金鱼草Del基因影响烟草花色素苷的研究

采用根癌农杆菌介导法,获得转Ｄｅｌ基因的转基因烟草植株．对９株可能的转基因植株（Ｔ０代）ＤＮＡ进行ＮＰＴⅡ基因的ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交分析,其中８株显示ＮＰＴⅡ基因阳性．对其中５株开花的阳性植株进行ＤｅｌＤＮＡ的ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交分析,全部显示ＤｅｌＤＮＡ阳性．Ｋｍ抗性Ｔ１代转基因植株ＤＮＡ进行ＤｅｌＤＮＡ的ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交分析,结果显示全部含有ＤｅｌＤＮＡ．在５３０ｎｍ处测量Ｔ０代转基因植株中花色素苷含量和分布情况,３株转基因烟草的花萼、花冠和雄蕊部位花色素苷含量增加,而在雌蕊和叶中减少．在一定程度上验证了Ｄｅｌ基因的生物学功能,证实并补充了Ｇｏｏｄｒｉｃｈ等关于色素沉积模式的论述．     

根癌农杆菌介导AtNHX1基因转化小麦

利用根癌农杆菌对 3种基因型小麦进行了转化研究 .发现基因型对转化有明显影响 .将小麦品种烟优 36 1、烟 10 3、核生 3号的胚性愈伤组织用含报告基因NPTⅡ和抗盐基因Na H 反向转运AtNHX1的农杆菌菌株pROK2AT GV310 1感染和共培养后 ,用巴龙霉素 5 0 - 15 0mg L筛选抗性愈伤组织及转化植株 .对抗性植株的总DNA用AtNHX1基因的特异引物进行PCR检测 ,目的基因的PCR阳性频率为 1.3(烟 10 3)和 2 .9% (核生 3号 ) .Southern杂交证实外源基因已经整合到小麦的基因组中     

一个NBS-LRR蛋白质基因转化水稻及其超量表达

水稻Osxoc1334是一个编码NBS-LRR类蛋白质的基因,通过构建该基因的超量表达载体,并在农杆菌EHA105介导下转化中花11号水稻,最终获得6株再生水稻植株.对抗性愈伤组织和再生植株用GUS组织化学染色检测,结果抗性愈伤组织和6株再生水稻植株均可染上蓝色,而野生型植株不变色,用潮霉素磷酸转移酶基因的特异引物进行PCR鉴定,再生植株均可扩增到目标条带而野生型植株则不能,表明Osxoc1334基因已随T-DNA整合到再生水稻植株基因组中.采用半定量和荧光定量PCR分析转基因水稻的Osxoc1334基因表达,结果其中3株转基因植株的Osxoc1334基因平均相对表达量明显增强,其中1株为野生型植株的23.5倍.这为进一步鉴定该基因功能奠定了基础.     

表达雪花莲外源凝集素基因的油菜转基因植株的获得

利用农杆菌素LBA4404（pCAMBIA3300RG)转化优良甘蓝型油菜恢复系W723的下胚轴节段.pCAM-BIA3300RG含有Rssl启动子引导的雪花莲外源凝集素基因（gna）和CaMV-35S启动子引导的除草剂抗性基因（bar）。经过两轮除草剂（2.5mg/L bialaphos）筛选（两周/轮）,除草剂抗性再生芽被传入生根培养基中生根,对根系旺盛生长的植株中所含gna基因进行PCR分析,PCR分析证实了这些植株确为转基因植株,利用Western印迹法对随机选择的5株含gna基因的转基因植株的分析发现,其中4株表达了gna基因。目前正对这些表达gna基因的转基因植株进行后代遗传分离分析。     

辣椒的离体再生及抗虫基因转化的研究

研究建立起一套简单、高效的辣椒遗传转化系统。利用根癌农杆菌介导带柄子叶,将豇豆胰蛋白酶抑制剂（CpTI)基因转入辣椒栽培品种“益都羊角椒”中。对获得的33株卡那霉素（Km)抗性植物进行PCR检测,证明有6株为转CpTI基因植株。通过对转基因植株进行抗虫性研究,发现R1代植株对棉铃虫表达出一定的抗性,但不同转化体之间其抗性存在着差异。     

甘蓝型油菜3个AP3重复基因植物反义表达载体的构建及遗传转化

利用pFGC5941构建了甘蓝型油菜3个AP3重复基因的植物反义表达载体pFGC5941-BnAP3-2、pFGC5941-BnAP3-3和 pFGC5941-BnAP3-4.采用快速冻融法,将载体导入农杆菌EHA105,转化甘蓝型油菜下胚轴.在5mg/L PPT的MS培养基中筛选,获得反义BnAP3-2基因的抗性再生植株31株,反义BnAP3-3基因的抗性再生植株20株,反义BnAP3-4基因的抗性再生植株42株.PCR鉴定结果显示,获得BnAP3-2反义的基因植株12株,BnAP3-3反义的转基因植     

柚子转化的研究

本文报道一个简便的转化实验。柚子能被含Ti质粒的农杆菌感染。Ti质粒带有一个npt-Ⅱ基因和一个胭脂碱合成酶基因。卡那霉素抗性绿苗经NPT-Ⅱ酶活性测定和DNA分子杂交试验证明外源基因己导入柚子。     

油菜耐热基因（BnTR1）转化多年生黑麦草丛生芽的研究

油菜耐热基因(BnTR1)克隆自油菜,编码一种E3连接酶.为验证它的抗逆功能,本研究用携带BnTR1和新霉素磷酸转移酶(neomycin phosphotransferase,nptⅡ)基因的植物表达载体pCAMBIA2301-TR1的根癌农杆菌EHA105,对多年生黑麦草丛生芽进行遗传转化.经共培养和巴龙霉素筛选培养,获得了175株抗性植株.通过PCR和RT-PCR检测,获得62株转基因植株.结果表明,外源BnTR1基因已整合到转基因植株基因组中并在转录水平上表达.初步抗旱检测表明,BnTR1基因能明显提高转基因植株的抗逆能力.     

NPR1和Defensin双价抗病基因过量表达载体构建及其对沙田柚的遗传转化

通过PCR技术,从克里曼丁橘和荔枝品种"三月红"叶片中克隆获得了NPR1和Defensin基因序列.以p BI-121作为载体骨架,构建了NPR1和Defensin双价抗病基因过量表达载体,命名为ND-p BI121.通过根癌农杆菌介导的遗传转化,获得了6株PCR检测为阳性的双抗沙田柚植株,为探究NPR1和Defensin基因的过量表达对柑橘黄龙病的抗性影响提供试材.     

农杆菌介导的大豆反义fad2-1基因转化烟草研究

以烟草无菌苗叶片为外植体,通过根癌农杆菌介导法,将大豆反义油酸脱饱和酶基因导入烟草中,经梯度卡那霉素筛选,获得可在含75mg/L卡那霉素选择生根培养基上再生的抗性植株75株,其中67株抗卡那霉素植株的PCR分析扩增出目的片段;RT-PCR分析表明该基因在烟草中表达.结果表明大豆反义油酸脱饱和酶基因在烟草基因组中整合和表达.这为大豆反义油酸脱饱和酶基因转入大豆和表达奠定基础,也为烟草基因工程育种提供了依据.     

转基因棉PCR与卡那霉素检测的比较

对尚未提纯的转基因棉１７９自交后代进行卡那霉素检测和ＰＣ检测,结果表明卡那霉素检测与ＰＣＲ检测结果一致;抗卡那霉素植株ＰＣＲ检测均呈阳性,而对卡那霉素敏感植株均未扩增出特异性带。     

生菜遗传转化受体系统的建立及鲑鱼降钙素基因的导入

以散叶生菜大速生(Lactuca sativa var.capatata L.)为试材，以MS为基本培养基。采用不同激素配比，确定生菜高效诱芽培养基为MS 0．1 mg／L6-BA 0．05mg／LNAA；抗生素敏感性试验表明，筛选培养基中适宜的卡那霉素选择压为75mg／L，抑菌剂羧苄青霉素的适宜质量浓度为300mg／L；通过根癌农杆菌介导的叶盘法将鲑鱼降钙素(sCT)基因转入大速生散叶生菜，PCR检测转化率达25．4％。     

Stable expression of Arabidopsis vacuolar Na+/H+ antiporter gene AtNHX1, and salt tolerance in transgenic soybean for over six generations

The Arabidopsis vacuolar Na+/H+ antiporter gene,AtNHX1,was introduced into soybean by Agrobacterium-mediated transformation.Four independent kanamycin resistant lines were obtained.The result of PCR,Southern blotting and Northern blotting analyses demonstrated that the AtNHX1 gene was successfully inserted into the soybean genome and stably expressed in these kanamycin resistant lines.The stability of AtNHX1 expression and salt resistance were evaluated in the soybean transformants for over 6 generations.Tw...     

分子印迹传感器检测卡那霉素

利用分子印迹技术、结合壳聚糖-碳纳米管复合物和纳米金构建快速检测卡那霉素的分子印迹传感器。用电聚合法将分子印迹聚合物聚合到金电极上,采用循环伏安法和安培法经电化学工作站检测传感器的电流响应。结果表明:该传感器的检测线性范围为3×10-8～4×10-5mol·L-1(r=0.988),最低检测限为1.29×10-8mol.L-1(信噪比为3)。重复实验的相对标准偏差为3.6%。     

4种抗生素对菘蓝外植体生长的影响

对抗生素卡拉霉素和潮霉素进行菘蓝外植体抗性浓度筛选，结果表明不同外植体具有不同抗性．子叶芽分化阶段，卡拉霉素和潮霉素筛选浓度范围分别为10-50mg／L和5-30mg／L；下胚轴芽分化阶段的筛选浓度分别为15-50mg／L和10-30mg/L；分化苗生根时筛选浓度分别为30mg/L和20mg/L．芽分化阶段宜使用头孢霉素为抗菌剂，但分化苗生根时宜选用羧苄青霉素．     

四种海洋致病弧菌对抗生素敏感性的测定

测定了4种海洋致病弧菌对8种常用抗生素药物的敏感性．测试结果表明，鳗弧菌对氯霉素、庆大霉素具有敏感性，但对其他所测药物均表现出耐药性；副溶血弧菌对四环素、卡那霉素、青霉素表现出耐药性，而对氯霉素、头孢娄新、庆大霉素、红霉素和链霉素则表现出敏感性；河流弧菌对四环素、链霉素表现出耐药性，对氯霉素、卡那霉素、头孢娄新、庆大霉素、青霉素和红霉素则表现出敏感性；溶藻弧菌仅对四环素表现出耐药性，对其他7种抗生素均表现出敏感性．同时针对表现出抗药性的药物，相应地确定了它们的最小抑菌质量浓度值．     

棉花叶片对卡那霉素反应效果的研究

利用不同浓度的卡那霉素对棉花叶片进行处理,较为系统地研究了棉花不同品种、不同叶位、不同生育时期内叶片对卡那霉素处理的反应。研究表明,不同棉花品种间叶片对卡那霉素处理的反应呈相同的变化趋势,彼此间差异不显著。不同叶位之间,随着叶龄的不断增长,其对卡那霉素抗性显著增强。同时随着生育期延后,相同部位的棉花叶片对卡那霉素抗性表现出明显增强的趋势     

小球藻基因工程选择标记研究

研究了小球藻对10种常见抗生素:庆大霉素、新霉素、氨苄青霉素、卡那霉素、头孢霉素、链霉素、G418、潮霉素、Zeocin和氯霉素的敏感性,发现小球藻对庆大霉素、新霉素、氨苄青霉素、卡那霉素、头孢霉素和链霉素不敏感;对G418和潮霉素较敏感;对Zeocin和氯霉素最敏感.利用统计学的方法和原理,确定了G418、潮霉素、Zeocin和氯霉素在海水培养基和淡化10倍的培养基中对小球藻的半致死剂量和95%可信限.为筛选出小球藻基因工程藻株的选择试剂,建立其遗传转化系统奠定了基础.     

农杆菌介导的白芥防御素基因对甘蓝型油菜的转化

通过根癌农杆菌介导将正向和反向插入白芥防御素基因的pBI121重组质粒转入甘蓝型油菜的下胚轴，经组织培养和抗性筛选获得再生植株. PCR检测后，初步鉴定为阳性植株.     

利用人内皮抑素基因构建植物表达载体及对烟草的遗传转化

将人内皮抑素(endostatin)基因重组于植物双元表达载体pGA 643,得到重组质粒pGE.用三亲融合法将其导入农杆菌LBA 4404中,采用叶盘法转化烟草,经诱导与筛选,获得了卡那霉素抗性植株.提取抗性植株总DNA,通过PCR扩增和Sou thern杂交检测,筛选出了整合有外源基因的转化植株.为进一步研究人内皮抑素在烟草中的表达及生物学功能奠定了基础.