果糖-1,6-二磷酸醛缩酶的研究进展

果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(FBA)是糖酵解途径中一种重要的生物酶,可催化底物果糖-1,6-二磷酸裂解为3-磷酸甘油醛和磷酸二羟丙酮或反向的醛醇缩合反应.主要介绍了FBA的分类及其功能,如参与生物体内代谢、充当纤溶酶原结合蛋白、作为宿主细胞粘附结合剂、转录调节因子等,并总结了FBA在抗真菌药物靶点、抗病原体疫苗方面的应用,旨在为后续FBA的深入研究提供基础资料.     

采用络合滴定法测定果糖-1,6-二磷酸一镁中的镁

采用络合滴定法测定果糖-1,6-二磷酸一镁中的镁含量．当样品中游离磷酸盐质量分数小于1．65％时,对测定结果无影响．当样品中游离磷酸盐质量分数大于1．65％时,会使测定的结果偏低．本法可用于果糖-1,6-二磷酸一镁的质量控制。     

1,6-二磷酸果糖治疗充血性心力衰竭疗效及其机理初步探讨

本文报告20例充血性心力衰竭患者,在洋地黄、利尿剂和扩管药综合治疗的基础上,加用1,6-二磷酸果糖(FDP),显示了较好疗效,并对其机理进行初步探讨。     

FDP改善运动疲劳红细胞能量代谢

探索1,6-二磷酸果糖（FDP）在分子水平对蹦床运动员疲劳后红细胞（RBC）能量代谢的影响规律,为运动性疲劳的恢复提供实验研究依据。FDP800mmol／L和0mmol／L分别孵育疲劳后红细胞,分别用细胞化学方法、比色法、高效液相色谱法检测细胞色素氧化酶活力,2,3-二磷酸甘油酸（2,3-DPG）水平,三磷酸腺苷（ATP）、二磷酸腺苷（ADP）、一磷酸腺苷（AMP）含量并计算能荷。FDP处理后红细胞ATP、能荷、细胞色素氧化酶活力和2,3-DPG水平显著增加,ADP和AMP含量显著下降。FDP能够通过增加细胞色素氧化酶活力,提高2,3-DPG水平来改善疲劳红细胞能量供应,缓解运动性疲劳。     

不同浓度乙酸钠对耐乙酸大肠杆菌DA19蛋白质组学的影响

对耐乙酸大肠杆菌DA19在含有不同浓度乙酸钠的氮源限制基本培养基中进行了连续培养,并利用双向凝胶电泳方法分离了稳态时菌体蛋白,再利用质谱方法对表达水平存在差异的蛋白进行了鉴定.结果表明:添加外源乙酸钠使得生物素羧基载体蛋白亚基、天冬氨酸半醛脱氢酶、巯基过氧化物酶、YgiW蛋白、外膜孔蛋白OmpC和假想蛋白等表达水平增加;而50S核糖体蛋白L9、果糖1,6-二磷酸醛缩酶、ATP合成酶α亚基和结合转移蛋白Tra T表达水平减低.由此推测,生物素羧基载体蛋白亚基、天冬氨酸-β-半醛脱氢酶、巯基过氧化物酶、YgiW蛋白和外膜孔蛋白OmpC等与大肠杆菌DA19的乙酸耐受力提高相关.     

1,6-二磷酸果糖镁静脉给药的急性毒性

目的 :评估静脉给药时 1,6 -二磷酸果糖镁 (fructose 1,6diphosphatemagnesium ,FDP -Mg)的急性毒性及最大耐受量。方法 :利用序贯法测定静脉注射和静脉恒速给药时FDP -Mg的LD50 及LD1。结果 :FDP -Mg静脉注射对小鼠和大鼠的LD50 及其 95 %可信限分别为 2 0 6 76mg·kg- 1(186 6 9～ 2 2 6 83mg·kg- 1)和 2 0 1 74mg·kg- 1(184 0 3～ 2 19 4 4mg·kg- 1) ,静脉恒速给药对大鼠的LD50 及其 95 %可信限为 5 4mg·(kg·min) - 1[4 90～ 6 0 3mg·(kg·min) - 1],LD1为 3 76mg·(kg·min) - 1。结论 :FDP -Mg静脉注射的毒性较大 ,静脉恒速给药相对较为安全。     

组氨酸残基在焦磷酸:果糖-6-磷酸1-磷酸转移酶催化功能中的作用

应用焦碳酸二乙酯(DEPC)对焦磷酸:果糖-6-磷酸1-磷酸转移酶(PFP)进行化学修饰时,酶的活性迅速丧失,呈拟一级动力学反应.羟胺的复活作用及修饰后酶的紫外光谱变化表明,酶失活的原因是DEPC与酶的组氨酸残基形成了乙酯基组氨酸复合物.失活动力学表明,酶的活性位点结合1分子DEPC即丧失活性.活性位点的组氨酸残基的完整性是酶活性的必要条件之一.底物F6P、产物果糖1,6-二磷酸(FBP)、P i及激活剂果糖2,6-二磷酸(F2,6BP)均可保护酶免被DEPC失活,底物PP i却没有保护作用.组氨酸残基在酶的催化功能中可能与F6P,FBP及P i的结合过程有关,而与PP i无关.     

长白山红景天配伍FDP抗疲劳作用实验研究

目的：实验研究长白山红景天配伍1,6-二磷酸果糖（FDP）抗疲劳作用,探讨其抗疲劳作用机制,寻找最佳配伍剂量,为研发长白山红景天配伍FDP抗疲劳口服制剂提供动物实验依据.方法：试验采用不同剂量长白山红景天和FDP及其配伍剂量灌胃小鼠,通过对力竭游泳时间、血乳酸含量、肝糖原含量、SOD活力、乳酸脱氢酶活力等的测定,观察红景天及其配伍FDP抗疲劳效果,并探讨其可能的抗疲劳机制.结果：长白山红景天10g/kg、FDP 200mg/kg剂量组效果显著.析因分析得出在配伍剂量下长白山红景天与FDP存在交互关系,配伍剂量组强于单剂量组,更强于对照组.结论：长白山红景天与FDP配伍可显著增强乳酸脱氢酶活力,减少无氧运动后乳酸的堆积,提高机体对抗疲劳的能力;显著提高运动后小鼠肝糖原水平,增加有氧运动糖份供给;配伍还能够提高超氧化物歧化酶活力,加快清除自由基,增强保护组织细胞生物膜作用,延缓疲劳发生,口服长白山红景天配伍FDP是安全有效的抗疲劳途径.     

1,6-二磷酸果糖溶液基本性质

研究了1,6-二磷酸果糖溶液在不同酒精浓度和pH下的溶解度以及不同1,6-二磷酸果糖溶液的浓度、温度及pH下的粘度,并给出了浓度对粘度的关联式.实验发现,溶液的温度和pH对溶液的粘度有很大的影响,因此升高溶液的温度和降低溶液的pH有利于改善溶液的传质状况和结晶条件,为1,6-二磷酸果糖的结晶新体系的研究提供依据.     

1,6-二磷酸果糖镁中镁的药代动力学

目的 :测定静脉注射 1,6 -二磷酸果糖镁 (fructose 1,6diphosphatemagnesium ,FDP -Mg)中镁的药代动力学特点。方法 :用原子吸收光谱法测定FDP -Mg给药前后家兔血浆总镁的变化情况 ,利用 3P87程序判断它们的房室模型类型 ,并计算相关的药代动力学参数。结果 :FDP -Mg的房室模型为二室模型 ;A、B、α、β分别为 1 2 2mmol·L- 1、0 5 2mmol·L- 1、0 2 9min- 1和 0 0 0 9min- 1。FDP -Mg中Mg的分布容积Vd、Vc、Vp 和Vss均小于 0 2L·kg- 1,分布速率常数k12 、k2 1、k10 分别为0 175、0 0 91、0 0 2 8min- 1,t1/2α、t1/2 β分别为 2 4 2、77 1min ,清除率 (Cl)为 1 7mL·(kg·min) - 1。结论 :FDP -Mg中的Mg的房室模型为二室模型 ,在体内分布迅速 ,在周边室停留的时间相对较长 ,对组织的亲和力较弱 ,药物消除相对较快。     

NaCl诱导表达的盐藻果糖-1,6-二磷酸醛缩酶基因克隆及原核表达

通过RACE技术克隆到盐藻（Dunaliella salina Teod.)果糖－1，6－二磷酸醛缩酶（DsALDP)的全长cDNA,对其序列分析及在GeneBank中进行同源搜索，发现DsALDP基因属于果糖－1，6－二磷酸醛酶基因家族，其与植物叶绿体果糖－1，6－二磷酸酯缩酶（AldP)基因的一致性为73％－66％。Northern杂交结果及醛缩酶活性分析均表明它角为在盐诱导下特异表达。将DsALDP cDNA构建到pET32a载体上，转入E.coli BL21进行表达分析。IPTG诱导后可以检测到－62ku基因产物大量表达。经不同浓度NaCl处理，表达DsALDP基因产物的细菌耐盐性明显高于对照组。     

绿色糖单孢菌麦芽糖α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中的高效分泌表达

【目的】构建高产麦芽糖α-淀粉酶的工程菌株并实现高效分泌表达。【方法】PCR扩增麦芽糖α-淀粉酶基因sva,再与大肠杆菌-枯草芽孢杆菌麦芽糖诱导型穿梭载体pHCMCO4-Pglv连接,构建重组质粒pHCMCO4-Pglv-sva并转入枯草芽孢杆菌进行表达,对重组酶进行SDS-PAGE分析,然后对重组菌株的生长及发酵条件进行优化。【结果】成功构建重组质粒pHCMCO4-Pglv-sva并在枯草芽孢杆菌中实现分泌表达,SDS-PAGE分析发现,在55kDa处得到特异性蛋白条带。单因素试验结果显示,重组菌的最适诱导温度为35℃,最适接种量为4%(V/V),最适装液量为30mL。正交实验结果显示,重组菌的最佳发酵条件组合是诱导温度37℃、接种量5%(V/V)、装液量25mL,在此条件下发酵液粗酶活力达到257.3698U/mL。装液量对重组菌的产酶量影响显著。【结论】成功构建能高效分泌表达麦芽糖α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌工程菌株,经发酵条件优化后,重组酶产量显著提高10倍左右。     

2种芽孢杆菌属细菌对洋葱根系遭受铜胁迫的缓解作用

为了探究芽孢杆菌属细菌对洋葱遭受重金属铜胁迫的缓解作用,分别测试解淀粉芽孢杆菌HM618、枯草芽孢杆菌77、解淀粉芽孢杆菌HM618+枯草芽孢杆菌77这3种发酵液作用下,遭受铜胁迫的洋葱根系生长、生理活性以及根尖细胞有丝分裂情况.结果表明,铜胁迫下,洋葱的根长大幅度下降,根系相对电导率和丙二醛含量急剧增加,根尖细胞有丝分裂指数显著降低,畸变率增加.单独添加解淀粉芽孢杆菌发酵液或枯草芽孢杆菌发酵液时,铜胁迫下的洋葱根长增加,相对电导率和丙二醛含量下降,有丝分裂指数升高,畸变率下降,但2种细菌发酵液联合使用时却丝毫不能缓解洋葱遭受的铜胁迫. 2种细菌中,枯草芽孢杆菌对洋葱铜胁迫的缓解效果显著优于解淀粉芽孢杆菌.     

萌发中食松幼苗贮藏物质的利用和变化

采用电镜技术观察了黑暗中萌发中食松子叶和提供营养的雌配子体中脂肪体和与脂肪利用有关的乙醛酸循环体的变化,测量比较了子叶、下胚轴、根的长度、干重、淀粉含量,以及果糖1,6二磷酸酶的活性变化,对贮藏物质脂类、淀粉的利用及与生长的关系进行了分析.雌配子体中脂肪的利用快于子叶,淀粉作为临时贮藏物质在子叶和下胚轴中大量积累,根中极少,淀粉/干重比表明,子叶中淀粉比重大于下胚轴,这个由上向下的顺序变化与雌配子体由下向上,最后在子叶尖端脱离幼苗的变化暗示了贮藏物质通过接触从雌配子体传递到幼苗.在子叶中细胞质和质体果糖1,6二磷酸酶的活性都明显高于下胚轴,根和未萌发胚中细胞质和质体果糖1,6二磷酸酶的活性极低,表明子叶和下胚轴进行活跃的蔗糖和淀粉合成活动.     

枯草芽孢杆菌AS1.398中性蛋白酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的高效表达

将编码枯草芽孢杆菌AS1.398 的中性蛋白酶功能区和包含前导区序列(“pro”序列)在内的全长基因克隆到酵母整合型质粒pPIC9K中,电转化His4 缺陷型巴斯德毕赤酵母SMD1168,通过MD-G418平板、PCR方法筛选和鉴定重组子。重组子发酵液经SDS-PAGE分析和酶活测定表明,枯草芽孢杆菌AS1.398的全长中性蛋白酶基因在毕赤酵母中获得了高效表达,表达产物分泌至培养基中,分子量约为43kD。经甲醇诱导培养后,发酵液中的中性蛋白酶活力达20000 U/mL。     

1,6-二磷酸果糖对缺氧缺血性心、脑损害的保护作用(综述)

1，6-二磷酸果糖(FDP)是存在于一切活细胞内的糖代谢中间产物。细胞缺氧时，外源性FDP可透过细胞膜进入到细胞内直接供能，并可阻止Ca^2 内流，减少氧自由基的产生、稳定细胞膜，及减少细胞凋亡。多数研究认为FDP对缺氧缺血引起的心、脑损伤具有保护作用，但也有不同的观点。因此有必要进一步临床验证，为FDP在这方面的应用提供有价值的理论依据。     

苯腙类果糖-1,6-二磷酸醛缩酶新型抑制剂的合成及其抗真菌活性研究(英文)

白色念珠菌果糖-1,6-二磷酸醛缩酶 (CaFBA-II)被认为是开发新型抗真菌药物的一个潜在新靶标.本课题组前期的研究中报道了β-酰腙-α, γ-二羰基化合物对CaFBA-II具有一定的抑制活性.在本研究中,几类苯腙类化合物被发现可以高效抑制CaFBA-II.实验结果显示,R2位上引入NO2有利于提高化合物的酶体活性,尤其是同时在R3位置引入磺酸基后,化合物2g的CaFBA-II抑制活性达到了亚纳摩尔级别(IC50＝200 nmol·L－1).以化合物2g为代表,运用分子动力学模拟(MD)和DOX方法,对化合物2g与CaFBA-II的结合模式也进行了系统研究.值得注意的是,本研究中设计的大多数苯腙类化合物都对白色念珠菌具有一定的抗真菌活性(MIC80＝16～64 μg · mL－1).因而表明以苯腙类化合物为药物先导结构进行优化改造是设计开发新型抗真菌药物的一条可行途径.     

枯草芽孢杆菌2-3-2的抗线虫作用和产酶条件与酶特性

为了研究枯草芽孢杆菌2-3-2抗线虫作用与几丁质酶活的关系,对几丁质酶的产酶条件进行优化并探讨酶的特性,通过盆栽试验测定了抗线虫效果,用DNS定糖法测定了几丁质酶活力.实验结果表明:枯草芽孢杆菌2-3-2对南方根结线虫防治效果显著,其抗线虫作用与几丁质酶活性呈正相关.几丁质酶产酶培养基组成为(g/L):胶体几丁质65,酵母膏1,葡萄糖5,KH2PO40.7,K2HPO40.5,MgSO4·7H2O 0.5,FeSO40.01,NaCl 0.5,微量盐1mL/L;起始pH 7.0,温度为30℃、培养时间为72h.与优化前相比,酶活性提高了1.59倍,达到35.17×10-10 mol/s.枯草芽孢杆菌2-3-2几丁质酶最适反应温度为40℃,最适pH为7.0;温度高于50℃及碱性条件下酶活力下降.     

中温α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中的整合及高效表达

从中温α-淀粉酶生产菌株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)264中克隆得到中温α-淀粉酶基因(amy L)并构建了重组表达质粒p AX01-amy L。该质粒转化枯草芽孢杆菌264后利用同源重组机制将由木糖操纵子引导的amy L表达盒整合入枯草芽孢杆菌染色体的lac A位点,以增加中温α-淀粉酶基因的拷贝数。经淀粉平板产酶初筛及Southern blot鉴定,成功分离获得了可高效分泌表达中温α-淀粉酶的基因工程菌ZHWY。该菌株在摇瓶发酵75 h后α-淀粉酶酶活可达到730 U/m L,比酶活为156 U/mg总蛋白,与原始菌株264相比提高了70%,且继代过程中表达水平稳定。在5 L发酵罐中,枯草芽孢杆菌ZHWY发酵所产中温α-淀粉酶酶活最高达到1450 U/m L,具有良好的工业应用前景。     

金属离子对尖孢镰刀菌发酵液中果胶酶活性的影响

采用发酵产酶法脱脐橙囊衣过程中,为提高酶活在培养基中添加不同金属离子,接种尖孢镰刀菌经摇瓶发酵后,测定发酵液中果胶酶系三个组分酶(聚半乳糖醛酸酶PG、果胶酸裂解酶PL、果胶酯酶PE)酶活性,探讨不同金属离子种类、添加量对果胶酶活性的影响.实验结果表明:浓度为0.06%Mg~(2+)、0.04%Fe~(2+)提高PG酶活力达205.62 U/m L、297.33 U/m L,分别比对照组提高1.07倍、1.45倍;Fe~(2+)浓度为0.08%时,PL酶活力达到283.31 U/m L,是对照组的2.83倍,Fe~(2+)对PL酶活力起促进作用;Fe~(2+)、Zn~(2+)对PE酶活力的影响有显著的促进作用,浓度为0.06%时达到最大值255.67 U/m L、200.68 U/m L,是对照组的2.40倍和1.66倍.本实验结果对优化橙汁胞生产工艺,实现安全高效低成本去除柑橘囊衣提供参考.