可溶性人类白细胞抗原-G在重度子痫前期患者胎盘组织培养液中的表达

为了检测妊娠晚期重度子痫前期患者和正常妊娠妇女胎盘组织培养液中可溶性人类白细胞抗-G(soluble human leukocyte antigen-G,sHLA-G)的表达水平,探讨sHLA-G在子痫前期发病中的作用,选择了2008年10月至2009年4月第四军医大学唐都医院重度子痫前期患者20例(重度子痫前期组),正常足月妊娠者20例(正常足月妊娠组),用酶联免疫吸附法(ELISA)检测胎盘组织培养液中sHLA-G的表达水平.经检测重度子痫前期组胎盘组织培养液中sHLA-G的表达水平(26.78 ± 5.17 U/ml)明显低于正常妊娠组(53.64 ± 28.85U/ml)(P <0.05).实验表明,sHLA-G在重度子痫前期患者胎盘组织培养液中表达水平均明显降低,可能与子痫前期发病有关.     

晚孕期阴道壁结缔组织Ⅰ型胶原和TIMP-1表达分析

目的:探讨妊娠晚期妇女阴道壁结缔组织中Ⅰ型胶原蛋白和基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)mRNA表达改变及二者间的相关性。方法:选取20例无妊娠合并症的足月顺产产妇为晚期妊娠组。另选取未绝经、无盆底功能障碍,因患子宫肌瘤或子宫腺肌症行全子宫切术患者15例为对照组,应用免疫组化和荧光定量PCR法检测标本中Ⅰ型胶原和TIMP-1 mRNA表达水平。结果:晚期妊娠组Ⅰ型胶原蛋白和TIMP-1 mRNA表达水平均显著低于对照组(P<0.05)。结论:妊娠、分娩下调TIMP-1基因转录水平表达,促进胶原蛋白分解增加,盆底支持功能减弱,可能是妊娠晚期盆底松弛及产后盆底功能障碍的重要发病机制之一,也是妊娠、分娩作为PFD的独立危险因素的重要原因。     

自然流产胚胎绒毛组织中lrh-1基因表达的研究

采用实时荧光定量PCR(Q-RT-PCR)技术,对30例自然流产和30例正常妊娠者的胚胎绒毛组织进行肝受体同系物-1(lrh-1) mRNA检测,同时测定2组人员血清孕酮质量浓度.结果显示:自然流产胚胎绒毛组织中lrh-1 mRNA的表达水平为(0.001385±0.000335),与正常妊娠胚胎绒毛组织中lrh-1 mRNA表达(0.001497±0.000447)无明显差异(P>0.05);自然流产者平均血清孕酮质量浓度((7.17±2.02) ng·mL-1)明显低于正常妊娠者((27.75±1.67) ng·mL-1),二者具有显著性差异(P<0.05);两组lrh-1与孕酮质量浓度相关系数分别为0.37和0.34.推论lrh-1与人类血清孕酮合成无明显相关性,在自然流产中可能不是影响人类胚胎发育的主要因素.     

LncRNA WDR86-AS1调节FOXO3a对滋养细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:探究LncRNA WDR86-AS1对叉头框转录因子3a(FOXO3a)与胎盘组织和人早孕绒毛外滋养细胞HTR8/SVneo细胞增殖和侵袭能力的影响及其可能参与子痫前期(PE)发生发展的分子机制.方法:选择子痫前期(PE)孕妇的胎盘组织25例为PE组,同期健康孕妇的胎盘组织25例为对照组,采用免疫组化法、蛋白印迹法及实时荧光定量PCR技术检测两组孕妇胎盘组织中LncRNA WDR86-AS1和FOXO3a的表达水平,并分析二者表达的相关性;沉默HTR8/SVneo细胞中LncRNA WDR86-AS1或FOXO3a的表达,检测FOXO3a的表达,并采用CCK-8和Transwell检测对滋养细胞增殖和侵袭能力的影响.结果:PE组中LncRNA WDR86-AS1 mRNA、FOXO3a mRNA和蛋白表达均高于对照组(P0.05);FOXO3a在胎盘组织滋养细胞的胞质和胞核均有表达且PE组的表达高于对照组(P0.05);PE组中LncRNA WDR86-AS1和FOXO3a表达呈正相关(r=0.54,P0.05);在HTR8/SVneo细胞中沉默LncRNA WDR86-AS1,FOXO3a mRNA和蛋白表达水平下降(P0.05),细胞的增殖和侵袭能力增加(P0.05);在HTR8/SVneo细胞中沉默FOXO3a,FOXO3a mRNA和蛋白表达水平下降(P0.05),细胞的增殖和侵袭能力增加(P0.05).结论:LncRNA WDR86-AS1可能通过调节FOXO3a的表达影响滋养细胞增殖和侵袭能力,参与PE的发生发展.     

子痫前期患者胎盘组织中miR-411表达的研究

研究miR-411在子痫前期患者和正常产妇胎盘组织中的表达差异,探讨微小RNA(miRNA)对子痫发病所起到的作用,收集子痫前期患者胎盘组织和正常产妇胎盘组织,并从中提取RNA;采用miRNA特异RT引物进行反转录; 最后用荧光实时定量PCR(Real Time PCR)的方法检测基因的表达量.结果 miR-411在子痫前期患者胎盘组织中表达降低.表明此次实验阐明了子痫前期患者胎盘组织中存在特异miRNA的差异表达,子痫前期发病可能受到miRNA的调控.     

Elf-1基因在急性髓细胞性白血病中的表达情况

目的:建立实时定量PCR检测Elf-1基因表达水平的方法,了解急性髓细胞性白血病(AML)患者外周血Elf-1基因表达水平.方法:采用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR和相对定量分析法检测33例AML患者:M2型17例、M3型6例、M5型10例和20例健康人外周血的单核细胞的Elf-1表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,采用公式2~(-△Ct)×100%计算Elf-1基因表达水平.结果:AML组Elf-1表达水平(13.518±19.197)%明显高于健康对照组(2.044±1.321)%(P<0.01),不同AML亚型之间Elf-1的表达水平没有显著性差异(P=0.52),但各亚型AML的Elf-1的表达水平均与健康对照组比较均有显著性差异(P<0.01).结论:建立SYBR Green Ⅰ荧光实时定量PCR分析外周血Elf-1表达水平的方法,检测急性髓细胞性白血病Elf-1基因高表达情况.     

胎盘缺氧诱导因子表达及绒毛血管变化与胎儿窘迫的关系

目的:通过比较出现胎儿窘迫的孕妇胎盘与正常孕妇胎盘的缺氧诱导因子表达及胎盘的绒毛血管变化情况,探讨胎儿窘迫中胎盘变化及其对胎儿的影响.方法:选取产科门诊定期产检并在产科住院分娩的单胎足月孕妇,临床诊断为胎儿窘迫的孕妇所分娩后的胎盘组织60例作为实验组,再按临床情况分为胎心异常组、羊水污染组、窒息组.选取正常单胎足月妊娠孕妇55例作为对照组.对比两组胎盘中HIF-1α表达水平,胎盘绒毛血管情况及新生儿预后.结果:HIF-1α在实验组与对照组两者的光密度对照有统计学差别,新生儿窒息组的光密度值较高;显微镜下实验组中绒毛血管数目及绒毛体积密度皆较对照组明显增加,实验组中各分组的值较对照组均升高.结论:胎儿窘迫孕妇的胎盘组织HIF-1α因子表达、胎盘绒毛微血管体积密度及绒毛体积密度皆高于未出现胎儿窘迫的孕妇.在排除妊娠合并症及并发症等病理情况下,产时胎儿窘迫的发生与胎盘自身HIF-1α因子表达及胎盘绒毛血管改变有关.     

桂枝茯苓丸联用顺铂紫杉醇化疗提高卵巢癌多药耐药模型裸鼠生存率

研究桂枝茯苓丸逆转人卵巢癌耐顺铂细胞株(SKOV3/DDP)肿瘤模型的耐药作用及其对荷瘤BALB/c裸鼠生存率的影响,探讨其可能的作用机制。采用Cell Counting Kit-8试剂盒检测SKOV3/DDP对顺铂和紫杉醇的耐药性;采用SKOV3/DDP细胞建立卵巢癌耐药肿瘤模型,模型BALB/c裸鼠随机分为桂枝茯苓丸浓缩液16 g·kg~(-1)·d~(-1)(高)、8 g·kg~(-1)·d~(-1)(中)、4g·kg~(-1)·d~(-1)(低)剂量(中药组)、顺铂/紫杉醇组(化疗组)、低剂量桂枝茯苓丸与化疗联用组(中西联用组)和空白对照组,检测各处理组的抑瘤率。观察各组BALB/c裸鼠的生存情况;并采用荧光定量PCR检测各组肿瘤组织中MDR1 mRNA的相对表达。结果是SKOV3/DDP细胞对顺铂和紫杉醇的耐药倍数分别为4.13倍和3.85倍。随着桂枝茯苓丸浓缩液剂量的增加,抑瘤作用增强,裸鼠生存率提高,肿瘤组织MDR1 mRNA表达相对于对照组逐渐下降。西药化疗组在耐药模型裸鼠中的抑瘤效果高于中药组,中西药联用后抑瘤效果显著高于西药化疗组;与其他各组相比,西药化疗组的裸鼠平均体重明显下降,差异均具有显著性(P0.05,P0.01)。中西联用组裸鼠生存率高于桂枝茯苓丸低剂量组和西药化疗组。西药化疗组MDR1mRNA表达相对于对照组显著增加,中西药联用组MDR1 mRNA表达相对于对照组显著下降,差异均具有显著性(P0.05,P0.01)。说明桂枝茯苓丸能够逆转SKOV3/DDP耐药性卵巢癌模型裸鼠的耐药性,提高裸鼠生存率,其机制可能与抑制MDR1 mRNA表达有关。     

RACK1基因在急性冠脉综合征行PCI术患者外周血中的表达及意义

选取在我院行PCI术的急性冠脉综合征患者66例,用实时荧光定量PCR法分别测定PCI术前及术后3个月时患者外周血单个核细胞中RACK1基因的表达。40名健康者作为对照组。测定结果是:(1)急性冠脉综合征组患者外周血单个核细胞中RACK1 mRNA表达水平明显高于对照组(17.56±4.98 vs 3.11±1.24,P0.05);(2)急性冠脉综合征患者行PCI术3月后,外周血单个核细胞中RACK1 mRNA表达水平较术前明显降低(10.84±3.71 vs 17.56±4.98,P0.05),但仍高于健康者(10.84±3.71 vs 3.11±1.24,P0.05)。RACK1在急性冠脉综合征患者外周血中表达上调,其表达水平可能和病情进展相关。     

高危型人乳头瘤病毒感染与宫颈鳞癌中γ-干扰素及白介素-10表达的相关性

目的:探讨高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染与宫颈鳞癌组织中γ-干扰素(IFN-γ)及白介素-10(IL-10)表达的相关性.方法:选取宫颈上皮内瘤变(CIN)及宫颈鳞癌组织共81例作为研究组,另选取15例正常宫颈组织作为对照组.采用导流杂交基因芯片技术检测宫颈脱落细胞中HR-HPV的感染状态及分型;应用免疫组化方法检测宫颈组织标本中IFN-γ及IL-10的表达并采用图象分析技术对其阳性表达进行半定量分析.结果:(1)正常宫颈组、CIN组和宫颈鳞癌各组的HR-HPV感染率比较有显著差异(P0.05).(2)正常宫颈组、CIN组及宫颈鳞癌组中IFN-γ阳性表达的IOD值分别为(3.556±1.356)、(3.085±1.081)及(1.617±0.754),经方差分析,组间比较有显著差异(P0.05);IL-10阳性表达的IOD值分别为(3.384±1.310)、(4.381±1.295)及(7.276±1.985),组间比较差异显著(P0.05).(3)在HR-HPV非感染组与感染组中IFN-γ阳性表达的IOD值分别为(3.340±1.053)和(2.481±1.210),IL-10阳性表达的IOD值分别为(3.590±1.350)和(5.772±2.048),两组比较均有统计学差异(P0.05).结论:宫颈局部IFN-γ的表达减弱,IL-10的表达增强,与HR-HPV的感染结局相关.     

重症监护病房多重耐药铜绿假单胞菌Ⅰ型整合子的检测及鉴定

 整合子是介导细胞多重耐药的重要机制之一,鉴定了2008年某医院重症监护病房分离的23株多重耐药铜绿假单胞菌1型整合子,并应用脉冲场电泳分析其同源性。1型整合子的阳性率达成60.9%。3种1型整合子基因盒被鉴定,其中整合子blaOXA 10 acc6 Ⅱ cmlA8为首次发现报道。基因盒主要编码氨基糖苷类耐药基因,包括 aacA4, aadA2, aadB, aac6 Ⅱ。脉冲电泳结果表明,23株多重耐药铜绿假单胞菌分为5个基因型,A 型(n=5)、B型 (n=6)、C型 (n=4)、D型(n=2)和E型(n=2)。研究表明编码1型整合子是多重耐药铜绿单胞菌较为普遍的特征,且1型整合子与多重耐药表型存相关。研究结果同时也表明防止多重耐药铜绿单胞菌交叉感染仍然是ICU的一项挑战性工作。     

靶向肿瘤多药耐药基因mdr1的siRNA的构建与鉴定

mdr 1基因及其表达产物P-gp是引起肿瘤细胞多药耐药(MDR)的主要原因,抑制mdr 1基因的表达可用于逆转MDR.RNAi可用于特异抑制靶基因的表达,本研究的目的是构建获得可特异有效靶向mdr 1基因的siRNA元件.应用siRNA设计软件与mRNA结构分析软件设计构建了3个分别靶向mdr 1基因mRNA环结构和茎结构的siRNA元件,同时构建了携带mdr1基因序列的luc报告质粒,通过siRNA表达质粒与携带靶序列的报告质粒的共转染抑制实验检测不同siRNA的抑制效率,结果显示靶向环结构siMDR1B具有较好的抑制效率和特异性.进一步将siMDR1B表达载体与mdr1基因表达载体共转染细胞,应用免疫流式细胞术检测显示,相比对照细胞,siMDR1B可显著抑制其转染后mdr1基因产物P-gp蛋白的表达活性.同时采用CCK-8细胞活性检测试剂评价了siMDR1B对细胞活性的影响,结果显示siMDR1B不会影响细胞活性,具有良好的特异性.本研究获得的可有效靶向mdr 1基因的siRNA元件可为进一步开展逆转MDR研究提供重要基础.     

用AFM观察小白鼠心肌核DNA片段的基因体外表达和垃圾DNA的相互作用

用AFM直接现场观察、体外表达等实验技术组合,观察到小白鼠（Balb/c）心肌核DNA片段的基因在体外表达过程中形成的n mRNA（n=9）线型链状复合体,处于垃圾DNA片段的特定的“翻译平台”上,其每种mRNA两端非共价键分别结合自己编码蛋白质（即分子开关）,中间的编码序列均非共价结合完全可解离的翻译活性因子等多种蛋白质：这些蛋白质可能均由垃圾DNA片段的极复杂的立体结构所形成的、匹配协同的、专一性蛋白质通路所调控,该通路对蛋白质按顺序分别进行特异性双向调控.核内n mRNA线型链状复合体在体外可翻译出LDH等蛋白质,并显示n mRNA翻译的“群体效应”.用AFM还观察到胞质制取的n mRNA（n=12）线型链状复合体（无垃圾DNA存在）,体外翻译出少量LDH等蛋白质,并显示n mRNA翻译的＂群体效应＂.本工作展示了未来运用AFM观察体外表达等生物学反应,研究基因表达与调控机制及其与垃圾DNA相互作用的前景.     

反义基因逆转肿瘤细胞多药耐药性和诱导细胞凋亡的研究

探讨克服肿瘤细胞多药耐药（ＭＤＲ１）性的方法,提高化疗效果。本文采用多药耐药反义基因（ＭＤＲ１－ＲＳＰＳ－ＯＤＮ）逆转Ｋ５６２／ＡＤＭ肿瘤细胞的ＭＤＲ１,诱导肿瘤细胞凋亡,发现ＭＤＲ１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ诱导Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞株细胞产生大量ＤＮＡ断片,ＦＡＣＳ检测发现几乎全部ＭＲＤ＋Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞发生凋亡。其结果表明ＤＭＤＲ１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ能有效、特异地抑制ＭＤＲ１基因表达,逆转肿瘤细胞的ＭＤＲ１,促进阿霉素诱导ＭＤＲ＋１Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞凋亡,为其临床应用提供理论依据     

有氧运动改善心肌梗塞大鼠血流动力学异常和自主神经功能紊乱

目的:观察8周有氧运动对心肌梗塞大鼠血流动力学和自主神经功能的影响并探讨其可能机制.方法:27只SD大鼠随机分为假手术组(S组,n=10)、心肌梗塞组(M组,n=9)和心肌梗塞运动组(ME组,n=8),心肌梗塞模型采用冠状动脉结扎术,ME组进行8周跑台训练.末次训练后48h处死动物,分别测定大鼠心脏结构与功能、血流动力学、心率变异性以及心肌神经生长因子(NGF)和酪氨酸羟化酶(TH)基因表达水平.结果:(1)与S组比较,M组大鼠左室扩张、心功能下降,血流动力学异常,心率变异性显示自主神经功能紊乱,心肌NGF和TH mRNA与蛋白表达下调(P0.05);(2)与M组比较,ME组心功能增强,血流动力学异常和自主神经功能紊乱得以改善,心肌NGF和TH mRNA与蛋白表达上调(P0.05).结论:长期有氧运动可能通过改善血流动力学异常和自主神经功能紊乱抑制心肌梗塞大鼠心脏重塑并提高心功能.     

AFM观察小鼠心肌核DNA片段的基因组合形成"基因系"的系统性和垃圾DNA的相互作用

用原子力显微镜(AFM)直接观察、小白鼠心肌等组织的核DNA片段的基因体外转录等多种实验技术组合,通过AFM观察到心肌核DNA片段上的基因,处于垃圾DNA的“转录平台”上,在体外转录过程中,由n(n=3、4等)个活性基因节,对应的n-1个“基因间隔”,依特定的排列组合分别形成n(n=3、4等)种大小不同的“基因系”,各“基因系”中的基因节同时转录,分别形成对应nRNA(n=9、12等)链状复合体,nRMA链状复合体分别与对应基因系的单链DNA两边的“接口”相联。核内对应nmRNA数量减少,形成负反馈效应后,使nRNA从对应“基因系”上迅速解离下来,核内经“转录后修饰”形成对应nmRNA链状复合体。该复合体主要在核内,处于垃圾DNA的“翻译平台”上进行蛋白质翻译,并在核内加工修饰形成有活性蛋白质。本工作展示了未来运用AFM观察生物学反应、研究核基因转录与调控的分子机理、基因组合形成基因系的系统性和垃圾DNA的相互作用的前景。     

胚胎停育绒毛中HLA-G mRNA和蛋白水平的表达及差异

研究HLA-G mRNA及蛋白在早孕绒毛和胚胎停育绒毛中的表达及意义,在50例正常早期妊娠妇女和50例胚胎停育妇女绒毛中,半定量RT-PCR法检测HLA-G mRNA的水平。S-P免疫组织化学染色法检测HLA-G蛋白的水平。两组标本中HLA-G mRNA水平差异不具有统计学意义(P>0.05);胚胎停育绒毛标本中HLA-G蛋白水平降低,与正常早孕绒毛标本相比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。说明HLA-G分子可能参与了胚胎停育的发生发展。     

大鼠海马发育过程中CRMPs家族mRNA的表达

目的:探讨大鼠海马发育过程中坍塌反应调节蛋白(CRMPs)家族mRNA的表达规律.方法:用RT-PCR方法检测大鼠发育不同阶段CRMPs家族mRNA的表达.结果:RT-PCR实际扩增长度与设计长度相吻合.内参照β-actin电泳条带在发育各时期灰度无明显差异.CRMP-1 mRNA以新生鼠和幼年鼠表达最多,成年大鼠弱表达(P<0.05).CRMP-2从胚胎鼠至幼年鼠呈现逐渐增加的趋势,成年鼠相对较低(P<0.05).CRMP-3以幼鼠和成年大鼠表达较多,其中幼鼠表达最多(P<0.05),新生鼠表达最少(P<0.05).CRMP-4在胎鼠、新生鼠和幼年鼠表达量接近,成年鼠表达相对较低(P<0.05).CRMP-5在各个阶段均呈较高表达,以新生鼠和成年鼠表达较多,其中成年大鼠表达最多(P<0.05),胎鼠表达最弱(P<0.05).结论:从胚胎期至幼年期,CRMPs家族除CRMP-4稳定于高表达水平外,其余成员表达量均逐渐增多,其中CRMP-3和CRMP-5区别于其他成员,在成年期表达量继续增高.     

妊娠期高血压对大鼠肝脏Ⅰ型脱碘酶及甲状腺激素的影响研究

目的探讨妊娠期高血压疾病对大鼠肝脏Ⅰ型脱碘酶以及甲状腺激素的影响。方法将20只孕鼠分为正常妊娠对照组(n=10)和妊娠高血压模型组(n=10)。于妊娠第13天,模型组大鼠皮下注射L-NAME至妊娠第21天,复制妊娠高血压疾病;对照组皮下注射等量生理盐水,起止时间同模型组一致。采集两组大鼠肝脏和血液,进行肝脏DIO-ⅠmRNA表达量和血液甲状腺激素水平检测。结果与对照组比较,模型组大鼠肝脏DIO-ⅠmRNA表达量显著下降(P <0. 05),血液中TT3、FT3浓度显著降低(P <0. 05)。结论妊娠期高血压疾病可降低孕鼠肝脏DIO-Ⅰ基因表达水平,进而导致血液TT3、FT3含量下降。