p53+ /－ 基因敲除小鼠的脏器质量及血液学参数测定

摘要: 目的测定自主建立的p53+ /－ 基因敲除小鼠的脏器及血液生理生化指标,并比较周龄、性别对各项指标的影响。方法选取4 周龄和8 周龄的p53+ /－ 基因敲除小鼠各20 只,雌雄各半,测定其主要脏器质量及血液生理指标。结果不同周龄和性别的p53+ /－ 基因敲除小鼠部分脏器质量和血生理生化有差异性。4 周龄和8 周龄小鼠在体质量等这21 项指标上都有差异显著性( P ＜ 0. 01) ,且在左肾上腺等8 项指标上差异存在统计学意义( P ＜ 0. 05) 。4 周龄的雌、雄小鼠在ＲDW、总胆固醇( CHO) 这2 项指标上差异存在显著性( P ＜ 0. 01) ,仅肺这1 项指标上差异有统计学意义( P ＜ 0. 05) ,其余指标之间无明显差异; 而8 周龄雌雄小鼠在体质量等16 项指标上雌雄间都有显著性差异( P ＜ 0. 01) ,在HCT 等9 项指标上存在差异( P ＜ 0. 05) 。结论本文测定并比较了不同周龄及性别的p53+ /－ 基因敲除小鼠的脏器及血液生理生化指标,为该模型的合理利用及商业化供应提供了背景数据。     

不同福利条件下ICＲ 小鼠肝细胞NF-κB 表达的比较

摘要: 目的比较不同福利水平下ICＲ 小鼠肝脏NF-κB 的表达。方法选取6 周龄雄性ICＲ 小鼠,交叉使用制动和丰富环境干预形成不同的福利环境,观测小鼠的体质量增重、饲料能效及脾脏系数,ELISA 法测定血清IL-2 和COＲT,实时定量PCＲ 和免疫印迹法分别检测小鼠肝细胞内NF-κB p65 的mＲNA 和蛋白表达水平。结果与对照组相比,丰富环境组小鼠的体质量增重显著提高( P ＜ 0. 05) ,其他指标无差异( P ＞ 0. 05) ; 丰富环境+ 制动组小鼠的体质量增重、脾脏系数显著低于对照组( P ＜ 0. 05) ,而COＲT、NF-κB p65 的基因和蛋白表达显著高于对照组( P ＜0. 05) ; 制动组的体质量增重、饲料能效、脾脏系数及血清IL-2 均显著低于对照组( P ＜ 0. 05) ,COＲT、NF-κB p65 的基因和蛋白表达均显著高于对照组( P ＜ 0. 05) 。其中制动组的体质量增重显著低于丰富环境+ 制动组( P ＜0. 05) ,COＲT、NF-κB p65 的基因和蛋白表达显著高于丰富环境+ 制动组( P ＜ 0. 05) 。结论不同组别小鼠存在福利水平差异,NF-κB 表达差异与福利差异相类似,福利水平与NF-κB 表达水平之间存在紧密关联。     

ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠杂交群体的建立

摘要: 目的建立ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷的CＲG 小鼠杂交群体。方法将ＲAG2 基因缺陷小鼠与IL2ＲG 基因缺陷小鼠分别进行繁殖,选取ＲAG2 基因缺陷雄鼠ＲAG2( － / － ) 与IL2ＲG 基因缺陷雌鼠IL2ＲG( － / － ) 进行配对,培育杂交后代,通过PCＲ 扩增基因组ＲAG2 和IL2ＲG 基因进行鉴定; 应用流式细胞仪分析检测ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠外周血T 细胞( CD3 + ) 、B 细胞( CD19 + ) 和NK 细胞( CD49b + ) 含量; 并测定8—12 周龄ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠血液生理生化及主要脏器重量指标。结果成功繁育ＲAG2 基因缺陷小鼠和IL2ＲG 基因缺陷小鼠,筛选获得稳定的ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠并成功保种和扩群; 该双基因缺陷小鼠外周血淋巴细胞中T 细胞、B 细胞,NK 细胞比例显著降低( P ＜ 0. 05) ; 与相同周龄野生型C57BL/6 相比9 项血清生化指标无明显变化( P ＞ 0. 05) ; 18 项血液生理指标中红细胞( ＲBC) 和血红蛋白( HGB) 含量显著降低( P ＜ 0. 05) ; 白细胞( WBC) 、淋巴细胞数( LYMPH) 、淋巴细胞比率( LYM) 、单核细胞、中性细胞数( NEUT) 降低极显著( P ＜ 0. 01) ; 脾脏重量显著均低于野生型C57BL/6 小鼠( P ＜ 0. 05) ; 人肝肿瘤传代细胞移植于ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠后,肿瘤移植成功率和生长速率均明显高于亲本单基因缺陷小鼠( P ＜ 0. 05) ,成功获得了临床肝癌病人肿瘤组织的异种移植模型。结论 成功构建筛选出ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠杂交群体。     

裸小鼠的繁殖及在肿瘤学中的应用

目的　总结了八年实验动物裸小鼠繁殖和应用。方法　用随机抽取 2 0窝BALB/c裸小鼠繁殖生育情况分析和 5只BALB/c母鼠 (nu/ +)四胎生育情况比较。结果　BALB/c裸小鼠平均每胎产仔 9 35只 ,用nu/ +雌与nu/nu雄交配方法繁殖 ,平均每胎所得纯合子仔鼠能占仔数的 5 5 0 % ,离乳率 97% ,1～ 4胎生育恒定 ,一年存活率达10 0 % ,最长生存期可达 75 2d。微生物检测结果未发现致病菌 ,寄生虫等。结论　空气过滤十万级环境加上生物层流柜达一万级的条件 ,只要严格执行无菌操作 ,裸小鼠繁殖可基本达到SPF要求。     

B6-Trp53tm1 /NIFDC 小鼠在MNU 给药后的体质量、脏器质量、血液学及血生化指标的测定

摘要: 目的测定自主建立的p53 + / － 基因敲除小鼠( B6-Trp53tm1 /NIFDC) 在N-甲基-N-亚硝基脲( N-Methyl-Nnitrosourea,MNU) 给药后体质量、脏器质量、血液学及血生化指标,为临床前药物安全评价致癌性实验短期体内替代试验候选遗传修饰动物模型提供背景性数据。方法共设计4 个组: 阴性对照组( 野生型小鼠) 给予生理盐水、溶媒对照组( B6-Trp53tm1 /NIFDC 小鼠) 给予枸橼酸缓冲液、MNU 组1 ( B6-Trp53tm1 /NIFDC 小鼠) 给予75 mg /kg MNU、MNU 组2( 野生型小鼠) 给予75 mg /kg MNU,阴性对照组和MNU 组2 每组野生型小鼠各20 只,雌雄各半,溶媒对照组和MNU 组1 每组B6-Trp53tm1 /NIFDC 小鼠各20 只,雌雄各半,测定其体质量、主要脏器质量、相对脏器质量、血液学及血生化指标,并进行统计分析。结果MNU 组1、MNU 组2 动物体质量降低与阴性对照组、溶媒对照 组相比都存在显著性统计学差异( P ＜ 0. 05) 。MNU 组1、MNU 组2 动物心脏、肝脏、脾脏、肺脏、胸腺和颌下腺的绝对质量与阴性对照组、溶媒对照组相比有显著性统计学差异( P ＜ 0. 05) 。MNU 组1 和MNU 组2 动物心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑、胸腺和颌下腺的相对质量与阴性对照组、溶媒对照组相比有显著性统计学差异( P ＜ 0. 05) 。MNU 组1 和MNU 组2 动物均发现NEU、LYM%、LUC%、ＲBC、HGB、HCT、MCV、MCHC、ＲDW、HDW、CHCM、CHDW、PDW、MPV 及PLT 等15 个指标与阴性对照组和溶媒对照组相比有显著性统计学差异( P ＜ 0. 05) 。另外,MNU 组1 和MNU 组2 均发现TP、ALB、CＲEA、UＲEA、TCHO、TG、CA 等7 个指标与阴性对照组和溶媒对照组有显著性统计学差异( P ＜ 0. 05) ,MNU 组2 的AST 与阴性对照组和溶媒对照组有显著性升高( P ＜ 0. 05) ,但MNU 组1 和MNU 组2 组间没有显著性统计学差异。结论本文测定并分析了自主建立的p53 + / － 基因敲除小鼠( B6-Trp53tm1 /NIFDC) 和野生型小鼠分别给予MNU 及枸橼酸缓冲液后的体质量、脏器质量、血液学及血生化指标,该模型有望将来用于临床前药物安全评价致癌性实验短期体内替代试验。     

BALB/c和昆明（KM）小鼠脓毒症盲肠结扎穿孔模型的比较

目的比较应用BALB/c和昆明（KM）小鼠建立脓毒症盲肠结扎穿孔（Cecal Ligation and Puncture,CLP）模型的区别。方法 BALB/c和KM小鼠各30只,分别建立假手术组和CLP模型组,术后6 h进行血常规、生化检测、病理切片检查,术后72 h比较两种品系小鼠盲肠结扎模型的生存率。结果术后72 h两品系小鼠假手术组存活率均为100%,CLP组BALB/c小鼠存活率为40%,KM小鼠存活率为60%,BALB/c小鼠72 h生存能力低于KM小鼠（P〈0.05）。与各自品系的假手术组相比,BALB/c小鼠和KM小鼠在术后6 h白细胞上升,血小板下降,谷丙转氨酶、谷草转氨酶升高（p〈0.05）,肺损伤明显,而红细胞、尿素氮和肌酐无明显差异。结论 BALB/c小鼠较KM小鼠对脓毒症盲肠结扎模型的敏感度更高。     

IVC系统和屏障系统对SPF级小鼠繁殖能力影响的比较研究

目的比较相对洁净环境下使用独立通风笼盒（IVC）系统和传统屏障饲养环境条件对SPF级BALB/c和C57BL/6两种近交系小鼠繁殖性能和生长发育的影响。方法将8周龄的SPF级BALB/c和C57BL/6小鼠以雌雄2∶1比例随机饲养在IVC饲养环境和传统屏障饲养环境下7个月,观察比较两种品系小鼠不同胎次产仔数、不同周龄的体质量变化、离乳率和交配间隔时间等繁殖和生长能力指标。结果在IVC饲养环境下两种品系的小鼠不同胎次产仔数、哺乳期及离乳后仔鼠体质量,离乳存活率和交配分娩间隔时间等指标与传统的屏障饲养环境下的相同指标相比无显著差异（P〉0.05）。结论在相对洁净环境下使用IVC系统与屏障环境相比,小鼠繁殖能力无显著差异,小规模的实验动物可以在IVC系统中进行生产繁殖。     

Pumilio1/Pumilio2双基因条件性敲除小鼠模型的建立及基因型鉴定

目的建立及鉴定Pumilio1/Pumilio2(Pum1和Pum2)双基因条件性敲除的小鼠模型,为进一步研究PUF家族在哺乳动物精子发生中的生物学功能奠定基础。方法将构建的Pum1条件性敲除和Pum2条件性敲除的两个品系小鼠进行交配并繁殖,最终繁殖成功的子代小仔Pum1和Pum2两个基因均为纯合子。对子代以剪趾方式进行编号,提取子代小鼠脚趾或鼠尾基因组DNA,用PCR法和琼脂糖凝胶电泳鉴定基因型。结果 Pum1和Pum2双基因条件性敲除的小鼠模型繁殖成功,同时获得更多PUF家族双基因条件性敲除的小鼠。结论成功建立了Pum1和Pum2双基因条件性敲除的小鼠模型;正确的交配繁殖策略和鉴定方法是获得PUF家族双基因条件性敲除小鼠的有效途径。     

p53 基因敲除小鼠的饲养繁殖及鉴定

摘要: 目的为了繁育和鉴定p53 基因敲除小鼠,将引进的杂合子小鼠进行饲养繁殖,杂合子用于继续保种。方法 对其幼鼠剪尾提取基因组DNA,采用PCR 方法进行基因型鉴定。结果对引进小鼠已成功饲养和繁殖,并得到 纯合基因缺失型小鼠。结论正确的饲养、繁殖及基因鉴定方法对于基因敲除小鼠的获得和保种具有重要的意 义。     

甲型流感病毒感染BALB/c鼠动物模型的建立

目的:建立甲型流感病毒感染BALB/c鼠动物模型,为研究病毒变异、致病机制及抗病毒药物筛选提供模型动物.方法:通过滴鼻的方法将甲型流感病毒感染到BALB/c鼠,观察小鼠的症状和组织病理改变.结果:BALB/c鼠的临床症状明显,病理变化典型.结论:甲型流感病毒感染BALB/c鼠的疾病模型建成.     

咖啡因对 CUMS 抑郁模型小鼠行为的影响

摘要: 目的 探讨咖啡因对慢性不可预见轻度应激( Chronic unpredictable mild stress,CUMS) 抑郁模型小鼠行为的影响。方法 选用 C57BL/6J 小鼠 48 只,分为正常 + 生理盐水组、正常 + 30 mg / kg 咖啡因组、模型 + 生理盐水组和模型 + 咖啡因组( 分别为 5、15 和30 mg / kg) 6 个处理组。利用制作的 CUMS 抑郁模型,分别给予生理盐水作对照或用不同剂量的咖啡因进行干预,持续造模 22 d,观察小鼠的体质量增长变化,用旷场实验及液体消耗实验测定小鼠行为改变。结果 造模 22 d 后,与正常 + 生理盐水组小鼠相比,模型 + 生理盐水组小鼠的体质量增长、水平垂直运动、液体消耗均未达到显著差异( P ＞ 0. 05) 。与模型 + 生理盐水组小鼠相比,模型 + 咖啡因组( 5 mg / kg 和 30 mg /kg) 小鼠的糖水消耗量和糖水偏爱百分比显著增高( P ＜ 0. 05) 。结论 实验表明 CUMS 抑郁模型用 C57BL/6J 小鼠较难成功建构; 咖啡因对小鼠 CUMS 抑郁模型的行为改变有部分改善作用,并呈剂量相关性; 同时证明咖啡因的行为改善作用不是通过兴奋大脑皮层所致。该实验结果提示咖啡因具有潜在的抗抑郁作用。     

饲料硬度对BALB/c裸小鼠生长性能的影响

目的裸小鼠是免疫缺陷动物,饲料硬度对其采食性能及生长影响较大。研究和生产适合裸小鼠采食、硬度适宜并可提高利用率的颗粒饲料,以满足其正常生长。方法 SPF级10周龄BALB/c裸鼠240只,雌雄各半,随机分为实验Ⅰ组、实验Ⅱ组、实验Ⅲ组、实验Ⅳ、实验Ⅴ和实验Ⅵ组。实验Ⅰ-Ⅵ分别给予硬度为83.3N、96.0N、112.7N、132.3N、149.0N和181.3N的颗粒饲料,观察不同饲料硬度对裸鼠体质量增加的效果。结果各实验组动物生长情况显示,83.3N、96.0N、112.7N等3个实验组裸小鼠的体质量增加明显;随着饲料硬度增加,裸小鼠体质量增加量呈下降趋势。结论饲料硬度控制在108-137N范围,BALB/c裸小鼠生长性能良好,还可提高裸小鼠对饲料的利用率。     

高龄五指山小型猪近交系血液生化指标测定

目的 了解猪龄和性别对五指山小型猪（WZSP）近交系血液生化指标的影响.方法 WZSP近交系F17、F186月龄青年猪34头（7 ♂,27♀）,5-6高龄猪21头（8 ♂,13♀）,禁食12 h后经由前腔静脉采血,用全自动生化分析仪检测血液生化指标.结果 青年猪和高龄猪有部分血液生化指标具有性别差异（P＜0.05）,其中青年猪有3项高龄猪有7项;青年猪和高龄猪有16项血清生化指标具有差异（P＜0.05）.结论 WZSP近交系血液生化指标有着明显的年龄差异,这对选用高龄猪作为人类老年化动物模型提供了基础参考数据.     

db /db 鼠糖尿病视网膜病变成模率的观察

摘要: 目的 观察db /db 鼠糖尿病视网膜病变( diabetic retinopathy,DR) 的成模情况。方法每月取尾尖毛细血管血测小鼠空腹血糖值及体质量一次,共7 次。7 个月后,取10 只db /db 鼠和6 只db /m 鼠( 正常对照组) 做闪光视网膜电图( Flash electroretinogram,F-ERG) 检测。结果db /db 鼠的体质量明显上升; 但血糖值上升趋势不明显,实验组97%小鼠的血糖值未达到DR 小鼠模型的血糖值( 11. 1 mmol /L) 。F-ERG 统计结果表明,实验组a 波和b 波的潜伏时比对照组延长,差异有统计学意义( P ＜ 0. 01) ; 实验组b 波的振幅与对照组相比,差异有统计学意义( P ＜0. 01) ; 实验组Ops 总波及O2的振幅与对照组相比,差异有统计学意义( P ＜ 0. 01) 。结论本实验中db /db 鼠的空腹血糖值虽大部分未达标,但其视网膜已出现DＲ 的早期改变。造模标准不能仅依靠空腹血糖值,还应结合视网膜的病变情况。db /db 鼠的成模标准有待进一步研究及完善。     

两种不同商品饲料对BALB/c小鼠生长和繁殖性能的影响

目的比较两种小同营养水平的商品饲料对BALB/c小鼠生长和繁殖性能的影响,为实验小鼠生产中合理使用饲料提供科学依据。方法选择BALB/c母鼠32只、仔鼠18窝以及生长鼠20只,分别随机分为2组,饲喂A、B两种不同营养水平的商品饲料,测定母鼠窝产仔数、连胎率,仔鼠0~3周窝重以及生长鼠4~10周体重等指标,并进行统计学分析。结果营养水平略高的A饲料有利于提高BALB/c小鼠连胎率及其仔鼠生长性能,但对窝产仔数和生长鼠后期的生长性能无显著影响。     

凹土玉米芯垫料对 KM 小鼠安全性影响的研究

摘要: 目的 观察非专业加工制作的普通刨花垫料、玉米秸垫料和凹土玉米芯垫料对 KM 小鼠体质量、血液生化指 标、脏器病理组织学变化等的影响。方法 KM 小鼠 80 只,随机分为 4 组,每组 20 只,雌雄各半,分别使用普通刨 花、玉米秸和凹土玉米芯垫料,对照组不使用垫料,在相同饲养环境下饲养 4 周后,观察相应指标。结果 凹土玉 米芯组、玉米秸组与普通刨花组比较,小鼠体质量无显著性差异,P ＞ 0. 05; 普通刨花组雄性小鼠在第 3 周时体质量 明显减低,与凹土玉米芯组比较有显著性差异,P ＜ 0. 05。与凹土玉米芯组比较,普通刨花垫料组雌性、雄性小鼠的 乳酸脱氢酶含量均有显著性升高,乙醇脱氢酶有显著性降低。普通刨花组小鼠与凹土玉米芯组小鼠比较谷丙转氨 酶含量显著升高,玉米秸垫料组小鼠与凹土玉米芯组小鼠比较谷丙转氨酶升高。各组 KM 小鼠大体观察及解剖观 察均未见异常,镜下观察组织切片,肺、心脏、肝、脾、胰腺、肾、膀胱、睾丸、卵巢均未见有意义的病理改变。结论 凹土玉米芯垫料对小鼠的体质量及生化指标的影响较小,是实验动物接触性长期使用比较理想的垫料。     

饲料中去皮豆粕替代鱼粉对埃及胡子鲇消化酶活力和肠道组织的影响

以初始体质量(22.40±0.30)g的健康埃及胡子鲇Clarias lazera为试验对象,在室内单循环控温养殖系统中进行8周饲养试验,以鱼粉为动物蛋白源,去皮豆粕为植物蛋白源,去皮豆粕分别替代0%(CK),15%,30%,45%和60%的鱼粉蛋白,配制成5种等蛋白(40%)等能(15.8 MJ/kg)的半精制饲料,研究去皮豆粕替代鱼粉对埃及胡子鲇消化酶活力及肠道组织的影响。结果表明,埃及胡子鲇胃蛋白酶活力去皮豆粕组显著低于对照组(P0.05),30%,45%和60%去皮豆粕替代组中肠和肝胰脏蛋白酶活力显著低于对照组(P0.05),45%和60%去皮豆粕替代组的前肠和后肠蛋白酶活力显著下降(P0.05)。当去皮豆粕替代鱼粉45%和60%时,后肠淀粉酶活力显著低于对照组(P0.05)。但埃及胡子鲇的胃、肝胰脏、前肠和中肠淀粉酶活力各组之间差异不显著(P0.05)。去皮豆粕对埃及胡子鲇的脂肪酶活力影响不显著(P0.05)。去皮豆粕替代鱼粉对埃及胡子鲇肠道组织结构具有一定的影响。当去皮豆粕替代鱼粉蛋白45%和60%时,埃及胡子鲇的中肠和后肠肠道组织结构完整性被破坏,部分肠绒毛脱落,部分上皮细胞与固有层分离,固有层结缔组织疏松,固有层变宽,肠长、肠体指数、肠长指数、肠道皱襞高度显著下降(P0.05)。