高活力碱性蛋白酶菌种的选育

以地衣芽孢杆菌XP2为出发菌株,通过采用60Coγ射线,NTG和热处理方法筛选得到碱性蛋白酶变异菌株H26。此菌株经过连续的传代保存,表现出良好的遗传稳定性。该菌株产酶达32000u/ml,比亲株提高68%。     

地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶的热稳定性研究

本文研究了环境因子对液体碱性蛋白酶２７０９＾＃热稳定性的影响，多种氨基酸、低浓度的各种离子以及羟基化合物等均能提高２７０９＾＃的热稳定性，氨基酸中以丝氨酸效果最好，Ｃａ＾２＋能极大的提高酶热稳定性，多糖类对酶的热稳定性效果不明显，但与适量合用，可显著提高酶的热稳定性。     

产碱性蛋白酶地衣芽孢杆菌N16抗噬菌体菌株筛选及噬菌…

报道了噬菌体ＰＧ３对产碱性蛋白酶地衣芽孢杆菌Ｎ１６反复感染多次进行自然筛选，获得８株对噬菌体ＰＧ３具有稳定抗性的菌株，其产酶水平有的比出发菌株Ｎ１６高１０％左右。同时对噬菌体ＰＧ３的生物学特性进行了某些研究。     

高温芽孢杆菌碱性蛋白酶发酵条件及酶性质研究

从西藏尼木卡如林温泉附近土样中分离到一个碱性蛋白酶产生菌株SD-142．该菌株经初步鉴定为芽孢杆菌．在50℃条件下，以10％的接种量接种于发酵培养基中振荡培养48h后，发酵液中碱性蛋白酶活可达516U／mL．发酵培养基的组成成分为麦芽糖6％、豆饼粉3％、麸皮3％、Na2HPO4 0．4％、MgSO4 0．02％、CaCl2 0．02％，pH自然．对该酶的性质研究表明，其最适作用pH为9．5，最适反应温度为60℃，具有良好的pH稳定性和热稳定性，并且显示了与去污剂良好的相容性．     

紫外诱变原生质体选育碱性蛋白酶高产菌株的研究：Ⅲ.诱变…

以地衣芽孢杆菌（ＢａｃｉｌｌｕｓＬｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）５３号菌为出５３－Ｇ３８－６，产酶活的最佳条件下制备原生质体，并对原生质体进行了多次诱变处理，从大量突变株进行筛选最终获得了高产、稳定、耐热的碱性蛋白酶产生菌５３－Ｇ３８－Ｋ６，产酶活力由１１０４Ｕ／ｍｌ提高到２２０８０Ｕ／ｍｌ。     

短小芽孢杆菌碱性蛋白酶的性质

对短小芽孢杆菌ｃ１７２（ｐＢＸ９６）转化子发酵淀粉产生的碱性蛋白酶,采用硫酸铵沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５脱盐、ＤＥＡＥ－纤维素柱层析等方法进行纯化,并对纯化酶的性质进行了研究．结果表明,酶反应的最适ｐＨ值为１１．０;在ｐＨ８．０～１１．０之间稳定;最适反应温度为４０℃;热稳定性较好,４５℃下处理３０ｍｉｎ酶活性不变,６０℃下处理３０ｍｉｎ活力保留６５％．对甲基苯磺酰氟（ＰＭＳＦ）能完全抑制该酶活性,洗涤剂中的三聚磷酸钠对酶有较大钝化作用．     

紫外诱变原生质体选育碱性蛋白酶高产菌株的研究Ⅲ.诱变株的选育及其产酶条件的研究

以地衣芽孢杆菌（ＢａｃｉｌｕｓＬｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）５３号菌为出发菌株，在原生质形成和再生的最佳条件下制备原生质体，并对原生质体进行了多次诱变处理，从大量突变株进行筛选最终获得了高产、稳定、耐热的碱性蛋白酶产生菌株５３－Ｇ３８－６，产酶活力由１１０４Ｕ／ｍｌ提高到２２０８０Ｕ／ｍｌ．该诱变株最适产酶条件为：培养基由质量分数（ｗ／％）为胰蛋白胨１，酵母膏０．５，玉米粉５，Ｎａ２ＨＰＯ４１２Ｈ２Ｏ０．４，ＫＨ２ＰＯ４０．０３，Ｎａ２ＣＯ３０．１组成，ｐＨ自然，培养温度４２℃，培养时间４４～４８ｈ，ｗ／％为０．２的ＣａＣＯ３可提高酶的产量．酶作用的最适条件：６２℃，ｐＨ１０．０，ｐＨ在９～１０之间稳定     

紫外诱变原生质体选育碱性蛋白酶高产菌株的研究…

从土壤中筛选到一株嗜碱性地衣芽孢杆菌５３－Ａ６．，该菌株能在ｐＨ１０以上６０℃的环境中良好生长，４５℃ｐＨ９￣１２的条件下均可产生活力较高的碱性蛋白酶，酶反应的最适条件：６０℃，ｐＨ１０￣１１，在ｐＨ８．５￣１１之间较稳定。６０℃保温１ｈ剩余酶活在２０％以上。     

从木糖生产酒精发酵工艺的研究

本研究应用酵母Saccharomyces Cereviciae AM12菌株,在木糖异构酶存在下,以木糖为基质发酵生产酒精。重点研究了基质浓度对酒精发酵速率的影响及菌体的接种量、增殖与乙醇生成的关系。实验结果表明,无论是氧限制或厌气发酵过程,在木糖异构酶的存在下,该菌株均可利用木糖发酵生成酒精。但是,在乙醇积累的同时,伴有副产物木糖醇的生成。     

紫外诱变原生质体选育碱性蛋白酶高产菌株的研究──1出发菌株的筛选及产酶条件的研究

从土壤中筛选到一株嗜碱性地衣芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）５３－Ａ６．，该菌株能在ｐＨ１０以上６０℃的环境中良好生长，４５℃ｐＨ９～１２的条件下均可产生活力较高的碱性蛋白酶。酶反应的最适条件：６０℃，ｐＨ１０～１１，在ｐＨ８．５～１１之间较稳定。６０℃保温１ｈ剩余酶活在２０％以上。     

流加发酵法生产碱性蛋白酶

采用流加法生产碱性蛋白酶,与分批发酵法相比,产酶活力提高10％以上,特别是以糊精为碳源时,产酶活力可提高20％以上。     

产中性蛋白酶工程菌的构建及其发酵条件的初步优化

为构建1株产中性蛋白酶的工程菌株并对其发酵条件进行优化,以中性蛋白酶工业生产菌株枯草芽孢杆菌AS1.398的基因组为模板,采用PCR技术扩增获得中性蛋白酶基因npr,与高拷贝质粒pWB980连接并转入蛋白酶缺陷型菌株枯草芽孢杆菌WB600中得到重组工程菌WB600/pWB980-npr.在初筛平板上工程菌蛋白酶活力明显高于工业生产菌AS1.398,工程菌发酵活力可达1,398.3,U/mL.通过对其发酵工艺进一步优化,在接种量5%、装液量100,mL/500,mL、摇床转速180,r/min、温度34,℃的条件下发酵48,h,发酵液的酶活力可达2,487.5,U/mL,比优化前提高了78%.     

高活力碱性蛋白酶产生菌的选育与发酵放大

为了选育高活力碱性蛋白酶产生菌株.采用复合诱变(紫外照射、NTG、离子注入)方法,结合平板初筛与摇瓶复筛.获得一株高产突变株HAPN-169,其酶活力为3.5×10 u/mL.高产菌株HAPN-169根据气液接触中体积传氧系数kLa相同的原则发酵放大(7L,30L,200L),其发酵参数为:温度34℃,装液系数0.7,接种量5%,使溶氧维持在20～30%,控制发酵过程pH不低于7.0.在7L发酵罐,发酵时间为54小时,酶活力为3.6×104u/mL;在30L发酵罐,发酵时间为50小时,酶活力为3.86×104u/mL;在200L发酵罐,发酵时间为36小时,酶活力为4.2×104u/mL.发酵液pH在7.5左右时,酶活力在峰值,发酵终点一到,必须马上下罐.该结果对为我围碱性蛋白酶工业发展提供一定的基础.     

一株碱性脱毛蛋白酶产生菌的筛选及系统发育分析

经过采集土样,分离、筛选得到一株产碱性蛋白酶的菌株,编号为A607.通过摇瓶发酵,对发酵上清液进行酶活测定和脱毛实验,证实所产生的酶具有蛋白酶水解活性和良好的脱毛能力,其酶活达到263.39μkat·L-1、比活力为1 215.24 μkat·g-1.16S rDNA序列分析表明,该菌株与Bacillus pumilus具有高达99%的相似性.用PHYLIP程序将该菌株与报道的相关碱性蛋白酶产生菌进行系统发育进化分析,发现菌株A607与Bacillus pumilus处于同一分支.     

短小芽孢杆菌碱性蛋白酶基因在枯草芽孢杆菌WB600中的表达

将来源于枯草芽孢杆菌WB600的启动子PyxiE与碱性蛋白酶基因进行融合,将融合片段插入到大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pSUGV4中,构建了表达质粒pSUPyAp. 将该质粒转入枯草芽孢杆菌WB600中,得到转化子pSUPyAp/WB600,它在启动子PyxiE驱动下,能够在牛奶平板上产生透明的水解圈,其发酵上清液中的碱性蛋白酶活性最高为518.5 U/mL,其酶活分别是在启动子Bp53和P43驱动下的3.01倍和1.22倍.     

短小芽孢杆菌碱性蛋白酶基因在枯草芽孢杆菌WB600中的表达

将来源于枯草芽孢杆菌WB600的启动子PyxiE与碱性蛋白酶基因进行融合,将融合片段插入到大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pSUGV4中,构建了表达质粒pSUPyAp. 将该质粒转入枯草芽孢杆菌WB600中,得到转化子pSUPyAp/WB600,它在启动子PyxiE驱动下,能够在牛奶平板上产生透明的水解圈,其发酵上清液中的碱性蛋白酶活性最高为518.5 U/mL,其酶活分别是在启动子Bp53和P43驱动下的3.01倍和1.22倍.     

脱毛碱性蛋白酶定点突变的初步分析

来自于Bacillus pumilus菌株BA06的碱性蛋白酶DHAP具有良好的脱毛能力. 为了更好地了解DHAP的催化特性和进一步改造使之更加符合制革工艺的要求, 根据蛋白质同源建模和嗜冷嗜热酶氨基酸组成的统计分析结果, 确定了13个氨基酸位点进行定点突变. 通过牛奶平板和对粗酶液在不同温度和热稳定性方面的活性进行了分析. 结果发现位于DHAP空间结构上底物结合“口袋”开口处α-螺旋上的氨基酸残基(E220, V223和K244)严重影响酶的活性; 位于底物结合口袋袋底的三个保守位点V256L、V25     

利用枯草芽孢杆菌发酵生产糖化酶的上游工艺研究

糖化酶-α-1,4-葡萄糖水解酶(α-1,4-Glucan glucohydrolace),又称葡萄糖淀粉酶[Glucoamylase,(EC.3.2.1.3.)],此酶作用于淀粉分子的非还原性末端,以葡萄糖为单位,依次作用于淀粉分子中的α-1,4-糖苷键,生成葡萄糖。此酶作用于支链淀粉后的产物有葡萄糖和带有α-1,6-糖苷键的寡糖;作用于直链淀粉后的产物几乎全部是葡萄糖。本产品广泛用于生产白酒、黄酒、酒精、啤酒;用于以葡萄糖作发酵培养基的各种抗生素、有机酸、氨基酸、维生素的发酵;本品还大量用于生产各种规格的葡萄糖。总之,凡对淀粉、糊精必需进行酶水解的工业上,都可适用。糖化酶产生菌主要是黑曲霉(左美曲霉、泡盛曲霉)、根霉(雪白根酶、德氏根霉)、拟内孢霉、红曲霉等经深层发酵提炼而成,本文介绍的是利用枯草芽孢菌杆发酵来生产糖化酶的基本上游工艺过程。     

高温碱性蛋白酶（TAP）菌株的分离及筛选（Ⅰ）

从１１份土样中分离出１０９株具碱性蛋白酶活力菌株。从中筛选出一株枯草芽孢杆菌（ＢａｃｉｌｌｕｓＳｕｂｔｉｌｉｓ）１０９号具高温碱性蛋白酶（ＴＡＰ）活力，在ｐＨ１０环境中好氧生长，最适生长温度为３７℃左右，ＴＡＰ活力平均为８６．９Ｕ／ｍＬ。１０９号菌株经亚硝基胍诱变后，得到一株ＴＡＰ活力提高至３０１Ｕ／ｍＬ的突变株Ｍ９２，该诱变株再用利福平抗性平皿自然分离得到一株具利福平抗性菌株Ｒ０１，其ＴＡＰ活力达３５０Ｕ／ｍＬ。     

一株地衣芽孢杆菌脲酶生产的发酵优化和酶学性质

对中国南海海绵Halichondria regosa中分离得到脲酶产生菌Bacillus licheniformis B81进行脲酶生产的发酵条件优化;并对其脲酶特性进行测试。通过对基础培养基筛选后,对选定基础培养基进行了Plachett-Bunman重要因素筛选,最终选定的重要因素通过单因素实验得到了最终的培养基配方为:葡萄糖25 g/L,蛋白胨12.5 g/L,牛肉膏5 g/L,酵母粉6.5 g/L,KH2PO42 g/L,NaCl 1 g/L,尿素0.625%(W/V),Ni(NO3)20.006 25%(W/V),H2O 1 L。优化后,使得脲酶的产量提高到了原培养基的170%。菌株所产生的脲酶的最适反应pH为7.0,最适温度为40℃,Pb2+、Cu2+对脲酶活性具有抑制作用。