平滑肌肌球蛋白轻链激酶对肌球蛋白非Ca2 依赖性磷酸化(2)

为了初步揭示肌球蛋白轻链激酶(MLCK)对肌球蛋白(myosin)非Ca2 依赖性磷酸化的特征 试验方法采用10%甘油聚丙烯酰胺凝胶电泳检测myosin的磷酸化,用孔雀绿法测定myosin Mg2 -ATP酶活性及选择Scoin Image扫描软件分析所获得的数据。提出在MLCK参与的myosin活性调节中,myosin以非磷酸化、非Ca2 依赖性(CIPM)及Ca2 依赖性磷酸化(CDPM) 种状态存在 研究发现非Ca2 依赖性磷酸化myosin有以下特征:(1)耗能(Mg2 -ATP酶活性)高于非磷酸化myosin但低于Ca2 依赖性磷酸化myosin;(2)花生四烯酸(AA)可选择性加强myosin非Ca2 依赖性磷酸化;(3)在本试验条件下,未观察到MLCK抑制剂ML-9对非Ca2 依赖性myosin磷酸化的抑制作用;(4)组胺(histamine)对非Ca2 依赖性的抑制小于对Ca2 依赖性磷酸化的抑制,且这些差异在统计学上有显著性。以上结果提示myosin非Ca2 依赖性磷酸化不仅在程度上,而且在机制上与Ca2 依赖性磷酸化可能存在重要区别     

平滑肌肌球蛋白轻链激酶对肌球蛋白的非钙依赖性磷酸化

发现肌球蛋白轻链激酶(MLCK)不仅以钙依赖性的方式,同时也以非钙依赖性的方式参与对肌球蛋白轻链的磷酸化。该非钙依赖性磷酸化的特征是:需要高浓度,但受温度升高、反应时间延长、离子浓度升高的影响远小于钙依赖性磷酸化。研究结果提示肌球蛋白轻链激酶对肌球蛋白的非钙依赖性磷酸化可能是一种新的机制,并与平滑肌张力的维持有关。     

橙皮苷分别与小檗碱、辛弗林合用对肌球蛋白活性的调节特征

为探讨小檗碱与橙皮苷合用以及辛弗林与橙皮苷合用对平滑肌肌球蛋白活性的调节的特征.在肌动蛋白存在与不存在两种实验条件下,研究发现:(1)小檗碱和辛弗林可抑制磷酸化肌球蛋白Mg2 -ATPase活性,橙皮苷可增加磷酸化肌球蛋白Mg2 -ATPase活性;(2)小檗碱与橙皮苷合用、辛弗林与橙皮苷合用均对磷酸化的肌球蛋白Mg2 -ATPase活性具有双向调节作用,即对部分磷酸化的肌球蛋白起兴奋作用,对完全磷酸化的肌球蛋白起抑制作用.这种双向调节方式对平滑肌功能失调可能具有有价值的调节作用.     

长型肌球蛋白轻链激酶4Ig结构域的表达及单克隆抗体的制备

长型肌球蛋白轻链激酶(long myosin light chain kinase,L-MLCK)及其分子内结构域的功能还不清楚.在研究其功能时,特异性抗体是一基本工具,但目前国际上还没有制备成功特异性较好的抗体.为此,我们先在大肠杆菌E.coliBL21中重组表达了鸡L-MLCK的4Ig蛋白片段(MLCK4Ig),蛋白经纯化后作为抗原免疫小鼠.在小鼠血清中检测到特异性抗体的基础上,建立了2株杂交瘤细胞株,获得抗鸡MLCK4Ig的单克隆抗体.该抗体可以特异与鸡L-MLCK和鸡MLCK4Ig反应.本文并对该抗体的特性及应用进行了讨论.结果表明,我们部分解决了L-MLCK的抗体缺乏问题,为研究L-MLCK及MLCK4Ig片段的功能提供了重要工具.     

Ca2+、CaM及CaM拮抗剂对粟酒裂殖酵母质膜H+-ATP酶活性的影响

经差速离心,酸处理,蔗糖密度梯度离心制备粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）质膜H^＋-ATP酶,以研究Ca^2＋、CaM以及CaM拮抗剂对纯化的质膜H＋-ATP酶活性的影响.结果表明Ca^2＋强烈的抑制该酶的活性,而CaM对该酶的活性没有影响,但TFP与Compound R24571这两类CaM拮抗剂又都能强烈地抑制该酶的活性.推测TEP等抑制该酶的活性不是通过与CaM结合作为CaM的拮抗剂竞争性抑制该酶的活性,而是直接对该酶发生作用或者通过磷脂或其它的CaM依赖性的膜蛋白间接对该酶产生作用.     

地西泮对大鼠脑突触体内Ca2+水平和Ca2+, Mg2+-ATP酶活性的作用

用Quin 2法测得大鼠脑突触体内静息游离Ca2+浓度([Ca2+]i)为85±13μmol/g protein.地西泮0.1,1和10 mmol/L对静息突触体[Ca2+]i无明显影响,但能以剂量依赖方式增高65 mmol/LKCl所致突触体[Ca2+]i升高,从105±23μmol/g protein分别达到185±28,267±49和291±48μmol/gprotein.地西泮1和10 mmol/L分别使突触体Ca2+,Mg2+-ATP酶活性降低28.7%和42.5%;使Mg2+-ATP酶活性分别降低12.6%和32.8%,提示地西泮可能是通过抑制钙调素,进而抑制Ca2+,Mg2+-ATP酶活性,使突触体[Ca2+]1升高,促进神经末梢释放递质.     

遵义市东郊降水化学特征分析

对遵义市东效降水的化学特征进行初步分析表明，东效降水酸度及离了组成与中心城区无显著差异，煤烟型大气污染特征明显，SO4^2-、NH4^ 、Mg^2 、Ca^2 、Na^ 构成降水酸化主导离子，同时降水酸度是各种离子的综合作用的结果。     

黄瓜离体雌核发育的过程及其早期生化变化研究

本首次研究了黄瓜离体雌核发育的形态及细胞学过程，以及培养早期生理、生化的变化．结果表明：雌核发育在培养的前6d即已开始，24d时形成胚状体，40d时形成成熟的胚状体．雌核发育的前6d，外植体POD酶活性急剧上升，SOD先上升后下降，Q酶活性明显上升但低于非雌核发育，Ca^2 -ATP酶和Mg^2--ATP酶活性变化较小且均低于非雌核发育．雌核发育的外植体IAA和ABA含量明显下降，iPA，Zr，CA3和CA4含量均有所下降并明显低于非雌核发育外植体．     

不同训练水平及训练方法中篮球运动员Na＋，K＋-ATP酶活性的比较研究

通过对CBA、体院篮球专业队以及非体育类对象采用间歇训练法和持续训练法运动6周后Na＋,K＋-AIP酶活性变化的比较,研究结果表明：（1）篮球运动员的Na＋,K＋-ATP酶活性要高于非训练组,并且训练年限越长,Na＋,K＋-ATP酶活性就越高;（2）采用间歇训练法要比持续训练法更容易提升Na＋,K＋-ATP酶活性;（3）动作协调性好的篮球运动员Na＋,K＋-ATP酶活性高于协调性差的篮球运动员。     

人工分子伴侣介导液相体系中肌球蛋白热稳定性的研究

为了进一步提高鱼蛋白的热稳定性,扩大水产蛋白的应用范围,本研究以罗非鱼鱼肉为原料来提取肌球蛋白,并对其进行了热处理,同时以浊度、溶解度、总巯基含量和表面疏水性为指标,试验了十二烷基硫酸钠(SDS)和β-环糊精(β-CD)的添加对肌球蛋白热变性聚集的抑制效果,探讨人工分子伴侣(SDS-β-CD)介导液相体系中肌球蛋白热稳定性的改善.单因素影响的分析表明,在试验范围内,在p H 6.0,SDS添加量为5 mmol·L-1和蛋白质量浓度2 g·L-1的条件下,于50℃热处理30 min后添加β-CD(SDS与β-CD的比例为1∶2),可以有效抑制肌球蛋白的热变性聚集;热变性抑制机理的分析显示,添加SDS和SDS-β-CD均能有效地抑制热升温处理(升温速率1℃·min-1,30~80℃)对肌球蛋白溶解度和浊度的影响(p≥0.05),抑制热处理对蛋白分子巯基的破坏作用,降低蛋白质分子间的相互作用,由此抑制肌球蛋白热处理过程中的变性聚集,从而改善体系的热稳定性.     

Myosin V orientates the mitotic spindle in yeast

Coordination of spindle orientation with the axis of cell division is an essential process in all eukaryotes. In addition to ensuring accurate chromosomal segregation, proper spindle orientation also establishes differential cell fates and proper morphogenesis. In both animal and yeast cells, this process is dependent on cytoplasmic microtubules interacting with the cortical actin-based cytoskeleton, although the motive force was unknown. Here we show that yeast Myo2, a myosin V that translocates along polarized actin cables into the bud, orientates the spindle early in the cell cycle by binding and polarizing the microtubule-associated protein Kar9 (refs 7-9). The tail domain of Myo2 that binds Kar9 also interacts with secretory vesicles and vacuolar elements, making it a pivotal component of yeast cell polarization.