和N-乙基-5-苯基异口唑-3’-磺酸盐作修饰剂,研究色氨酸,精氨酸残基和羧基对RtⅠ活性的影响.结果表明,NBS的修饰虽可导致Pst Ⅰ活性丧失,但紫外吸收光谱和SDS-PAGE研究结果表明色氨酸残基并非Pst Ⅰ的活性基团,而精氨酸残基和羧基的修饰可导致PstⅠ和Rst Ⅰ活性丧失,并按Keech和Farrant动力学方法分析得出无论在原活性还是星号活性条件下,有一个精氨酸残基和两个羧基是Pst Ⅰ的活性基团.  相似文献   

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