沙冬青和骆驼蓬水煮提取物对松材线虫的毒杀作用

以采自内蒙古鸟海市的沙冬青及骆驼蓬为植物材料,研究其提取物对松材线虫的生物活性．将水煮浓缩膏与线虫液分别混合配制成浓度为12,6,3,1．5,1,0．5,0．25和0．125g／L的线虫药液,每日统计线虫死亡率．结果显示,沙冬青的杀虫活性好于骆驼蓬;沙冬青药液浓度在1g／L及以上都有杀虫效果,骆驼蓬药液浓度在6g／L及以上有较好的杀虫效果;沙冬青和骆驼蓬处理松材线虫1d后的半致死浓度分别为0．56和1．39g／L．     

松材线虫纤维素酶的分离纯化及免疫学检测方法的研究

松材线虫分泌的纤维素酶在松树疫木的病理学研究上有着重要的地位．本研究通过松材线虫分泌的纤维素酶的鉴定以及初步纯化,得到了一种纤维素酶抗原(BXC60)．纯化后的纤维素酶抗原具有较强的水解羧甲基纤维素钠的能力,比活力为100．27 U／mg,与纯化前的粗酶液比活力相比提高了10．4倍,同时具有良好的抗原性．以该纤维素酶为指标,建立了一种选择性抗体酶联免疫分析法(SAEIA),该方法显示了较好的特异性,其检测灵敏度为0．1μg／well．利用该方法可以简便、快捷地检测出疫木中存在的纤维素酶,为松材线虫的检测及松材线虫病的研究提供了一种新的手段．     

黄原胶流变学性质的实验研究

研究了不同浓度黄原胶水溶液的流变学特性,回归了稠度系数K和流变参数n与黄原胶浓度Cp的关系,结果表明：溶液浓度较低时,黄原胶水溶液为牛顿性流体;随着浓度的增加,逐渐转变为假塑性流体．可以分别描述为黄原胶浓度Cp的函数：当0〈Cp≤30g／L时,K=1．128Cp^1.572．当0〈Cp≤8g／L时,n=0．485-0．16lnCp;当8g／L〈Cp≤30g／L时,n=0．075＋0．041lnCp．     

喜旱莲子草与乌蔹莓等植物提取物对松材线虫的毒杀活性研究

【目的】松材线虫病是当前我国林业生产上危害最严重的森林病害。尽管投入了大量的人力、物力和财力,但松材线虫病防控形势依然严峻。化学杀线剂具有环境局限性,研发高效植物源杀灭松材线虫的药剂对控制松材线虫病疫情,同时降低环境化学污染具有重要意义。【方法】采用乙醇浸渍提取法制备喜旱莲子草(Alternanthera philoxeroides)、乌蔹莓(Cayratia japonica)、迷迭香(Rosmarinus officinalis)等30种植物的提取物,测定其对松材线虫的毒杀活性。利用液液萃取法,用乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水等有机溶剂对两种植物中的活性成分进行分步提取,得到药液的质量浓度梯度为10.000、5.000、2.500、1.250和0.625 g/L,并分别测定其对松材线虫的毒杀活性。虫卵悬浮液在25 ℃恒温保湿培养箱内培养,24 h后开始观察,32 h后结束观察。通过镜检统计线虫卵数,并计算相应的线虫卵累计孵化率和孵化抑制率。【结果】采用质量浓度为10 g/L的喜旱莲子草、乌蔹莓乙醇提取物分别处理松材线虫,72 h后线虫校正死亡率均为 100%。喜旱莲子草的乙酸乙酯萃取物和乌蔹莓的水层萃取物中存在主要的杀线活性物质,两种植物萃取物处理松材线虫72 h后的半致死剂量(LC₅₀)分别为0.588 8和0.969 3 g/L。在离体虫卵孵化试验中,喜旱莲子草的乙酸乙酯萃取物对线虫的卵孵化抑制率最大,为79.77%,其次为乌蔹莓的水层萃取物,为46.51%。【结论】可见,喜旱莲子草和乌蔹莓对松材线虫成虫和虫卵均具有较强的生物毒杀活性,可作为新型植物杀线虫剂加以开发利用。     

“松材线虫SCAR标记与系列分子检测技术及试剂盒研制”项目通过鉴定

2006年5月，我校森林资源与环境学院叶建仁教授主持完成的“松材线虫SCAR标记与系列分子检测技术及试剂盒研制”通过了江苏省科技厅组织的科技成果鉴定。该项研究对松材线虫与拟松材线虫特异片段进行了系统筛选，共获得了7个松材线虫DNA特异片段与5个拟松材线虫DNA特异片段，为松材线虫与拟松材线虫的分子鉴定奠定了基础。首次将2个松材线虫与2个拟松材线虫的DNA特异片段成功转化为SCAR标记，丰富了松材线虫与拟松材线虫分子标记方法。首次采用SCAR标记方法成功构建了松材线虫检测试剂盒，PCR检测过程仅需2．2h。首次成功标记了一个可用于检测松材线虫的非放射性探针DlG—F2／R1。用该探针对线虫基因组DNA点杂交，松材线虫均表现有较强的杂交信号，而拟松材线虫、霍夫曼尼伞滑刃线虫、大核滑刃线虫、长尾属线虫等均无杂交信号。成功设计、合成了TaqMan探针与其配套的引物对F11／R11。     

金色链霉菌培养条件优化研究

金色链霉菌摇瓶培养适宜的接种量为3．2％、接种时间为25h、温度在28℃左右。4g／L的硫酸铵和0．043g／L无机磷有利于产物金霉素(CTC)合成。酵母膏的加入对CTC的合成有一定促进作用,以3g／L的效果较好。在50L发酵罐中,较低浓度的无机磷对CTC发酵有利;酵母膏的加入量以4．2g／L最佳,产物效价比酵母膏加入量为2．8g／L和5．6g／L时高3．1％和9．79／5,优化发酵过程的CTC产率提高了18％。     

基因工程菌Pichia pastoris连续培养的生长及抑制动力学

在同一稀释率μ（μ＝0．14h^-1）下用不同浓度的甘油流加进行连续培养,研究甘油浓度对基因工程菌毕赤酵母（Pichia pastori）生长的影响。结果表明甘油浓度对细胞生物量（DCW和WCW）、底物得率系数（Yx/s）、底物比消耗速率（qs）、呼吸熵（RQ）与二氧化碳释放率（CER）都有影响,在低甘油残留浓度（＜63．3g／L）下,甘油是激活剂,菌体生长符合Monod方程,Ks＝19．62g／L,甘油激活常数Ka＝19．45g／L;而在高甘油残留浓度（＞63．3g/L）下甘油是抑制剂,菌体生长特征符合Haldance方程,Ks＝0．014g／L,K1=156．67g／L。毕赤酵母生长的甘油抑制浓度为55．2g／L。     

羟胺-乙二胺-钴(Ⅱ)显色体系与甲醛质量浓度测定的研究

采用正交试验法研究了羟胺-乙二胺-钴(Ⅱ)的显色体系与甲醛反应的最佳条件．最 佳条件为5．00×10-2 mol／L羟胺溶液2．00 mL,1．00×10-1 mol／L乙二胺溶液3．0 mL,2．00×10-1 moL／L钴(Ⅱ)溶液5．00 mL,0．200 mol／L硫酸溶液0．80 mL,加热温度为55℃,加热时间为6 min．甲 醛质量浓度在0．080-3．200μg／mL范围内线性关系良好,检测下限为0．061 0 μg／mL,线性相关系数 为0．998 7．该法可用于饮用水加标回收率实验及脲醛树脂中的游离甲醛质量浓度检测．     

大叶冬青叶外植体的愈伤组织诱导与不定芽苗再生

将离体培养的大叶冬青幼叶外植体在含有TDZ(噻吩隆,浓度0．1～5．0μmol／L)与IAA(浓度0．1～5．0μmol／L)的wPM培养基上培养,能够产生愈伤组织。当TDZ浓度不变时,5．0μmol／LIAA处理产生的愈伤组织块直径最大;愈伤组织块转培到含有不同浓度TDZ与IAA的WPM培养基上,在5．0μmol／LTDZ 3．0μmol／LIAA的培养基上出现较多不定芽苗(每一愈伤组织块平均产生11．2株);几种细胞分裂素作用比较研究表明：在BA、TDZ与ZT(均为15．0μmol／L)处理中,较好的芽苗增殖系数分别为3．7,6．0和7．4,BA与2-ip(均为3．0μmol／L)处理时芽苗高生长可达34mm和45mm。     

利用秀丽隐杆线虫构建抗菌物质体内筛选模型

以秀丽隐杆线虫为模式生物,建立抗菌物质活体筛选模型．以铜绿假单孢菌感染线虫后,加入不同剂量已知抗生素治疗,观察线虫存活情况及体内细菌数量变化,确定模型建立的操作条件．结果表明,线虫感染程度可量化操作,最佳操作参数为：铜绿假单胞菌培养时间10～12h,菌液浓度A600值1．0—1．2,线虫感染时间15h．抗生素的使用能够显著提高感染线虫存活状况,其中环丙沙星治疗浓度范围为0～20μg／mL,线虫存活率和药物剂量之间具有稳定的线性关系．     

福建省松枯死木检测鉴定方法与结果分析

采用常规检测法（贝尔曼漏斗法）研究了松枯死木中的线虫种类、相互存在关系和检出情况。初步将线虫分为4大类：松材线虫、拟松材线虫、伞滑刃属其它线虫和非伞滑刃属线虫。其在枯死木中的存在关系有14种类型。（1）松材线虫;（2）松材线虫、拟松材线虫和非伞滑刃属线虫;（3）松材线虫和伞滑刃属其它线虫;（4）松材线虫和非伞滑刃属线虫;（5）松材线虫、伞滑刃属其它线虫和非伞滑刃属线虫;（6）松材线虫、拟松材线虫、伞滑刃属其它线虫和非伞滑刃属线虫;（7）拟松材线虫;（8）拟松材线虫和伞滑刃属其它线虫;（9）拟松材线虫和非伞滑刃属线虫;（10）拟松材线虫、伞滑刃属其它线虫和非伞滑刃属线虫;（11）伞滑刃属其它线虫;（12）伞滑刃属其它线虫和非伞滑刃属线虫;（13）非伞滑刃属线虫;（14）无线虫。2008~2010年,松材线虫检出率分别为34.59%、28.21%和24.19%,呈逐年下降趋势;拟松材线虫检出率为14.04%、16.03%和0.8%。每年松材线虫检出率与季节的关系差异不明显,但常年基本上都有松材线虫,为枯死木的取样增加了难度。应用指示剂1号进行快速检测,结果表明,对于松材线虫病木,其准确率达100%。随着时间流失,松材线虫在枯死木中慢慢消失,影响常规检测和快速检测结果,所以尽量在松树枯死初期取样。     

松材线虫和拟松材线虫活体染色比较其分泌-排泄物

松树萎蔫病是由松材线虫(Bursaphelenchusxylophilus)引起的松属树种上的一种毁灭性的病害,因此,对松材线虫致病机理的研究具有重要的理论和实践意义.根据松材线虫和拟松材线虫致病性的差异,通过活体染色对松材线虫和拟松材线虫分泌-排泄物进行了比较研究,发现松材线虫和拟松材线虫线虫分泌-排泄物存在明显的差别,这种差别可能与松材线虫的致病性有关.     

浙江省富阳市森林景观格局与松材线虫病发病程度的关系

基于富阳市各乡镇1：10000林相图,运用地理信息系统（GIS）方法,并结合实地调查,对富阳市5个受松材线虫病危害的乡镇（新义乡、环山乡、大源乡、受降镇、高桥镇）的森林景观格局与各乡镇松材线虫病发病程度之间的关系进行了研究。首先绘制了景观类型格局图,然后分别比较总体景观指数和类型景观指数与松材线虫病发病程度之间的关系。研究结果表明：（1）富阳市各乡镇森林景观格局的共同特点是景观格局的基质,是松林景观,这是松材线虫病在富阳市爆发的主要原因之一;（2）总体景观的破碎化程度和松林景观的破碎化程度均强烈地影响着松材线虫病的发病程度,破碎化程度越高发病程度越大;（3）森林景观的异质性也影响着松材线虫病的发病程度,异质性程度越高松材线虫病发病程度越大;（4）森林景观、松林景观聚集度高、连通性好的乡镇松材线虫病的发病程度低。     

贺兰山5种国家级保护植物的花粉形态研究

通过扫描电镜（SEM）对贺兰山5种国家级重点保护植物的花粉形态进行了详细的观察描述，结果表明，这5种植物的花粉形态均与其所属科或属的总体性状相一致，而同属豆科（Leguminosae）的沙冬青（Ammopiptanthus mongolicus）和野大豆（Glycine soja），其花粉形态主要在大小和表面纹饰的细微性状存在差别；蒙古扁桃（Prunus mongolicus）的花粉形态符合蔷薇科（Rosaceae），除地榆属（Sanguisorba L．）外的总体特征；贺兰山丁香（Syringa pinnatifolia var．alashanensis）的花粉形态与木犀科（Oleaceae）丁香属（Syringa L．）其他种的形态大致相同，但纹饰表现非常强烈；四合木（Tetraena mongollcus）在我国是蒺藜科（Zygophyllaceae）的单种属植物，其花粉形态与蒺幕科其他属植物的花粉形态差别较大．     

气候和土壤通透性对沙冬青幼苗生长的影响

为了实现沙冬青在天津地区的引种栽培,将不同萌发程度的沙冬青种子播种到天津当地不同质地的土壤中,对其出苗时间以及苗期各生长指标进行观测.结果表明:种子的萌发程度和土壤质地对沙冬青的出苗速度、出苗率以及幼苗的长势等均有一定的影响,其中吸胀的种子出苗率最高,随着覆盖沙壤土厚度的减少,其出苗率也依次降低;与疏松的沙壤土相比,沙冬青在紧实的重壤土中生长缓慢且长势弱,而覆盖不同厚度的沙壤土对沙冬青的长势影响不大.偏相关分析表明,降雨量和地表15 cm土壤温度分别是影响沙冬青株高和叶面积的主导因子.     

新疆哈、维、蒙民族民间利用骆驼蓬的药用方法调查

运用民族植物学的方法调查发现,新疆维吾尔族、哈萨克族、蒙古族对骆驼蓬的利用比较广泛,柯尔克孜、塔塔尔等民族也常用,民间主要用其种子及全草治疗关节炎、颈椎病、皮肤病、食道癌、胃癌等,用药方法为内服和外用两种.除此以外骆驼蓬还是维、哈等民族比较广泛使用的主要神草.新疆维、哈、蒙等少数民族对骆驼蓬的民间药用传统知识比较丰富,具有进一步深入调查,挖掘其价值.     

沙冬青与大叶黄杨耐寒性比较

研究天津地区栽培的沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)与大叶黄杨(Euonymus japonicus)自然降温条件下叶片组织的超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化物酶(POD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、相对电导率(REC)、丙二醛(MDA)和脯氨酸(Pro)含量在秋冬季生长过程中的变化.结果表明,在自然降温过程中,沙冬青叶片中各种保护性物质均升高,保护酶活性以及脯氨酸含量均显著高于大叶黄杨,而膜脂过氧化产物MDA含量却显著低于大叶黄杨叶片中含量.因此,从沙冬青和大叶黄杨2种植物抵御低温伤害的能力比较来看,沙冬青抗寒能力更强.     

火炬松自然条件下感染松材线虫病初报

对2008年江苏镇江出现的火炬松(Pinus taeda L.)枯死现象进行了初步研究。通过野外实地调查和室内检查,证实了这批枯死的火炬松系松材线虫病(Bursaphelenchus xylophilus (Steiner &; Buhrer) Nickle)危害所致,其在火炬松上的侵染特点为病害发展速度较慢;罹病木松褐天牛产卵刻槽多有脂点且较大;分离物中多混杂有其他线虫。这是江苏省自1982年发生松材线虫病以来首次关于火炬松自然感病的报道。     

四合木甲醇提取物中杀线虫物质的分离与活性鉴定

通过活性追踪，对四合木的甲醇提取物活性成分进行了初步分离，使用快速制备色谱（combiflash companion）对甲醇提取物的氯仿萃取相进行了进一步分离，得到18个较大的馏分，同时以松材线虫（Bursa phelenchus xylophilus）为供试对象，对各馏分杀线虫活性作了初步测定，结果表明：氯仿萃取相F4馏分有较强的杀线虫活性，具有进一步研究的价值．     

松材线虫快速检测试剂盒研制

采用引物对K09F2/R对枯死松树内分离的松材线虫、拟松材线虫及其他线虫进行检测,结果表明,所有松材线虫株系均扩增出一条340 bp的清晰、明亮的条带.而拟松材线虫、其他线虫均无扩增产物.利用引物对K09F2/R构建了松材线虫检测试剂盒.采用该试剂盒可使整个检测过程不超过2.5 h;该试剂盒检测灵敏度为1/7 条线虫,达到了对幼虫成功鉴定的目的,且检测结果便于判读,检测费用较低.