辛酸沉淀纯化单克隆抗体的研究

采用一种经修改的辛酸沉淀法进行纯化小鼠腹水或血清中单克隆抗体(McAbs)的试验,全部八种抗促卵泡激素(FSH)单抗腹水的纯化结果都很好。该方法大致做法为将经稀释的腹水调pH至4.5后加入辛酸,离心弃沉淀,取上清液加等体积饱和硫酸铵,所得沉淀物用磷酸盐缓冲液(PBS)溶解后对相同PBS作广泛透析。以聚丙稀酰胺凝胶电泳(PAGE)检查经纯化抗体的纯度,并在600nm波长上扫描PAGE图谱,对抗体纯度作定量分析。结果抗体纯化物的平均纯度达93％(范围:83.5—98.6％)。通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测得知,纯化后抗体活性无明显丢失。     

人型结核杆菌H_(37)Rv株菌体特异性抗原TB4单克隆抗体的纯化

采用硫酸铵法、辛酸二步法、ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ５０ 离子交换柱层析法,从杂交瘤小鼠腹水中纯化人型结核杆菌Ｈ３７Ｒｖ 株特异性抗原ＴＢ４ 的单克隆抗体,从回收率、纯度和活性３ 个方面进行比较。结果显示,硫酸铵法回收率最高,层析法纯度最高,３ 种方法对单抗的活性均无大的影响。认为：辛酸二步法可有效地去除白蛋白,适用于大量腹水中单抗的提取、纯化,具有简单、省时等优点;柱层析法适用于小量腹水单抗纯化及分析用途     

抗人大细胞肺癌单抗用于肺癌检测的价值研究

为探讨抗人大细胞肺癌单克隆抗体在临床免疫组化检测中的应用,制备了抗人大细胞肺癌单克隆抗体,纯化后鉴定其纯度,并应用于临床免疫组化检测大细胞肺癌。结果显示,采用辛酸-硫酸铵法纯化小鼠腹水中的单抗效果较好。免疫组化结果表明,制备的抗人大细胞肺癌单抗可特异性地鉴别人大细胞肺癌。其可广泛应用于临床免疫组化检测中,为肺癌的早期诊断提供较可靠的辅助指标。     

肾综合征出血热病毒单克隆抗体7C11的纯化与鉴定

为获得高纯度的抗肾综合征出血热病毒单克隆抗体,建立杂交瘤细胞株7C11两步纯化的方法并进行亚类及特异性鉴定。采用Balb/c小鼠制备7C11单克隆抗体腹水,辛酸-硫酸铵法初步分离纯化,蛋白G亲和层析柱进一步分离纯化并鉴定。经初步分离纯化后,单抗IgG纯度>80%,回收率>50%;经过Protein G层析柱二次分离纯化后,单抗IgG纯度>98%,回收率>50%。亚类鉴定为IgG1,且特异性较好。成功获得高纯度的抗HFRS单克隆抗体,为抗汉坦型肾综合征出血热抗原表位的鉴定、抗原物质结构与功能的关系等后续研究奠定基础。     

抗促黄体激素单克隆抗体的研制：Ⅱ单克隆抗体的纯化及特性鉴定

在建立六株稳定分泌抗促黄体激素(LH)单克隆抗体的杂交瘤细胞株后,用羟基磷灰石(HAP)吸附层折技术从小鼠特异腹水中一步纯化抗LH单克隆抗体,抗体纯度可达85％—90％,在纯化抗体的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)图谱上基本显示IgG一条带,每ml腹水回收IgG量为3.6mg,并保留大部分抗体活性。特性鉴定结果表明,在六种抗体LH单克隆抗体中,AL-02和AL-06两种抗体与促卵泡激素(FSH)不产生交叉反应,是抗LH-β亚单位上的抗原决定簇的:其它四种抗体与FSH产生完全的交叉反应,是抗LH-α亚单位上抗原决定簇的。用測定抗体与抗原相对结合力的方法估算了四种抗LH单克隆抗体的相对亲和力,结果是AL-01抗体相对亲和力提高,其后依次是AL-03,AL-04和AL-02抗体。     

辛酸沉淀-凝胶过滤法提取猪血清IgM

使用辛酸沉淀-凝胶过滤法提取猪血清中免疫球蛋白IgM,并通过其纯度鉴定等探讨提纯效果.通过辛酸沉淀法粗提免疫球蛋白,再结合Sephadex G200凝胶过滤法纯化获得IgM,利用SDS-PAGE电泳法和AlphaEaseFC凝胶成像分析软件测定其分子量和纯度、Bradford法测定提取蛋白浓度并计算其得率.结果显示辛酸粗提能够去除大部分杂蛋白,凝胶过滤获得两个洗脱峰,其中第一峰通过电泳鉴定含有IgM,纯度63.8%,得率1.28 mg/ml血清.利用辛酸沉淀-凝胶过滤法能够获取纯度和得率都较高的IgM,纯度可满足普通要求的实验和应用.     

鸭胆汁中高纯度分泌型免疫球蛋白A制备

目的:从鸭胆汁中分离纯化分泌型免疫球蛋白A(SIgA)。方法:采用饱和硫酸铵和不同浓度聚乙二醇PEG-6000沉淀法和Micro-Prep S离子交换法从鸭胆汁中提取SIgA。SIgA的纯度和活性经SDS-PAGE和ELISA法检测并进行比较。结果:建立了从鸭胆汁中分离纯化高纯度SIgA的方法。结论:用终浓度15%的PEG-6000沉淀法可从鸭胆汁中获得电泳纯的SIgA,其产量最高,活性最好。     

聚乙二醇一步沉淀提取卵黄抗体

利用聚乙二醇一步沉淀法提取卵黄抗体 .当聚乙二醇浓度为 5 %时 ,可获得 66%抗体回收率 ,抗体纯度达 92 % ;当聚乙二醇浓度为 10 %时 ,抗体纯度为 85 % ,但可获得 99%的抗体回收率 ,且抗体活性没有损失 .     

脊髓灰质炎病毒Ⅰ型抗体胶体金检测试纸条的研制

目的:为研制快速检测脊髓灰质炎病毒Ⅰ型抗体的胶体金试纸条.方法:以辛酸-硫酸铵沉淀法纯化脊髓灰质炎病毒Ⅰ型单克隆抗体,用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,胶体金标记单抗,再结合脊灰病毒抗原形成复合物,固定于金标垫上,将鼠抗人IgG和羊抗鼠IgG分别包被于试纸条的T (检测线)处和C (质控线)处,应用该试纸条进行性能检测.结果:以已知的脊灰病毒Ⅰ型阳性血清作为检测样品,试纸条检测的灵敏度为1:80;特异性试验证明该试纸条与甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、麻疹病毒抗体阳性血清没有交叉反应;检测结果与脊灰病毒Ⅰ型疫苗抗体检测试剂盒(ELISA)试验的符合率为86.7%.结论:该试纸条检测脊灰病毒Ⅰ型的抗体水平具有较好的特异性与灵敏性,适用于大规模临床血清抗体水平检测,具有良好的应用前景.     

双抗体夹心ELISA检测禽流感病毒方法的初步建立

用饱和硫酸铵初步纯化的兔抗AIV-H9高免血清中的IgG作为包被抗体,利用抗AIV-NP-7B4单抗作为ELISA的第二抗体,建立了检测禽流感病毒(AIV)抗原的双抗体夹心ELISA方法. 经方阵滴定试验测定反应的最佳工作条件为:兔抗AIV-H9高免血清IgG包被稀释度为1: 8 000(浓度为3.531 ug/mL),抗AIV-NP-7B4单抗腹水最佳使用稀释度为1: 800,酶标二抗的工作浓度为1: 4 000. 与其他禽易感病毒(NDV、IBV、EDS-76V)等均没有交叉反应. 结果表明,本方法具有很高的特异性.     

弹性蛋白样多肽融合胸腺肽α1的原核表达方法

目的建立一种低成本生产胸腺肽α1（Tα1）的方法。方法采用融合表达方式表达Tα1基因,通过人工合成α1和弹性蛋白多肽（ELP）基因,构建Tα1—G—E12n／pET41a（＋）,同时构建RimJ—pACYCDuetl载体,共转BL21,采用自诱导表达培养基进行蛋白表达,表达蛋白通过变温自动聚合沉淀获得高纯度融合蛋白,将融合蛋白羟胺裂解,变温沉淀,收集上清,最终获得目标蛋白。结果IL培养基最终获得纯度为98％的目标蛋白29．5mg。结论建立了一种不需色谱和亲和纯化的生产胸腺肽α1的方法。     

响应曲面法优化鸡冠中透明质酸提取工艺条件

对乙醇浸泡鸡冠并提取其中透明质酸的方法进行研究,通过单因素和相应曲面实验考查了提取时间、乙醇体积分数、料液比对透明质酸得率的影响,确定了乙醇处理鸡冠中透明质酸的最佳工艺条件为:提取时间为25.70 h、乙醇体积分数90.00%、料液比100∶177(g/mL),在此条件下制备透明质酸的得率为27.31%.通过对该物质进行紫外光谱检测,显示该提取物质与标准品出峰位置一致,确定该提取物质是透明质酸.     

3，4-二甲氧基肉桂酸乙酯的一锅式合成

以藜芦醛和丙二酸二乙酯为主要原料,以L-脯氨酸／磷酸钾为催化剂,无水乙醇为溶剂,经水解、酸化和Knoevenagel缩合反应,一锅式合成了3,4-二甲氧基肉桂酸乙酯。实验得到较佳反应条件：n（丙二酸二乙酯）：n（黎芦醛）=2．0：1．0,n（L-脯氨酸）：n（黎芦醛）=0．35：1．00,n（L-脯氨酸）：n（磷酸钾）=6：1,反应时间7h。在较佳条件下,3,4-二甲氧基肉桂酸乙酯的收率达到77．4％,质量分数达97．0％。     

从木腊树中提取非瑟酮的研究

以浸出回流收率、纯度为指标,通过对比实验,优选非瑟酮提取、纯化工艺。实验结果表明：浸渍提取的最佳工艺为60%-70%乙醇、稀Ca（OH）2溶液;乙醇回流二次提取回流时间最佳为1.5h;分子印迹-固相萃取法提纯非瑟酮得率达98%以上、纯度99.6%以上。优选出的方法可为非瑟酮提取、提纯工艺提供实验依据。     

蒺藜皂甙的提取及部分纯化研究

对蒺藜皂甙的提取、索氏梯度分离和大孔树脂部分纯化进行了系统研究。结果表明,70％乙醇提取法优于水提醇沉法,得率为1．98％;经大孔树脂纯化,皂甙主要存在于40％,50％,55％,60％,65％乙醇洗脱液中,以40％乙醇洗脱液中皂甙含量最高;用薄层分析证实皂甙得到了纯化。     

2-取代间苯二酚化合物的合成

采用改进工艺,以间苯二酚（DHB）和叔丁醇（TBA）为原料合成重要有机中间体2-取代间苯二酚．DHB经过二叔丁基化、异丙基化和脱二叔丁基化3步反应合成了PDHB．在65-70℃,以酸性阳离子交换树脂（商品名NKC-9）作为催化剂,DHB与TBA反应合成4,6-二叔丁基间苯二酚（BDHB）的收率和纯度分别为85．8％和98、77％．BDHB与溴代异丙烷在NaOH水溶液中,于70℃反应5-6h,生成2-异丙基-4,6-二叔丁基间苯二酚（PBDHB）,收率和纯度分别为61．6％和96．53％．PBDHB在浓硫酸催化下,以二氯甲苯作为溶剂,经脱叔丁基反应得到PDHB。收率和纯度分别为76．7％和96.14％．改进后工艺可以合成收率、纯度均较高的PDHB,同样可以合成2-乙基（丁基、苄基）间苯二酚．     

从武夷岩茶生产副产品中提取咖啡碱及方法的改进

对茶叶中提取咖啡碱的方法进行了改进,方法为：95％乙醇回流提取一水浴蒸馏回收乙醇→加M如中和鞣酸、吸收乙醇和水分→90℃左右烘干乙醇、水分→油浴180～190℃加热粗提物,咖啡碱升华→纯品．武夷岩茶生产副产品茶末、茶片、茶梗中咖啡因含量分别为：45．65±0．66（mg／g）、42．14±5．68（mg／g）、25．55±0．55（mg／g）,从中提取咖啡碱率分别达到0．97±0．30（％）、0．44±0．08（％）、0．38±0．07（％）．用紫外和红外光谱法定性定量,产品为咖啡碱,纯度达到80％以上．对提取条件以正交实验优选结果,主要影响因素为提取温度,最优提取条件为温度70℃、料液比1：12．5、提取时间20min．     

红景天苷合成工艺

目的:降低红景天苷的制备成本并且提高红景天苷的产率,研究红景天苷合成的新工艺.方法:本实验以对羟基苯乙醇为原料,通过与糖苷化反应得到红景天苷化合物.结果:经高效液相色谱(HPLC)检测得到的红景天苷单体纯度达到98.5%以上,产率为46.2%.结论:本实验工艺可以制备高纯度红景天苷,主要降低了生产成本,并对于工业化生产高纯度红景天苷提供一定参考作用.     

从青霉菌丝体中提取核糖核酸的研究

文中研究了从青霉菌丝体中提取纯化核糖核酸的工艺条件。采用盐碱法破碎细胞,调抽提液 pH值至4.6以沉淀部分蛋白质,然后用中性蛋白酶AS1.398处理分级沉淀后的上清液,详细考察了蛋白酶用量、反应温度、初始pH值和反应时间对核酸纯度的影响。酶解液经截留相对分子质量为6.0×10⁴的超滤膜过滤后,核糖核酸的纯度和得率分别是72.1%和0.42%。