锰胁迫对甘蓝型油菜Brassica napus L.种子活力和幼苗抗氧化系统的影响

用不同质量分数的锰溶液(0.2%,0.4%,0.8%和1.2%Mn2+)处理甘蓝型胜利油菜Brassica napuscv.Shengli,研究锰对其种子活力、幼苗细胞膜透性、脂质过氧化及抗氧化剂的影响.结果表明:锰胁迫降低了种子活力、幼苗抗坏血酸(Vc)质量分数、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性,破坏了细胞膜的完整性,并使丙二醛(MDA)质量分数、脯氨酸(Pro)质量分数和过氧化物酶(POD)活性增加.     

甘蓝型油菜(Brassica napus L.)矮秆突变位点的RAPD标记

甘蓝型油菜(Brassica napus L.)是世界主要油料作物,在我国农村产业结构调整与提高城乡人民生活水平方面具有重要意义,目前大规模种植的油菜均为高秆品种,在结实中后期容易产生倒伏,影响籽粒充实,并易于病害发生,造成的减产达20％～30％,严重的甚至会颗粒无收,对油菜生产的发展影响巨大。     

甘蓝型油菜(Brassica napus)中一个未知功能蛋白基因的cDNA克隆

随着现代分子生物学的发展,许多物种,特别是拟南芥等模式生物的整个基因组序列以及其中一部分基因的功能已经比较清楚,但仍然存在大量功能未知的基因有待进一步研究,从已知片段出发,利用cDNA末端快速扩增（rapid amplification of cDNA ends,RACE）技术钓取基因全长,并结合生物信息学技术预测蛋白质结构,是研究未知基因功能的一种重要手段．     

幼叶黄化油菜(Brassica napus L.)突变体Cr3529叶绿体超微结构观察

对油菜Cr3529叶片细胞中的叶绿体数目及结构进行了显微及亚显微观察。结果显示，突变与野生型细胞中叶绿体的数目没有显著性的差异，但叶绿体的结构有较大的差异，较之正常油菜，Cr3529油菜叶绿体基粒类囊体数较少，基质类囊体数较多，而且，在基粒类囊体中基粒片层数也较少，大部分基粒只有几个片层，基粒的平均片层数为5．46，约为野生型的一半，作者认为，较少的基粒片层数可能是引起Cr3529油菜叶绿素含量减少，并最终导致植株显著减产的重要原因。     

甘蓝型油菜胚柄多胚突变体(Brassica napus twn-119)的细胞胚胎学研究

多胚突变体B.napus twn-119是从甘蓝型油菜品种中油119中发现的.经过连续套袋自交选育,目前已使多胚频率提高到34%.所获得的多胚种子萌发后,92%的种子中萌发出各自独立的双苗,6%种子中萌发出独立三苗,2%的种子中得到3个以上独立苗.偶尔可观察到生长的幼苗具有三片、四片子叶、幼苗的茎发生部分结合及子叶上具轴状附属物等异常现象.对多胚突变体的胚胎学研究表明,由顶细胞发育而来的初生胚体正常发育成胚,部分胚柄细胞转变成为具有强烈分裂能力的细胞而不是进入程序性死亡.这些特殊的胚柄细胞具有胚胎发生能力,胚柄中可以观察到多个球形原胚形成,多个原胚由宿存的胚柄细胞连接成一串.如果两原胚之间连接的胚柄细胞很少或没有,两个胚体在发育过程中会发生部分融合.幼苗根尖染色体数目的检查也证明多胚幼苗都具有正常油菜的染色体数目(2n=38).     

部分甘蓝型油菜双低品种(系)的遗传多样性评估

以46个甘蓝型油菜双低品种(系)作为研究材料，利用37种多态性丰富的随机引物进行了RAPD分析．结果表明：所有研究材料分为3大类，所得聚类结果与系统聚类基本一致，说明利用RAPD标记可以进行聚类分析；从聚类结果来看，材料26(谷城168)与其它材料差异很大，可能具有较大的利用价值；另外，大部分参试材料差异并不明显，说明培育更多的优良自交系仍是油菜双低育种工作的重要内容．     

甘蓝型油菜细胞核雄性不育系“79.7”的遗传及应用研究

对雄性核不育油菜“79.7”作了遗传和应用研究。结果表明,“79.7”雄性不育油菜的不育特性是由两对隐性重叠基因控制的,甘兰型油菜可作它的恢复源。将“79.7”核不育油菜转育成新的低芥、双低及双低黄籽两用系.用低芥两用系组配筛选育成的优质杂交种“蜀杂1号”已在生产上大面积推广使用。     

甘蓝型油菜快速再生的研究

本文研究了器官、培养基、温度、硝酸银和植物激素等因素对甘蓝型油菜器官分化的影响，摸索出油菜再生的理想条件，并且从油菜苗期真叶、子叶、下胚轴、根和带子叶叶柄成功地再生出油菜植株。     

激素对甘蓝型油菜(Brassica napus L)矮化突变体幼苗生长及内源GA3含量的影响

以甘蓝型油菜矮化突变体“DDF-1”为材料,研究了赤霉素（GA3）、生长素（IAA）和油菜素内酯（BR）3种激素对突变体幼苗的影响,并用石蜡切片观察其细胞形态,用酶联免疫吸附技术(ELISA) 检测下胚轴内源激素GA3含量.结果表明,外加一定浓度的GA3（7 mg/L）对矮化突变体“DDF-1”的下胚轴伸长作用显著,但不能使之恢复到野生型的长度;萌发早期,BR有明显的促进伸长作用,萌发后期效果不明显;突变体对IAA敏感性较弱.三种激素交互作用对矮秆下胚轴伸长的影响也不显著.施加外源GA3的矮化突变体“DD     

甘蓝型油菜矮化突变体的茎秆发育转录组分析

甘蓝型油菜矮化突变体"NDF-1"是从高秆油菜"3529"理化诱变群体中分离的矮化突变体,它的株高只有高秆亲本的1/3,是一个优良的甘蓝型油菜矮化资源.本文应用RNA-Seq测序技术分析了"NDF-1"茎开始伸长的抽薹期和花期转录组,为深入了解油菜茎秆发育机理提供基因组层面的参考.抽薹期和花期的测序数据通过筛选得到了4.55亿条质量合格的clean reads.经过对高质量序列的组装注释,筛选得到"NDF-1"和"3529"间的2147条差异表达基因(DEGs).选择其中的20个差异表达基因进行了荧光定量PCR验证.通过GO和KEGG分析,发现"NDF-1"的矮化与赤霉素、生长素和油菜素内酯相关,细胞伸长异常和细胞壁的不正常形成也影响"NDF-1"的茎秆发育.从差异基因中筛选出与植物矮化性状相关的基因,为利用矮化基因改善性状和矮化机理的研究和提供了更多信息.     

Al3+对油菜幼苗生长影响的研究

研究了不同的基本培养基和不同的Al3+ 浓度对油菜幼苗根的长度和全株重量的影响 .不同的Al3 + 浓度对根的绝对长度影响极显著 ,对根的相对长度、幼苗全株绝对重量和相对重量影响不显著 ;在AlCl3溶液中添加CaCl2 对根的相对长度影响极为显著 ,对根的绝对长度、全株绝对重量和相对重量影响不显著 ;在AlCl3 溶液中添加 1 2MS大量元素和微量元素对根的绝对长度、相对长度、全株绝对重量和相对重量影响极为显著 ;不同的基本培养基和不同的Al3+ 浓度间的交互作用不显著 .     

甘蓝型杂交油菜"蜀杂9号"种子纯度的RAPD鉴定

通过50个随机引物对“蜀杂9号”亲本进行RAPD扩增,选出了两个能在父、母本间产生多态性扩增的随机引物S18和S31,在杂种F,代中验证了它们的特异性和稳定性,证明随机引物S18和S31能分别在F1代中稳定扩增出父本和母本的特异标记片段S18750与S31550．对该引物的RAPD-PCR的反应体系优化后,对“蜀杂9号”父、母本和杂种F1代的单株进行了随机检测,结果表明这两个RAPD标记配合使用能稳定可靠地鉴定甘蓝型杂交油菜“蜀杂9号”种子的纯度．     

表达雪花莲外源凝集素基因的油菜转基因植株的获得

利用农杆菌素LBA4404（pCAMBIA3300RG)转化优良甘蓝型油菜恢复系W723的下胚轴节段.pCAM-BIA3300RG含有Rssl启动子引导的雪花莲外源凝集素基因（gna）和CaMV-35S启动子引导的除草剂抗性基因（bar）。经过两轮除草剂（2.5mg/L bialaphos）筛选（两周/轮）,除草剂抗性再生芽被传入生根培养基中生根,对根系旺盛生长的植株中所含gna基因进行PCR分析,PCR分析证实了这些植株确为转基因植株,利用Western印迹法对随机选择的5株含gna基因的转基因植株的分析发现,其中4株表达了gna基因。目前正对这些表达gna基因的转基因植株进行后代遗传分离分析。     

甘蓝型油菜BnbHLH92基因的克隆与表达分析

为研究甘蓝型油菜bHLH转录因子的功能,采用同源克隆技术从甘蓝型油菜中克隆了5个BnbHLH92基因全长cDNA序列,分别命名为BnbHLH92-1、BnbHLH92-2、BnbHLH92-3、BnbHLH92-4、BnbHLH92-5,其编码区长度分别为738,657,684,741,717bp.qRT-PCR实验表明,除BnbHLH92-1外,其它的BnbHLH92基因主要在抽薹期和花期的根中表达,BnbHLH92-1主要在抽薹期和花期的根以及二叶一心期的叶中表达.非生物胁迫显著影响BnbHLH92基因的表达,使其表达量升高.低温胁迫下,BnbHLH92基因分别在胁迫后4、6、6、6、6 h表达量达最高.高温胁迫下,5个BnbHLH92基因分别在胁迫后2、6、6、8、4 h表达量达最高.盐胁迫下,BnbHLH92基因分别在胁迫后6、6、24、24、24 h表达量达最高.在ABA诱导下BnbHLH92基因表达量也有不同程度的增加,分析发现BnbHLH92基因的启动子序列上存在ABA响应元件(ABRE).     

甘蓝型油菜独脚金内酯相关基因的克隆与表达分析

独脚金内酯(strigolactones,SLs)是一类新鉴定的植物激素,参与抑制茎分枝.采用同源克隆技术自甘蓝型油菜中得到了三个SLs相关基因,分别命名为BnMAX4,BnMAX1和BnD14,其CDS各长1707,1593,804bp,推测编码的蛋白质功能分别为β-类胡萝卜素加氧酶,细胞色素P450,α/β水解酶.RT-qPCR表达分析显示在野生型甘蓝型油菜二叶及四叶一心期的各组织器官中,BnMAX4主要在二叶一心期的根中表达;BnMAX1无明显表达优势组织;BnD14在二叶一心期的叶中高表达.旱胁迫及盐胁迫处理时BnMAX4的表达趋势为骤降;BnMAX1旱胁迫处理时表达量降低,盐胁迫处理时先下降后上升,9h后又下降;BnD14旱胁迫处理时在3h与12h各有两个表达高点,盐胁迫处理时在3h表达量最高.     

拟南芥抗油菜黑胫病突变基因的遗传分析及染色体定位

以拟南芥黑胫病感病突变体及抗病野生型为材料,对不同世代群体进行遗传分析,结果表明,该突变性状为细胞核内两对重叠作用的基因所控制,感病植株为隐性突变体,其基因型为sc1sc2.同时对突变位点sc1及sc2进行了染色体定位研究.结果证实, sc1位于1号染色体的长臂上,sc2位于2号染色体的长臂上.为进一步研究拟南芥抗病功能基因奠定了基础.     

激素对油菜子叶再生及转基因瞬间表达的影响

以甘蓝型油菜“湘油15”子叶为外植体,以MS为基本培养基,采用正交试验设计,研究了预培养基2,4-D和6-BA浓度、分化/共培养基NAA和6-BA浓度对子叶芽再生频率和转GUS基因瞬间表达率的影响.结果表明,激素对芽再生频率和转基因瞬间表达率都有重要影响,但激素对芽再生和转基因瞬间表达的影响效应具有不一致性.激素对芽分化的影响程度从大到小依次为再生培养基NAA、预培养基6-BA、预培养基2,4-D、再生培养基6-BA,推导的对于芽再生的最佳激素组合方案为预培养基2,4-D 1.0 mg/L和6-BA1.0 mg/L、再生分化培养基NAA0.2 mg/L和6-BA3.0 mg/L;激素对GUS基因瞬间表达的影响程度从大到小依次为共培养基NAA、共培养基6-BA、预培养基6-BA、预培养基2,4-D,推导的对于瞬间表达的最佳激素组合方案为预培养基2,4-D 0mg/L和6-BA0.2 mg/L,共培养基NAA0.05 mg/L和6-BA3.0 mg/L.推导的对于芽再生频率×GUS基因瞬间表达率的最佳激素组合方案为预培养基2,4-D 1.0 mg/L和6-BA1.0 mg/L,共/分化培养基NAA0.05 mg/L和6-BA3.0 mg/L.