史氏鲟（Acipenser schrenckii）两种促性腺激素β亚基的原核表达

 采用遗传工程方法,重组表达史氏鲟两种促性腺激素β亚基蛋白。选用原核表达载体pET－22b(+),分别插入史氏鲟GtHⅠ&;Ⅱβ亚基成熟肽cDNA序列,构建成C端含有6个组氨酸(6-His)融合蛋白标签的表达质粒;分别转化大肠杆菌表达菌株BL21（DE3）并诱导表达2个基因。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示重组融合蛋白相对分子质量分别为：GtHⅠβ亚基大约14 000,GtHⅡβ亚基15 000左右。分别用抗6个组氨酸融合标签的单克隆抗体及兔抗鲟鱼GTH多克隆抗体对2个表达蛋白进行Western Blot分析,结果显示重组蛋白表达正确且有较高的免疫活性。GTHⅠβ重组蛋白在2 h就有明显的表达,6 h后随着时间增加表达量不再增加;25 ℃诱导重组蛋白产量比37 ℃诱导产量低。获得的重组蛋白质将可用于建立鲟鱼GtH的放射免疫测定方法。     

黄鳝性腺发育过程中Amh和SOX9基因的表达分析

文章研究了黄鳝性腺发育过程中抗苗勒氏管激素(anti-Mullerian hormone,Amh)基因和Sry相关高泳动类非组蛋白基因9(Sry-related high mobility group-box gene 9,SOX9)2个基因的表达量变化及关系,进而推断其基因表达通路,为研究黄鳝性逆转过程中基因的调控理论奠定基础。文章提取黄鳝Ⅰ龄卵巢(Ⅱ期卵巢)、Ⅲ龄卵巢、Ⅱ龄间期性腺早期、Ⅱ龄间期性腺后期、Ⅲ龄精巢5个时期的性腺组织RNA并反转录成cDNA,通过半定量和荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)对其表达量进行定量分析。结果表明,Amh和SOX9基因在黄鳝性腺发育过程中的表达没有特异性,随着卵巢的败育和精巢的发育,表达量明显升高。Amh基因在Ⅲ龄精巢表达有显著增高,SOX9基因的表达量高于Amh(Ⅲ龄精巢例外)。Amh和SOX9基因的表达呈现正相关,后期Amh基因的表达量显著升高可能是由于存在一个诱导SOX9基因表达的信号,两者在黄鳝性逆转过程及精巢的发育过程中存在一定的协同关系,可能存在Amh—SOX9基因信号通路。     

卵泡刺激素促进卵巢颗粒细胞增殖分化的信号通路的研究进展

卵泡刺激素（FSH）是一种垂体前叶合成和分泌的糖蛋白激素,是卵巢发育的重要激素,可与卵巢颗粒细胞膜上的特异性受体结合从而促进细胞的增殖分化,激活细胞内芳香化酶生成雌激素和孕激素。FSH在卵巢颗粒细胞中主要依靠cAMP—PKA信号通路促进细胞增殖,同时也发生多种信号通路,ERK1／2、ERK5、p38MAPK、P13K／Akt、VEGF均参与FSH促进卵巢颗粒细胞的增殖分化;它们之间相互作用促进卵巢颗粒细胞的增殖。     

赤点石斑鱼LECT2基因的克隆与组织表达分析

基于LECT2的EST序列设计特异引物,采用RACE技术,成功克隆获得赤点石斑鱼LECT2 cDNA全序列,全长601 bp,包括了79 bp的3′UTR区、468 bp的开放阅读框(ORF)以及54 bp的5′UTR区,共编码155个氨基酸.通过与21个物种的氨基酸序列进行同源比对发现,所推导氨基酸序列与大黄鱼的相似性最高,为78%,与其他物种的相似性在40%～73%之间,表明LECT2氨基酸序列具有较高的保守性.基于LECT2基因的氨基酸序列构建的脊椎动物系统进化树与传统物种树基本吻合.同时,通过RT-PCR方法得出,LECT2在健康赤点石斑鱼多种组织中均有表达,肝组织表达量最高,感染哈维氏弧菌(Vibrio barveyi)后LECT2在脾、头肾、鳃等免疫器官中有较高表达量,而在肝脏中表达量上调最为显著,其结果证实了LECT2与赤点石斑鱼免疫应答相关,肝脏可能是赤点石斑鱼LCET2蛋白最主要的表达场所.     

锯缘青蟹(Scylla serrata)脑中FSH和LH的免疫识别

为研究甲壳动物卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)的存在与分布,我们应用免疫细胞化学技术对FSH和LH在锯缘青蟹(Scylla serrata)脑中的分布进行了定位研究.结果显示:在近成熟期雌蟹和精子细胞期雄蟹脑中检测到FSH中等免疫阳性反应和LH弱免疫阳性反应,免疫阳性细胞分布在前脑的前中胞体群和后脑的后侧胞体群.发育早期雌蟹和精原细胞期雄蟹未见FSH和LH免疫阳性反应.研究结果表明:FSH和LH存在于锯缘青蟹脑中并具有发育阶段特异性,可能参与性腺发育及精卵成熟的调节.     

FSHβ和LHβ基因表达调控区多态性与女性真性性早熟相关分析

选取与性发育调控相关的重要基因黄体生成素β亚基(LHβ)和卵泡刺激素β亚基(FSHβ)基因,通过对27例病例样本中5'转录调控区测序,观察到4个新单核苷酸多态性位点(LHβ-1424 C/G,LHβ-238 G/A,FSHβ-261 G/T,FSHβ-132 T/A).在283例中国女性真性性早熟病例和284例正常女性(对照组)中,对LHβ和FSHβ基因的4个单核苷酸多态性位点分型.相关性分析结果显示:LHβ和FSHβ的5'上游转录调控区中的多态性位点与中国女性真性性早熟无显著相关性.     

锯缘青蟹(Scylla serrata)脑中FSH和LH的免疫识别

为研究甲壳动物卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)的存在与分布，我们应用免疫细胞化学技术对FSH和LH在锯缘青蟹(Scylla serrata)脑中的分布进行了定位研究.结果显示：在近成熟期雌蟹和精子细胞期雄蟹脑中检测到FSH中等免疫阳性反应和LH弱免疫阳性反应，免疫阳性细胞分布在前脑的前中胞体群和后脑的后侧胞体群.发育早期雌蟹和精原细胞期雄蟹未见FSH和LH免疫阳性反应.研究结果表明：FSH和LH存在于锯缘青蟹脑中并具有发育阶段特异性，可能参与性腺发育及精卵成熟的调节.     

多胎和单胎山羊品种促性腺素基因及其受体基因的克隆、序列分析及组织表达研究

以多胎的金堂黑山羊和单胎的藏山羊为研究对象,通过RT-PCR技术,对金堂黑山羊和藏山羊FSHβ、LHβ、FSHR和LHR基因进行克隆,采用Real-time PCR技术测定FSHR和LHR基因在发情前期母羊卵巢中的表达量,采用酶联免疫法测定血浆中FSH和LH的浓度.结果表明:金堂黑山羊和藏山羊FSHβ、LHβ、FSHR和LHR基因的CDS区长度分别为390bp、426bp、2088bp、2103bp,同源性分别为99.74%、100%、99.95%、99.57%;发情前期两山羊品种之间卵巢FSHR和LHR基因的mRNA相对表达量差异不显著(P>0.05),血浆中FSH浓度无显著差异(P>0.05),LH的浓度差异显著(P<0.05).提示FSHβ和LHR基因序列及血浆中LH浓度在两个品种间的差异可能是品种间产羔数性状差异的重要原因.     

斑鳠血清促性腺激素的季节变化和埋植甲基睾酮对斑鳠促性腺激素分泌的影响

 采用鲤鱼GtH β-亚基(cGtH β)的标准品和抗血清建立了斑鳠异源的促性腺激素（Gonadotropin, GtH）放射免疫测定技术,并对斑鳠性腺指数（Gonadosomatic index, GSI）和GtH分泌的季节变化,以及埋植甲基睾酮（17α-methyl-testosterone,MT ）对斑鳠GtH分泌的影响进行了研究。结果表明：斑鳠雌雄鱼GSI值分别在5月份和6月份达到最高,与其他月份相比有显著性提高（P<0.05）;斑鳠雌鱼血清GtH水平在6月份达到最高,与10月和12月相比有显著性提高（P<0.05）,斑鳠雄鱼血清GtH水平在6月份达到最高,4月、10月和12月相比有显著性提高（P<0.05）;雌雄鱼血清GtH水平表现出基本相同的变化趋势,并且血清GtH水平差异不显著（P>0.05）;埋植MT对斑鳠雌雄鱼血清GtH水平有一定影响,在性腺发育初期能提高雌雄鱼血清GtH水平,而在性腺成熟和排卵期能降低雌雄鱼血清GtH水平。上述结果表明在斑鳠的人工繁殖中可以采用埋植MT的方法对斑鳠进行催熟和催产。     

淫羊藿苷对更年期综合征模型大鼠的实验

目的:探讨淫羊藿苷对更年期综合征(CS)的影响.方法:将40只雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、淫羊藿苷低剂量治疗组(质量分数为25 mg/kg)、中剂量治疗组(质量分数为50 mg/kg)和高剂量组(质量分数为100 mg/kg)5组,每组8只.除假手术组外,其余各组大鼠去势4周,复制CS动物模型后,分别给予灌胃相应的生理盐水和药物60 d,采用放射免疫分析法检测各组大鼠血清雌二醇(E_2)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)以及下丘脑β-内啡肽(β-EP)的含量,放射配体结合分析法检测子宫、脾脏雌激素受体(ER)水平.结果:与假手术组相比,模型组大鼠E_2、下丘脑β-EP以及子宫、脾脏ER表达量显著性下降(P0.05),血清FSH与LH表达量显著性升高(P0.05).与模型组相比,淫羊藿苷低、中、高剂量治疗组模型组大鼠E_2、下丘脑β-EP以及子宫、脾脏ER表达量显著性上升(P0.05),血清FSH与LH表达量显著性降低(P0.05),且淫羊藿苷剂量越高,治疗效果越高.结论:淫羊藿苷对更年期综合征有治疗作用.     

LHβmRNA在文昌鱼脑和哈氏窝的定位及其表达

为确定存在于脑和哈氏窝的脊椎动物促性腺激素样物质是由自身合成的还是有其他来源,用地高辛标记的促黄体素β亚单位核糖核酸(LH_βRNA)探针对文昌鱼脑和哈氏窝进行原位杂交组织化学研究.结果发现LH_βmRNA能够在文昌鱼脑的神经细胞和哈氏窝上皮细胞表达,这在分子水平上为哈氏窝与脊椎动物脑垂体同源以及为促性腺激素功能的演化提供了新证据.     

家蚕非编码RNA Bm-152功能初探

Bm-152是前期研究中发现的一个在家蚕丝腺中高表达的非编码RNA.采用实时荧光定量PCR技术对Bm-152在家蚕5龄到预蛹期不同发育天数丝腺中的表达谱进行检测.同时,在个体中过表达Bm-152,检测Bm-152可能参与的信号通路.结果显示,Bm-152在家蚕5龄幼虫丝腺发育过程中无明显的变化规律,但在吐丝第1天表达量较高,随后表达量又下降.通过在血淋巴中注射2μg piggyBac[A3-EGFP-A3-Bm-152]过表达载体,48h后发现Bm-152在丝腺组织中无明显过表达,但在非丝腺组织中可实现明显过表达,且表达量上调1.66倍;蜕皮激素信号通路基因Usp在非丝腺组织中上调1.95倍,E75A在非丝腺组织中上调2.26倍,保幼激素信号通路基因Met在非丝腺组织中上调1.79倍.表明非编码RNA Bm-152可能通过蜕皮激素和保幼激素信号通路参与家蚕发育,该结果为进一步探索Bm-152的功能提供了方向.     

赤点石斑鱼MHC IA基因的克隆与表达多态性分析

采用RACE技术,成功克隆获得赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)非特异性免疫因子MHC IA基因的4个cDNA全序列,序列全长为1 680bp,含有3′UTR、启动子、多肽结合区(α1)、IGC区(α2)、跨膜区、胞质区和5′UTR区,编码区大小为1 074～1 080bp,共编码357～359个氨基酸,推测蛋白质分子质量约41.66ku.氨基酸序列分析发现赤点石斑鱼MHC IA分子具有经典MHC蛋白分子的空间结构,在多肽结合区则存在极其丰富的变异.利用Real time PCR和SSCP技术研究了赤点石斑鱼MHC IA的组织表达特异性和表达多态性,发现其在头肾、心、肝等12个组织器官中均能有效表达,在头肾,脾,胸腺等免疫组织表达量不仅高,表达多态性也异常丰富,而在与外界环境接触较多的鳃、肌肉、肠等组织表达较弱.此外,根据MHC IIB分子中相对保守的IGC区氨基酸序列构建了脊椎动物的系统进化树,也表明了该分子的IGC区氨基酸序列可以作为研究鱼类物种间进化关系的良好标记.     

雌性Wistar大鼠、NIH小鼠性周期血清激素含量分析

目的通过测定Wistar大鼠和NIH小鼠性周期各期及超排后血清生殖激素雌二醇(E2)、促黄体生成激素(LH)和促卵泡生成激素(FSH)的含量,比较不同性周期实验动物的血清性激素水平,研究动物血清性激素随性周期变化的规律。方法用阴道涂片法判定动物的性周期阶段并进行分组,用放射免疫分析法测定各组动物血清E2、LH和FSH的含量,进行统计学处理和分析。结果Wistar大鼠和NIH小鼠E2各时期间无显著差异;LH以超排组最高,与其他各组比较有极显著差异(P<0.01);FSH在动情后期最高,与各组比较有极显著差异(P<0.01)。结论雌性大、小鼠的血清生殖激素在性周期的不同阶段其含量呈规律性变化,超排后动物血清LH的分泌增加,以促进卵子的排出和黄体的形成。     

斜带石斑鱼Frizzled 4基因的克隆及表达分析

利用同源克隆和RACE的方法,从斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)卵巢中克隆了Frizzled4(g FZD4)的全长c DNA序列.g FZD4的c DNA序列全长2 033bp,其中开放阅读框1 596bp、编码531个氨基酸.氨基酸序列比对和系统树分析显示,g FZD4的结构十分保守,斜带石斑鱼与鲈形目罗非鱼的亲缘关系最近.RT-PCR分析表明,g FZD4基因在斜带石斑鱼组织中广泛表达,其中脑、肾脏、心脏和腮组织的表达量较高.荧光定量PCR检测结果显示,g FZD4基因的表达水平在胚胎发育的早期较低、在桑葚期显著升高、在囊胚期最高,其后除了肌节形成期外均基本与桑葚期的表达水平相似;g FZD4基因在卵巢发育过程中表达水平较低,而在性逆转的精巢发育过程中表达水平显著升高,表明g FZD4介导的Wnt信号通路在石斑鱼的性逆转过程中可能发挥了重要作用.     

β-Catenin和Wnt5a蛋白在人牙齿早期发育过程中的表达

以人牙胚为材料,运用免疫组织化学染色技术分别检测经典Wnt信号通路的β-Catenin和非经典Wnt信号通路的Wnt5a的表达模式．结果表明：从12w人牙胚帽状期到15w钟状期。β-Catenin蛋白在牙上皮细胞的表达强于牙问充质细胞,且其在磨牙细胞的表达强于门牙;随着发育的成熟,β-Catenin蛋白在内釉上皮细胞的表达增强,而在外釉上皮层和星网状层的表达降低．WntSa蛋白在人牙胚中的牙间充质细胞的表达强于牙上皮：从帽状期到钟状期．Wnt5a蛋白在内釉上皮层和星网状层的表达降低,β-Catenin蛋白的表达整体明显高于WntSa．因此,经典Wnt信号通路在人牙齿早期发育过程中发挥重要的作用．     

南方鲶生殖周期中脑垂体和血清促性腺激素水平的含量变化

采用测定胡鲶科非洲鲶(Clariasgariepinus)GTH的放射免疫测定法,用标记鲤(Cyprinuscarpio)GTH的方法进行标记,测定了鲶科南方鲶(SilurusmeridionalisChen)生殖周期中的血清GTH水平和脑垂体GTH含量变化,以揭示其性腺发育、成熟过程中的内分泌调节机理.南方鲶血清中GTH水平的季节变化表现出与成熟系数相一致的变化趋势,周年中雌鱼血清GTH水平都高于雄鱼,雌雄鱼血清GTH水平在繁殖期间差异尤为显著.脑垂体中GTH含量也在生殖周期中具明显周期变化.在性腺发育晚期和成熟期雌鱼脑垂体的GTH含量明显高于雄鱼,而在其它性腺期雌鱼脑垂体的GTH含量仅略高于雄鱼,但雌雄鱼之间并无显著差异.     

抗促黄体激素单克隆抗体的研制：Ⅱ单克隆抗体的纯化及特性鉴定

在建立六株稳定分泌抗促黄体激素(LH)单克隆抗体的杂交瘤细胞株后,用羟基磷灰石(HAP)吸附层折技术从小鼠特异腹水中一步纯化抗LH单克隆抗体,抗体纯度可达85％—90％,在纯化抗体的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)图谱上基本显示IgG一条带,每ml腹水回收IgG量为3.6mg,并保留大部分抗体活性。特性鉴定结果表明,在六种抗体LH单克隆抗体中,AL-02和AL-06两种抗体与促卵泡激素(FSH)不产生交叉反应,是抗LH-β亚单位上的抗原决定簇的:其它四种抗体与FSH产生完全的交叉反应,是抗LH-α亚单位上抗原决定簇的。用測定抗体与抗原相对结合力的方法估算了四种抗LH单克隆抗体的相对亲和力,结果是AL-01抗体相对亲和力提高,其后依次是AL-03,AL-04和AL-02抗体。     

二仙益坤汤对围绝经期抑郁模型大鼠生殖激素及5-HT受体mRNA表达的影响

目的:观察二仙益坤汤对围绝经期抑郁模型大鼠部分生殖激素水平、神经递质及相关受体的影响,探讨其抗抑郁作用机制。方法:采用孤养结合慢性轻度不可预见性应激复合造模法制作围绝经期抑郁大鼠模型,选取符合条件的雌性围绝经期SD大鼠70只,随机分为正常围绝经期对照组、模型组、补佳乐组、百忧解组、中药二仙益坤汤低、中、高剂量组,连续给药21天后,称量子宫、卵巢湿重,并计算脏器指数,酶联免疫法检测各组大鼠血清中生殖激素促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)及海马、下丘脑中神经递质五羟色胺(5-HT)含量,RT-PCR法检测下丘脑5-HTR1A、5-HTR2A受体亚型mRNA表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠子宫、卵巢指数降低,血清E2水平降低,FSH、LH水平升高,海马、下丘脑中5-HT含量均降低,下丘脑的5-HTR1AmRNA表达降低,5-HTR2AmRNA表达增高(P<0.05);二仙益坤汤各剂量组与模型组比较,子宫、卵巢指数及E2含量升高,FSH水平降低,海马、下丘脑中5-HT含量升高,5-HTRIA受体mRNA表达上调,5-HTR2A受体mRNA表达下调(P<0.05),结论:二仙益坤汤能通过调节部分生殖激素水平和神经递质及其相关受体亚型的表达从而产生抗抑郁作用。     

神奇的褪黑激素

在人体的大脑中心有一个如同豌豆大小的内分泌腺体——松果体。松果体合成褪黑激素(melatonin),其主要生理作用是通过下丘脑或直接抑制垂体促性腺激素(FSH)和黄体生成素(LH)的分泌,从而抑制性腺的活动。松果体的活动呈明显的周期性变化,周而复始与四季变化和昼夜交替的节律保持同步。昼夜周期中光照与黑暗的交替,引起褪黑激素分泌量的昼夜波动。光照能抑制褪黑激素的分泌,而黑暗则刺激褪黑激素的分泌,故夜晚中褪黑激素升高,而“规定”人们何时应该上床睡觉。褪黑激素的“时间信号”起着人体生