新疆牦牛多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药物敏感实验

为确诊新疆某牦牛场的某疾病的发病病源,控制病情蔓延,对该病病原进行分离培养、小白鼠致病性试验、生化鉴定、PCR鉴定。结果表明:得到6株多杀性巴氏杆菌;这6株分离菌均对庆大霉素、四环素、链霉素、磺胺、土霉素等药物敏感;根据多杀性巴氏杆菌KMT-1基因扩增了1条457bp的特异性条带,对其进行测序分析,结果表明其与GenBank提交的12条多杀性巴氏杆菌KMT-1基因序列同源性达97%～99%。     

乌骨鸡禽霍乱的病原分离鉴定和药敏试验

应用常规分离鉴定技术,对西宁市某特种珍禽养殖场92日龄濒死和病死乌骨鸡进行禽霍乱病原分离,并与多杀性巴氏杆菌质控菌株进行生化特性比较。结果显示:分离株与质控菌株间有一定的生化差异,但符合禽型巴氏杆菌的生化特性;同时对分离菌株进行了药物筛选,选取中介和敏感药物进行交替治疗,取得了一定的治疗效果。     

应用二温式多重PCR技术鉴别鸡传染性支气管炎病毒和鸡传染性喉气管炎病毒

为了简化聚链反应（PCR）程序和加快检测速度,将二温式PCR与多重PCR结合起来,建立一种同是检测鸡传染性支气管炎病毒（IBV）和鸡传染性喉气炎病毒（ILTV）的二温式重PCR技术,试验根据IBV和ILTV的基因文库,设计2对分别与IBV和ILTV某段基因序列互补的引物。用这2对引物同一样品中的IBV、ILTV核酸模板进行二温式多重PCR扩增,结果均同时得到2条特异性大小与实验设计相符的1720bp(IBV)和647bp(ILTV）的扩增带,而对其他6种禽病病原的扩增结果均为阴性,敏感性测定结果表明明,该二温式多重PCR技术检出10pg的IBV RNA模板和10pg的ILTV DNA模板。     

多杀性巴氏杆菌外膜蛋白单克隆抗体对兔及鼠巴氏杆菌病的保护

用兔子分离的多杀性巴氏杆菌(P.multocida)免疫小鼠得脾细胞,与骨髓瘤细胞融合后制备针对37.5KDa外膜蛋白的单克隆抗体(MAbs)。用酶联免疫吸附试验(ELISA),全细胞放射免疫沉淀试验(WCRIP),免疫印迹分析筛选所需MAbs。WC-RIP和免疫印迹试验表明,用完整多杀性巴氏杆菌吸附及洗脱的MAb1608,其识别的抗原暴露于细胞表面,抗体易于接近,其分子量为37.5KDa,蛋白酶K处理多杀性巴氏杆菌外膜,MAb1608的活性完全消除,说明此MAb结合于某一蛋白抗原决定簇。在免疫印迹试验中MAbl6108与提纯的脂多糖(LPS)无反应。被动转移研究表明与对照组比,鼻内接种MAb1608并同时鼻内攻毒的9只家兔其死亡率、肺炎严重程度、非呼吸道脏器和鼻腔中多杀性巴氏杆菌数量都明显要低。肺中多杀巴菌数量减少84.750倍。被动转移试验也表明MAb1608保护鼠免受具有该MAb识别抗原决定簇的同源或异源多杀巴菌株的攻击。但是,当用缺乏MAb1608识别抗原决定簇的多杀巴菌株攻击鼠时,MAb1608不提供保护作用。本研究表明37.5KDa外膜蛋白是保护性MAb的作用靶。     

一株鹅源多杀性巴氏杆菌TSP-1的分离鉴定与药敏试验

为了确定引起雏鹅急性死亡的病原菌,从送检的病死雏鹅的肝脏、心血、肺脏病料组织中分离到1株病原菌,并命名为TSP-1。通过培养特性、形态学观察、生化试验、16S rRNA基因序列分析等鉴定方法,分离菌株TSP-1鉴定为多杀性巴氏杆菌。动物试验表明,分离菌株TSP-1具有很强的致病性。药敏试验结果表明:分离菌株TSP-1对头孢克肟、氟苯尼考、阿奇霉素、阿米卡星等4种药物高度敏感;对头孢曲松、庆大霉素、恩诺沙星、强力霉素等4种药物中度敏感;对氨苄西林、阿莫西林、四环素等6种药物耐药。     

雏鸭鸭疫巴氏杆菌和多杀性巴氏杆菌混合感染的诊治

对成都市郊某肉种鸭场爆发的雏鸭疾病，通过流行病学调查、临床症状、病理变化观察、病原分离鉴定、确诊为鸭疫巴氏杆菌和多杀性巴氏杆菌混合感染．在药敏试验的基础上，对１７００多只病鸭用两菌高度敏感的抗菌药物进行治疗，疗效显著，治愈率达９８％．     

多杀性巴氏杆菌12:A对家兔的致病性研究

<正> 多杀性巴氏杆菌引起的巴氏杆菌病是家兔的严重的常见病之一,死亡率很高。初步试验证明,兔巴氏杆菌病的主要细菌血清型是12:A和3:A。这二个血清型及其他血清型的比较致病性的研究较少。为了了解巴氏杆菌的流行病学及防制方法和生产一个有效的活苗,必须弄清巴氏杆菌主要血清型的致病性和宿主对巴氏杆菌的兔疫反应。本文研究目的是确定来自兔病的巴氏杆菌血清型12:A对可的松处理与不处理的无巴氏杆菌病兔的致病性,形成集落方式及个体免疫反应。本实验所用兔是无巴氏杆菌病、无波氏杆菌病和无巴氏杆菌抗体的新西兰兔,共24只,分三组。第一组经氢化可的松处理(25     

土木香内生细菌的分离鉴定及抑菌活性检测

利用组织分离法从用药植物土木香根、茎和叶中分离得到内生细菌32株.采用纸片法对菌株进行了抑菌活性研究,并运用生理生化与分子生物学方法进行种类鉴定.抑菌试验结果表明,10株内生菌发酵液对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌以及禽多杀性巴氏杆菌均有不同程度的抑菌活性.鉴定结果表明,菌株YIR-5,YIR-7,YIR-8,YIR-9为假单胞菌属菌种,菌株YIR-3,YIR-6为沙雷氏菌,菌株YIR-4,YIS-1,YIS-2分别为水生拉恩氏菌、薄壁芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌,而菌株YIL-3归属于芽孢杆菌属.土木香内生细菌组成丰富,莫海威芽孢杆菌（Bacillus mojavensis）YIS-1对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和禽多杀性巴氏杆菌的抑菌活性最强.     

猪多杀性巴氏杆菌(PM)PCR诊断技术的建立

参照文献报道的猪多杀性巴氏杆菌（PM）基因组的部分序列,设计合成引物,建立了PM的PCR诊断技术,并对各反应条件进行优化.本实验建立的PM的PCR扩增片段大小为457 bp.以建立的PCR方法对临床送检的可疑病猪的肺部病料进行了特异性检测和敏感性试验及生化鉴定.结果表明PCR检测阳性结果与猪多杀性巴氏杆菌的形态染色、培养特性和生化鉴定结果一致,该PCR方法在临床诊断中具有应用价值.     

禽巴氏杆菌抗链霉素耐药基因StrA的克隆及同原性比较

根据巴氏杆菌基因序列设计合成一对引物，以临床分离的动物源性巴氏杆菌抗链霉素耐药菌株为模板，通过PCR技术，扩增出StrA基因350-1153bp序列．PCR产物及表达载体通过粘端连接，将长约804bp的StrA目的基因片段克隆到pGEM—T载体上，构建了克隆载体质粒pGEM—TstrA．StrA基因片段测序结果与文献报道的结果同源性为99．8％．只有一个碱基发生突变，但所编码的氨基酸没有改变．     

家兔D型巴氏杆菌病的实验病理学研究

由慢性肺脓肿的兔病例中分离的Ｄ型多杀性巴氏杆菌进行了人工感染２０～４Ｏ日龄、６０～９０日龄家兔的实验，结果表明，两组家兔经胸腔、鼻腔感染造成的病变与自然病例相似，即纤维素性化脓性胸膜肺炎；经皮下感染引起弥漫性蜂窝织炎；经静脉、肌肉感染可产生败血症。Ｄ型多杀性巴氏杆菌引起的病变和Ａ型所引起的病变相似。     

禽多杀性巴氏杆菌X-73株ompH基因的克隆和表达

以禽多杀性巴氏杆菌国际标准株X-73基因组DNA为模板,采用PCR扩增得到编码信号肽除外的成熟外膜蛋白H的ompH基因,将ompH基因克隆至pMAL-p2X表达载体中,构建重组表达质粒pMAL-p2X-ompH,转化大肠杆菌BL21,用SDS-PAGE电泳检测IPTG诱导后的表达蛋白.DNA测序结果表明ompH基因片段大小为1 002 bp,与已报道的ompH基因的核苷酸序列完全相同、而SDS-PAGE结果显示表达分子质量约为78 ku,与预期的融合蛋白MBP-OmpH分子质量相符,表明成功构建出原核表达质粒并实现了目的蛋白表达,为进一步开展禽多杀性巴氏杆菌保护抗原的研究奠定基础.     

多杀性巴氏杆菌幽灵的研究

采用基因工程方法,将PhiX174噬菌体裂解基因E和温敏控制表达系统与质粒pPBA1100基因杂交,构建了重组子pPBA1100-E.将重组子转化到多杀性巴氏杆菌中,通过温度诱导使裂解基因表达.用限制性内切酶检验重组子.扫描电镜观察多杀性巴氏杆菌细菌幽灵和菌落形成单位评价遗传灭活率.结果表明:重组质粒经限制性内切酶酶切鉴定,琼脂糖电泳呈现三条谱带,相对分子质量与理论值一致.扫描电镜观察显示,重组子在多杀性巴氏杆菌中成功表达,获得了细菌幽灵.菌落形成单位检验结果显示,多杀性巴氏杆菌遗传灭活率达到99%.     

禽霍乱琼扩抗原和抗血清的制备

将禽多杀性巴氏杆菌 1,3和 4型菌株 ,分别接种于加有绵羊血红素的马丁氏肉汤中进行培养 ,将培养物混合后离心 ,并漂洗沉淀物 ,制成琼扩抗原 ,与NDV ,HAAV ,APIV ,IC ,SP ,MG ,MS和IBDV等抗血清无交叉反应。将 3个血清型细菌培养物等量混合后 ,免疫 6周龄SPF鸡制备禽霍乱抗血清     

传染性支气管炎病毒血凝抗原的制备

目的利用磷脂酶C处理，制备传染性支气管炎病毒（IBV）血凝抗原。方法将IBV接种9日龄SPF鸡胚，48h后收获尿囊液，经过高速离心浓缩，利用胰酶、产气荚膜梭状芽孢杆菌培养液（含磷脂酶C）处理后，进行常规血凝和血凝抑制试验。结果经过胰酶处理的IBV具有非常强的非特异性。而经过磷脂酶C处理的IBV，该凝集作用可被特异的IBV抗血清所抑制，而不能被ILTV、NDV、Adeno-1和Adeno-3，APIV、AIV、IBDV、HP、MS和MG等抗血清所抑制。结论磷脂酶C处理的IBV，可以用于血凝抑制试验。     

初探奶牛溶血性巴氏杆菌的临床诊断和预防及治疗措施

1.病因1.1巴氏杆菌为无芽孢,不运动,兼性厌氧,菌体两端常染色浓重的革兰氏染色阴性小杆菌。因1880年巴斯德氏首先自病鸡分离到本属中的多杀巴氏杆菌而得名。鼠疫杆菌、假结核杆菌、肠道结肠炎杆菌和土拉杆菌原归本属,现前三者改归耶尔森氏菌属,最后一种改归弗朗西斯氏菌属。本属已确定的种有多杀巴氏杆菌、嗜肺巴氏杆菌、溶血巴氏杆菌、尿巴氏杆菌和鸭疫巴氏杆菌等。     

实验兔巴氏杆菌的血清学(综述)

<正> 多杀性巴氏杆菌是兔的重要细菌病原体。巴氏杆菌病特别是呼吸道病有较高的发病率,目前,巴氏杆菌的血清学和免疫学知识是来自牛、禽,而对兔巴氏杆菌的血清学材料很少。应用革兰氏阴性菌(包括巴氏杆菌)免疫生物学的材料,来提高对兔病的理解,并产生一个预防或控制疾病的基础。本综述的目的有:1.提出革兰氏阴性菌的荚膜和细胞壁的现代理论;2.提出从动物(主要是牛和禽)分离出的巴氏杆菌的血清分类基础;3.将这种分类法应用于兔巴氏杆菌;     

鸽源大肠杆菌分离鉴定、毒力基因检测及药敏试验

为了确定疑似细菌感染鸽的病原菌,以病死鸽为研究对象,进行病原菌的分离培养、生化鉴定、16S rDNA序列分析、血清型检测、动物致病性试验、毒力基因检测以及药敏试验。结果表明:此次分离的1株优势菌株,命名为QH-1,是短杆状、中等大小的革兰氏染色阴性菌,且其形态特征和生化鉴定特性与大肠杆菌相符;经16S rDNA序列分析进一步证实菌株QH-1为大肠杆菌;血清型检测结果显示,分离菌株QH-1为O26血清型分离株;动物致病性试验结果显示,分离菌株QH-1能引起鸽和小白鼠感染发病,且试验鸽发生与自然感染病例相似症状;毒力基因检测结果显示,大肠杆菌QH-1携带irp2,FyuA毒力基因;药敏试验结果显示,大肠杆菌QH-1对头孢曲松敏感;对阿莫西林、环丙沙星等耐药。疑似细菌感染的鸽病例为大肠杆菌的感染,可以选择头孢曲松进行防控。     

多杀性巴氏杆菌抗原的研究进展

多杀性巴氏杆菌在自然界分布广泛,是畜、禽、野生动物及人类的一种共惠性病原．可以在同种和不同种的动物间传染,可以引起多种畜禽巴氏杆菌病,主要就多杀性巴氏杆菌的抗原成分进行概述．     

羊源烟曲霉菌的鉴定及致病性研究

通过形态学和分子生物学鉴定一株源自山羊,疑似烟曲霉(命名为YQM6)的菌株,并研究其致病性和耐药性.PCR扩增其毒力基因,通过小鼠致病性试验和药敏试验探究该分离株特性.试验结果显示,YQM6菌株与GenBank中登录的烟曲霉(MZ150 487)同源性为100%,在系统进化树中与烟曲霉(NR121 481.1)聚为一支.扩增得到601 bp ITS基因片段,检测出小G蛋白(RHO1)、蛋白激酶A调节亚基(PkaR)、过氧化氢酶1(Cat1)、碱性蛋白酶(Alp2)、核糖核酸酶(AspF1)等5个毒力基因.试验小鼠见肝、肾肿大,肺及肠有不同程度的出血,心肌血管充血,肝细胞体积增大、水肿,脾小体淋巴细胞减少,肺毛细血管扩张.该菌株对伊曲康唑、伏立康唑敏感,对卡泊芬净耐药.综上,YQM6菌株被鉴定为烟曲霉,且该菌株具有一定致病性.