温度对大黄鱼源变形假单胞菌胞外产物酶活力的影响

为了研究大黄鱼源变形假单胞菌胞外产物的致病性,在内脏白点病的高发温度（18 ℃）培养大黄鱼的病原菌——变形假单胞菌,利用玻璃纸覆盖平板技术制备其胞外产物,测定不同温度（低温不致病温度12 ℃、高发致病温度18 ℃和高温不致病温度28 ℃）下其胞外产物的酶活力.结果显示:变形假单胞菌胞外产物的淀粉酶、丝氨酸蛋白酶类、天冬氨酸蛋白酶类、类胃蛋白酶、类糜蛋白酶、卵磷脂酶、酸性磷酸酯酶和碱性磷酸酯酶的活性受温度影响比较大,28 ℃条件下酶活力显著（P＜0.05）高于12 ℃或者18 ℃时的酶活力;半胱氨酸蛋白酶类、氨肽酶的活性和溶血活性受温度影响没有显著性变化（P＞0.05）.实验结果表明,虽然变形假单胞菌胞外产物是其致病因素之一,但大黄鱼内脏白点病在特定温度（16~20 ℃）下高发并非是由于胞外产物在该温度下的活性较高.该结果增进了对大黄鱼内脏白点病发病机理的认识.     

一种定量检测大黄鱼感染变形假单胞菌方法的建立与应用

变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicid)是引起大黄鱼(Larimichthys crocea)内脏白点病的主要病原。基于变形假单胞菌的gyrB基因与大黄鱼的单拷贝基因gdf-8分别设计1对特异性引物,对所设计的变形假单胞菌gyrB基因的引物特异性进行了检验,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测了400尾人工浸泡感染变形假单胞菌5 d后的大黄鱼幼鱼脾脏中的病原菌的相对含量。结果显示,基于gyrB基因所设计的引物对变形假单胞菌检测具有良好的特异性,可以用于对变形假单胞菌的定性和定量检测;400尾人工攻毒大黄鱼幼鱼脾脏中变形假单胞菌的相对含量(相对带菌量,用gyrB基因拷贝数与大黄鱼gdf-8基因拷贝数之比表示)变化在5.04×10~(-7)～0.482之间,不同个体之间的相对带菌量差异很大,说明不同个体的大黄鱼对变形假单胞菌感染的抵抗力有很显著的差异。     

大黄鱼trim38基因的克隆及其表达分析

］由变形假单胞菌（Pseudomonas plecoglossicida）引起的大黄鱼（Larimichthys crocea）内脏白点病的死亡率可达50%~80%。对抗病相关基因trim38进行了分子及表达特征等分析。结果显示:该基因开放阅读框（ORF）1623 bp，编码540个氨基酸，预测蛋白分子量为61.58 ku，等电点6.99。qRT-PCR的结果表明，在所有检测的组织中都发现了trim38的转录产物，但在肾脏中的相对表达量最高。变形假单胞菌攻毒刺激后，大黄鱼脾脏中该基因持续表达，在120 h达到峰值；肝脏中3 h显著表达，之后相对表达量降低；肾脏中该基因相对表达量变化不大，在96 h左右达到最大值。上述结果表明trim38基因参与了大黄鱼应对变形假单胞菌感染的抗病免疫过程。     

闽东海域刺激隐核虫的生活史观察及乙酸杀虫效果

近年来,由刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)感染引发的"白点病"为闽东大黄鱼(Pseudosciaena crocea)养殖业带来连续重大损失.大量针对该病的研究工作已经开展,但仍未找到治疗"白点病"安全、有效的方法.本实验从福建省福鼎市八尺门海域取得一种寄生虫,通过形态学及分子生物学相关鉴定方法,证明了所取寄生虫为刺激隐核虫.利用乙酸对大黄鱼幼鱼进行药物安全性评价,同时开展杀灭不同生活史阶段刺激隐核虫的时间效应与剂量效应实验.结果显示:刺激隐核虫包囊对乙酸的耐受力显著强于幼虫,乙酸在杀灭幼虫的同时,对大黄鱼幼鱼也有一定的刺激作用,因此在实际用药中应严格控制剂量.根据实验结果,建议在生产中防治"白点病"时,要以刺激隐核虫幼虫为目标,使用157.4mg/L乙酸,累计处理2h,可以有效杀灭全部幼虫,又不会对鱼体造成危害,是一种治疗"白点病"的安全用药策略.     

大黄鱼人工感染杀香鱼假单胞菌的病理形态学及病原分布的初步研究

为了研究杀香鱼假单胞菌在感染大黄鱼体内的分布状况及其所致各器官的病理损伤特点,通过人工回感试验,利用组织切片及免疫组化技术对感染大黄鱼的肝脏、脾脏、肾脏及鳃组织进行了组织病理切片,并进行HE染色和免疫组化分析。结果显示,人工感染发病大黄鱼临床症状与自然感染发病症状一致,病鱼体表无明显病症,但肝、脾、肾等内脏有大量白色结节;组织病理显示,病鱼肝脏、脾脏和肾脏是感染损伤的主要靶器官,内脏组织发生变性、坏死以及出现特征性的病理性结节;免疫组化检测特异性阳性信号出现在病鱼内脏组织器官的血窦或血管以及巨噬细胞内。研究表明,杀香鱼假单胞菌侵入鱼体后,主要分布在机体的血液中并大量增殖,通过血液循环到达鱼体各内脏器官;杀香鱼假单胞菌在鱼组织内的分布与其所致病理损伤之间呈正相关。     

福建霞浦海区刺激隐核虫虫株鉴定及生活史观察

分离患"白点病"的大黄鱼(Pseudosciaena crocea)鱼鳃上的刺激隐核虫(Cryptocaryonirritans),提取基因组DNA,PCR扩增rDNA-ITS-1基因并进行序列分析.结果显示:该虫的rDNA-ITS-1序列与刺激隐核虫PYH4.12株及Chiayi虫株完全一致,表明福建霞浦流行的"白点...     

大黄鱼源杀香鱼假单胞菌外膜蛋白OmpA的原核表达及免疫原性分析

外膜蛋白A(OmpA)是革兰氏阴性菌主要的外膜蛋白之一,在多种致病菌中表现出较强的免疫原性,是具有潜力的候选疫苗。为分析大黄鱼内脏白点病病原杀香鱼假单胞菌OmpA类外膜蛋白的免疫原性,本研究选取了杀香鱼假单胞菌基因组中存在的3个OmpA类重组蛋白(依次命名为P1,P2,P5,Genbank收录号分别为EPB94769.1,EPB94930.1,EPB95835.1),通过构建pET30a-OmpA表达载体、转化BL21诱导表达、His标签纯化等技术,获得3个纯化的OmpA类重组蛋白,分子量大小依次为25 kD(P1),32 kD(P2),35 kD(P5)。用制备的新西兰兔抗杀香鱼假单胞菌多克隆抗体,对获得的纯蛋白进行免疫原性Western Blot检测,结果表明:重组蛋白P1,P2,P5均能与兔抗发生特异结合,结合强度P5P2P1。本研究首次获得了杀香鱼假单胞菌OmpA重组蛋白并初步鉴定了其免疫原性,为杀香鱼假单胞菌的疫苗设计和筛选提供了有益参考。     

产气肠杆菌和液化沙雷氏菌事感染引起鸭眼炎的诊断

流行病学调查、细菌分离培养鉴定及动物试验证明，成都某种鸭场流行的眼炎是由产气肠杆菌与液化沙雷氏菌混合感染引起的，并初步证明：该病可能经过破损的粘膜而感染，被污染的水源本是病发生和流行的传染来源。     

稚鳖“小白点病”病原的研究

本文是针对福建省厦门郊区某鳖养殖场中稚鳖暴发的“小白点病”，病原进行了分离、培养、人工感染、菌种鉴定、药敏试验等试验研究，确认引起稚鳖“小白点病”的病原菌为嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ），药敏试验表明该病的防治宜采用氯霉素、氟呱酸、庆大霉素、丁胺卡那霉素等药物。     

大黄鱼体重和内脏指标的相关性分析

为研究大黄鱼主要内脏指标差异及其与体重的相关性,随机取500尾养殖大黄鱼（雌鱼262尾,雄鱼238尾）,分别测定体重、肠长和5个主要m(脏器),计算脏器指数（I）。结果显示:除I（心脏）外,大黄鱼各m(脏器)和I（脏器）在雌雄间均有显著性差异（P<0.05）;大黄鱼部分m(脏器)之间和I（脏器）之间达到显著性相关;除I（性腺）和I（肠长）外,余m（脏器）和I（脏器）均与体重和m（胴体)呈极显著相关（P <0.01）;大黄鱼的m(心脏)、m(肝脏)、m(鳔)、m(胃肠)及肠长随鱼体增大而增加。多元回归分析显示m(脏器)与体重有显著相关性,其中m(鳔)与体重的相关性最强。     

868菌发酵物用作大黄鱼和鲈鱼饵料添加剂的初步试验

以饵料0．5％的量添回868菌发酵物,作为大黄鱼（厦门）,大黄鱼（连江）和钙鱼饵料添加剂,它们的日增长率分别比对照提高16．1％,18．8％和32．5％,日增重率分别比对照提高12．5％,21．4％和16．4％,同时,大黄鱼（厦门）,大黄鱼（连江）和鲈鱼钌料系数比对照分别降低17．7％,9．4％和20．1％,结果表明：868菌发酵物作为饵料添加中以促进大黄鱼和鲈鱼的生长,并且可以提高它们的饵料效率。     

中华鳖气单孢菌类疾病研究

对气单孢菌性鳖病做了大量的研究,取得了如下几方面的进展：（1）国内最先发现并报道了鳖白点病,水泡病;（2）澄清了鳖烂甲病,肿脖子病,白底板病,腹水病的病原及其关系;（3）揭示了嗜水气单孢菌在组织的分布和疾病的发生机制;（4）拟定出对各种鳖病的防治方法,多年的临床实践资料显示,在中等管理水平下,本成果的技术方法可控制“白点病”发病率在2％以下,烂甲病和肿脖子病发病率在1．5％以下,使烂甲病,肿脖子病治愈率达到85－93％,腹水病轻,中度病鳖转归率在97．7％以上。     

大黄鱼凝血酶原类似基因的克隆及其表达分析

采用快速末端cDNA扩增法,首次从大黄鱼中克隆到全长为2 023 bp的凝血酶原类似基因cDNA,编码为617个氨基酸,其中包括80 bp的5′末端非编码区及89 bp包含poly(A)尾的3′末端非编码区。预测1~15位的氨基酸处存在1个信号肽。推导的氨基酸序列与哺乳动物及其他鱼类进行同源性比较,发现其与红鳍东方鲀有73%同源性,而与哺乳动物的同源性为50%~65%。凝血酶原类似基因虽然在大黄鱼的各个组织中组成型表达,但是在减毒鳗弧菌免疫的大黄鱼的脾脏和肾脏中表达明显上调,这表明凝血酶可能参与大黄鱼对细菌侵染的免疫应答。     

岱衢族大黄鱼卵母细胞的发生及其在卵巢内组成的研究

本文根据大黄鱼卵巢切片观察,对大黄鱼卵母细胞发生的种的特征、春宗和秋宗大黄鱼的卵巢发育、大黄鱼产卵类型等问题作了深入研究。同时对鱼类滤泡细胞的来源、功能以及退化等问题进行了初步探讨。     

鲤鱼竖鳞病的流行病学和病原学的研究

对发生在山东境内的鲤鱼竖鳞病的流行情况和病症进行了调查和描述，采用病毒学和人工感染方法，分离和确定了该病的病原体为豚鼠气单胞菌，为该病的预防和治疗提供了重要的依据。     

网箱养殖大黄鱼弧菌病研究

1999年夏季,福建省宁德北斗都网箱养殖大黄鱼发生大面积死亡,从病鱼体内分离出两株细菌：ND-01和ND-02,人工感染试验证实这两株菌皆为大黄鱼的病原菌,经鉴定,菌株ND-01为溶藻弧菌,菌株ND-02为副溶血弧菌,51种药物的药敏试验表明;青霉素G、万古霉素等19种药物对ND-01没有抗菌作用,青霉素G、头孢拉定等10种药物对ND-02没有抗菌作用;ND-01对氯霉素、氟派酸等9种药物敏感,而ND-02则对氟派酸、氟嗪酸等10种药物敏感。     

大黄鱼与黄姑鱼杂交F_1及其双亲的核型分析

研究了大黄鱼与黄姑鱼正反交F1原肠早期胚胎细胞及其亲本头肾细胞的染色体核型,为深入剖析大黄鱼与黄姑鱼杂交后代的基因组构成提供了细胞遗传学证据.大黄鱼与黄姑鱼染色体组均含有48条端部着丝粒染色体,染色体组型公式均为2n=48 t,染色体臂数均为NF=48,组内染色体长度分布连续.两亲本物种间核型很相似,未找到鉴别两物种的细胞遗传标志.正反交F1原肠期胚胎细胞的染色体众数也均为48,均可较好地配为24对.结合前期AFLP分析结果可以推断,正反交胚胎细胞均同时含有一个大黄鱼染色体组和一个黄姑鱼染色体组.此外,杂交F1中的非整倍体比例与两亲本没有明显区别,初步表明杂交胚胎细胞未发生明显的染色体丢失.在黄姑鱼♀与大黄鱼♂杂交F1中出现4对非t-染色体,原因尚待查明.     

鸡脂肪肝综合征的诊断与防治

在韶关郊区某些鸡场,经常发生体质较好的内鸡和产蛋鸡内脏出血后死亡,经流行病学调查和病理剖检,确诊为鸡脂肪肝综合征,通过药物治疗。取得了较好的效果,鸡群死亡率得到了有效控制。     

舟山渔场大黄鱼资源枯竭原因及保护和增殖对策

舟山渔场曾以盛产大黄鱼等四大海产闻名，但由于捕捞过度等多种原因种上亲体保护不力，致使大黄鱼资源现近于枯竭，随着人类资源保护意识的增强，尤其是大黄鱼人工育苗 技术的突破以及相关科技的发展，只要我们合理保护、科学增殖，恢复昔日大黄鱼等资源完全可能。     

大黄鱼群体遗传多样性分析及耐低温性状相关微卫星标记的筛选

耐低温性状是鱼类一种重要的经济性状。为进一步探索大黄鱼耐低温性状,本研究采用13个大黄鱼微卫星标记,以岱衢洋大黄鱼低温耐受组和正常对照组2个F2代群体各50个个体为研究对象,分析了群体耐低温性状的遗传差异。结果显示:13个微卫星标记位点在2个岱衢洋大黄鱼群体中共检测到109个等位基因,观测等位基因85个,平均有效等位基因6.49个,观测杂合度0.89,平均期望杂合度0.85,2个群体的平均多态信息含量值为0.81,全部为高度多态,表明13个微卫星位点在所选育的岱衢洋大黄鱼群体中均表现出较高的多态性,群体的遗传多样性比较丰富,可以作为良好的育种材料。耐低温性状相关微卫星标记的研究显示,标记LYC0015在两组样品中共扩增出5个等位基因(片段大小分别为112、110、108、106和104 bp),其中LYC0015112bp等位基因在低温耐受组的出现频率达48%,而在正常对照组中的频率为零,表明该等位基因对岱衢洋大黄鱼温度特性较为敏感,可能与某种耐低温基因存在一定的连锁关系,这一结果可以岱衢洋大黄鱼今后耐低温群体的选育研究提供基础资料。