CD305分子在类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中的表达

目的：研究CD305分子在类风湿关节炎滑膜中的表达。方法：通过免疫组织化学染色方法分别检测CD305分子在类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）、骨性关节炎（Osteoarthritis,OA）和正常创伤患者滑膜中的分布规律。结果：在RA组,CD305分子在所有患者滑膜组织中均有表达。在OA组,CD305分子在部分患者滑膜组织中表达。而在正常患者中,CD305分子在大部分滑膜组织中不表达,仅在部分样本边缘处有少量表达。结论：CD305分子在RA患者滑膜组织中表达高于正常创伤患者,且主要在里衬层（lining layer）滑膜成纤维细胞(fibroblast-like synoviocytes, FLS) 上高表达。     

唾液乳杆菌在类风湿性关节炎疾病进展中的作用

目的 探讨唾液乳杆菌在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)发病中的作用及其机制.方法 选取32只SPF级雄性SD大鼠，将大鼠分为健康对照组、CIA模型组(胶原诱导型(collagen-induced arthritis, CIA)大鼠模型)、唾液乳杆菌干预组、甲氨蝶呤组，每组各8只；观察大鼠外观形态，行CIA评分、足跖容积测量及HE染色，应用宏基因检测乳杆菌种类及丰富度.结果 与模型组相比，唾液乳杆菌干预可明显改善RA大鼠组织病理状态，减低关节炎严重程度，改善关节肿胀；与模型组相比，唾液乳杆菌干预组和甲氨蝶呤组的相似度、丰富度(S)、均匀度(E)和Shannon-Wiener指数(H)均显著升高.结论 唾液乳杆菌对类风湿性关节炎可能有一定的治疗效果和预防作用，可为类风湿性关节炎的治疗提供新思路.     

大鼠胶原诱导性关节炎早期外周血TNF-α与性激素水平的动态观察及相关性研究

同步观察大鼠胶原诱导性关节炎早期血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与性激素水平的变化,探讨TNF-α和性激素在类风湿关节炎(RA)发病中的作用及其相关性。用Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂诱导SD大鼠胶原性关节炎(CIA),检测CIA大鼠不同时间点的血浆TNF-α、雌二醇和睾酮,同时观察其发病时间、滑膜新生血管形成、关节炎指数评分。随着CIA免疫时间的延长,滑膜轻度增厚,滑膜新生血管开始增多,关节炎指数评分渐增加,TNF-α含量也升高,睾酮水平下降,雌二醇水平无明显变化;TNF-α含量与睾酮水平呈负相关关系(r=-0.364,P<0.05),血浆TNF-α含量与雌二醇水平无明显相关关系(r=-0.209,P>0.05)。TNF-α在RA炎症反应的细胞因子网络中起重要作用,性激素与RA的发病也有密切关系,雄激素是天然的抗炎激素,雌激素的作用可能与其浓度有关。     

榼藤对牛Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎大鼠的治疗作用研究

研究榼藤提取物对牛Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠模型的治疗作用.通过牛Ⅱ型胶原与弗氏佐剂来诱导大鼠CIA模型,建模期间通过体征观察和足趾肿胀度评分来判定建模是否成功.将造模成功的大鼠随机分为模型组,榼藤提取物低(93.75 mg/kg)、中(187.50...     

一种快速取大鼠膝关节滑膜的方法

目的 建立一种较传统方法更为快速可行地获取大鼠膝关节滑膜组织的方法。方法 通过查阅文献了解取大鼠膝关节滑膜组织传统方法,并查阅大量大鼠膝关节解剖图谱,在实验中随机将60只造模成功的佐剂性关节炎实验大鼠分成两个小组。30只大鼠采用传统方法取大鼠膝关节滑膜组织,另外30只大鼠采用新方法取大鼠膝关节滑膜组织。结果 传统方法30只大鼠中23只取出较为完整的滑膜组织。新方法30只大鼠全部完整取出膝关节滑膜组织;传统方法平均取一只大鼠单侧膝关节滑膜组织耗时为(15.26±3.41)min,新方法平均每只耗时(10.12±2.34)min,两者比较有显著差异(P<0.01)。结论 新方法较传统方法能更为快速可行地取出大鼠膝关节滑膜组织。     

胚胎大鼠肺成纤维细胞的体外培养

目的:探讨胚胎大鼠肺成纤维细胞的体外培养条件.方法:采用胶原酶消化19d胎鼠肺组织块,经差速离心和反复贴壁法,分离、纯化肺成纤维细胞后采用加胎牛血清的DMEM培养液,进行细胞培养.用波形蛋白免疫细胞化学染色对所分离的细胞进行鉴定.结果:细胞培养24h后有一定量细胞贴壁,48h后贴壁细胞开始生长.结论:该实验方法可以成功地培养大鼠胚胎肺成纤维细胞.     

单关节类风湿性关节炎滑膜组织中uPA、uPAR、PAI-1蛋白表达及意义

为探讨尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,uPA)及其受体(urokinase-type plas-minogen activator receptor,uPAR)、纤溶酶原激活物抑制剂(plasminogen activator inhibitor,PAI-1)在单关节发病类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的表达。采用免疫组化方法检测13例单关节发病RA、19例典型RA和20例正常滑膜组织中uPAu、PAR、PAI-1蛋白表达情况。结果显示:13例单关节RA滑膜组织中uPA、u PAR、PAI-1阳性表达主要分布在滑膜衬里细胞、滑膜下层单核细胞及血管内皮细胞,阳性表达部位与典型RA相同,但表达强度明显低于典型RA(P<0.05)。与正常滑膜组织相比,单关节RA滑膜中uPA、uPAR、PAI-1蛋白表达明显增高(P<0.05)。由此可知:单关节RA滑膜组织中uPA、uPAR、PAI-1表达明显低于典型RA滑膜组织,可能与单关节RA为典型RA病程早期阶段,滑膜中uPA、uPAR、PAI-1蛋白尚处于低水平表达阶段有关。     

厚藤提取物对胶原诱导关节炎模型大鼠的治疗作用研究

为探究厚藤(Ipomoea pes-caprae)提取物对胶原诱导关节炎(Collagen-induced Arthritis,CIA)模型大鼠的治疗作用,本研究采用牛Ⅱ型胶原诱导建立CIA大鼠模型,观察厚藤提取物高、中、低剂量组(2.2712,1.1356,0.5678 g/kg)对CIA大鼠踝关节肿胀、足跖肿胀、关...     

骨性关节炎滑膜醛缩酶及烯醇酶的差异表达

通过分析膝关节骨性关节炎患者及对照受试者滑膜中醛缩酶及烯醇酶的差异蛋白表达,为骨性关节炎的发病机理研究提供新的思路.获取10名膝关节骨性关节炎患者(实验组)和同期10名对照受试人员(对照组)膝关节滑膜,二维凝胶电泳技术分离蛋白质,并采用基质辅助激光解析质谱技术鉴定差异表达蛋白质.结果显示,骨性关节炎组和对照组滑膜相比,醛缩酶及烯醇酶均仅存于骨性关节炎组中,而对照组中并未出现这两种蛋白.结果表明,醛缩酶、烯醇酶仅在实验组中表达,可通过调节细胞能量活动参与骨性关节炎的发病过程.     

1,25双羟维生素D3对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

探讨1,25双羟维生素D3对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响.以体外培养的人瘢痕成纤维细胞为实验模型,将1,25双羟维生素D31nmol/L、0.1nmol/L、0.01nmol/L加入细胞培养液中进行干预并与乙醇对照组比较,用乳酸脱氢酶实验检测药物的细胞毒性,并通过MTT实验和羟脯氨酸测定实验分别检测药物对成纤维细胞增殖活性和胶原合成的影响.0.1nmol/L、1nmol/L的1,25双羟维生素D3组对成纤维细胞的生长有抑制作用,与对照组比较差异有显著性(P＜0.01),0.01nmol/L、0.1nmol/L、1nmol/L的1,25双羟维生素D3对瘢痕成纤维细胞胶原合成具有抑制作用(P＜0.01),并呈剂量依赖关系.1,25双羟维生素D3在体外对瘢痕成纤维细胞细胞增殖和胶原合成具有抑制作用.     

组织工程真皮替代物的构建及在创伤修复中的作用

以双层胶原-壳聚糖海绵为支架构建组织工程真皮替代物并研究其在大鼠创伤愈合中的作用.将双层胶原-壳聚糖海绵支架埋植于SD大鼠皮下以考察其组织相容性;将SD大鼠皮肤中分离的成纤维细胞种植在支架上体外构建人工真皮替代物,并将该替代物移植到SD大鼠皮肤缺损处以修复创面.皮下埋植实验显示支架植入早期有炎症反应,但一周后炎症反应逐渐减轻,而且有成纤维细胞和毛细血管的侵入.皮肤移植实验结果显示:术后第7天和第14天实验组创面表皮再生和肉芽组织增生比对照组更快更明显;第14天和第21天实验组创面面积明显小于对照组(p<0.05).因此以双层胶原-壳聚糖海绵为支架构建的组织工程真皮替代物具有良好的生物相容性,并能促进皮肤创面的愈合,可以作为人工真皮替代物用于皮肤缺损的修复.     

小鼠体细胞核移植及ES细胞样集落分离

利用小鼠皮肤成纤维细胞为核供体进行体细胞核移植并从重构胚中分离胚胎干细胞(ES)样集落,以便对体细胞核移植重构胚来源的ES细胞样集落进行研究.结果显示,小鼠皮肤成纤维细胞作为核供体,核移植重构胚激活率为60.48%(254/420),囊胚发育率为6.90%(29/420),6个囊胚中分离出ES细胞样集落,分离率为1.43%(6/420),3个ES细胞样集落能够稳定传代,至第5代时核型正常率分别为77.84%,75.18%,77.20%.分离出的ES细胞样集落具有岛屿状团状隆起结构,碱性磷酸酶染色呈阳性,体外可自发分化成上皮样或梭形细胞.实验证实小鼠唇部皮肤成纤维细胞能够支持体细胞核移植重构胚发育至囊胚,并能分离出可以稳定传代的ES细胞样集落.     

以组织工程技术构建活性双层人工皮肤

用冷冻干燥胶原凝胶方法制备胶原海绵,经戊二醛交联处理,作为活性双层人工皮肤的支架;以幼儿包皮为细胞来源获得真皮成纤维细胞和皮肤角质细胞,体外扩增后作为种子细胞;在胶原海绵上接种成纤维细胞和角质细胞,体外构建活性双层人工皮肤。研究结果表明,人工真皮内的成纤维细胞生长良好,并且有人纤粘连蛋白类生物活性物质存在,活性双层人工皮肤表皮层有类似干天然皮肤表皮层的组织结构。     

大鼠半月板纤维软骨细胞的分离、培养与鉴定

探讨体外大鼠半月板纤维软骨细胞分离培养与鉴定的实验方法,观察不同代次间细胞的形态学特征.手术分离大鼠双膝内外侧半月板,采用胰酶和Ⅱ型胶原酶消化法提取细胞,甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光法鉴定细胞,低糖DMEM完全培养液常规培养.结果表明,原代半月板细胞形态呈多角形,轮廓清晰,8～10d可铺满瓶底;传代后的1～3代细胞,其贴壁及增殖能力加强,生长状态良好;传至4～5代尤其是第5代之后,细胞表型不稳定,密度稀疏,形态以长梭形为主且不规则,清晰度下降,传代周期延长;细胞鉴定结果呈阳性.双酶消化和低糖DMEM完全培养液常规培养可以获得具有良好生物学特性的半月板细胞,第4代之前的半月板细胞可以为运动损伤的组织工程学研究提供种子细胞.     

人视网膜血管内皮细胞的分离与培养

目的探讨人视网膜血管内皮细胞的体外分离和选择性培养方法.方法将人视网膜通过剪碎、匀浆、过筛、胶原酶消化处理后,结合密度梯度离心和物理刮除等分离方法获得较纯的视网膜血管内皮细胞,接种于纤维连接蛋白包被的培养瓶中,并采用含内皮细胞生长因子和肝素的培养基促进内皮细胞贴壁生长,观察细胞生长状况,并应用免疫组化方法进行鉴定.结果培养的细胞成典型的铺路石样生长,Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色为阳性,细胞纯度达98%以上.结论本实验方法简单易行,培养出的人视网膜血管内皮细胞纯度高、生长状态良好,并可稳定传代,为视网膜血管疾病的基础研究提供有效的模型建立方法.     

类风湿关节炎灭活滑膜液单个核细胞对非灭活滑膜液单个核细胞分泌IL-10水平的影响

目的观察类风湿关节炎灭活滑膜液单个核细胞对非灭活滑膜液单个核细胞分泌IL-10水平的影响。方法抽取类风湿关节炎(RA)患者关节液,分离关节液单个核细胞,分为对照组:2×10~6的非灭活单个核细胞,培养条件为37℃,5%CO_2孵育箱培养48h;实验组:细胞数为2×10~6个非灭活单个核细胞与甲醛灭活后的单个核细胞按1:10混合培养.用ELISA法测定培养上清中IL-10的水平.结果实验组较对照组IL-10水平明显升高(P<0.01).结论灭活滑膜液单个核细胞对非灭活滑膜液单个核细胞IL-10分泌有促进作用,提示未经克隆选择的RA滑膜液混合细胞可能具有诱导分泌IL-10CD_4调节性T细胞的生成作用.     

视网膜血管内皮细胞的培养与纯化

目的:探讨人视网膜血管内皮细胞的体外分离和选择性培养方法。方法:将人视网膜通过剪碎、匀浆、过筛、胶原酶消化处理后,结合密度梯度离心和物理刮除等分离方法获得较纯的视网膜血管内皮细胞,接种于纤维连接蛋白包被的培养瓶中,并采用含内皮细胞生长因子和肝素的培养基促进内皮细胞贴壁生长,观察细胞生长状况,并应用免疫组化方法进行鉴定。结果:培养的细胞成典型的铺路石样生长,Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色为阳性,细胞纯度达98%以上。结论:本实验方法简单易行,培养出的人视网膜血管内皮细胞纯度高、生长状态良好,并可稳定传代,为视网膜血管疾病的基础研究提供有效的模型建立方法。     

成年小鼠成纤维细胞体外培养

成年小鼠皮肤成纤维细胞可从尾部取材用组织块培养法进行原代培养,添加血清的M 199(E arle′s)和低糖的DM EM均能较好的满足原代细胞的生长.两种培养液中细胞增殖的速度无明显差异.用0.25%胰蛋白酶消化小鼠尾尖原代培养物,上皮细胞与成纤维细胞有明显的敏感度差别.经控温控时消化传代,可将上皮细胞与成纤维细胞分离纯化.     

牦牛心脏原代成纤维细胞系的建立及鉴定

旨在建立牦牛胚胎心脏原代成纤维细胞系并对其进行鉴定.以牦牛胚胎心脏组织块为研究对象,运用组织块法对其进行分离培养获得原代细胞,使用胰酶消化法对原代细胞进行传代培养,通过MTT法检测细胞增殖活性,利用HE染色法及秋水仙素处理染色体鉴定细胞外形,选取4个成纤维标志性基因TGF-β、FSP-1、S100A4、Vimentin...     

昆明小鼠胚胎成纤维细胞的分离与体外培养

研究了昆明小鼠胚胎成纤维细胞的分离、培养和生长特征,建立了快速、稳定的优质饲养层细胞培养体系.从不同日龄的胎鼠均分离到胚胎成纤维细胞,但最佳分离时间为13.5~14.5d;三种分离原代胚胎成纤维细胞的方法中胰酶消化法效果最好,能在较短的周期内获得大量原代及传代细胞;MEF细胞形态以小梭形为主,呈漩涡状、火焰状生长;增殖速度较快,每1~2d可传一代,按1∶3比例常规传代;5代以内适宜制作饲养层用,5代以后细胞开始变形呈现典型的衰老特征.