猪多杀性巴氏杆菌(PM)PCR诊断技术的建立

参照文献报道的猪多杀性巴氏杆菌（PM）基因组的部分序列,设计合成引物,建立了PM的PCR诊断技术,并对各反应条件进行优化.本实验建立的PM的PCR扩增片段大小为457 bp.以建立的PCR方法对临床送检的可疑病猪的肺部病料进行了特异性检测和敏感性试验及生化鉴定.结果表明PCR检测阳性结果与猪多杀性巴氏杆菌的形态染色、培养特性和生化鉴定结果一致,该PCR方法在临床诊断中具有应用价值.     

多杀性巴氏杆菌抗原的研究进展

多杀性巴氏杆菌在自然界分布广泛,是畜、禽、野生动物及人类的一种共惠性病原．可以在同种和不同种的动物间传染,可以引起多种畜禽巴氏杆菌病,主要就多杀性巴氏杆菌的抗原成分进行概述．     

雏鸭鸭疫巴氏杆菌和多杀性巴氏杆菌混合感染的诊治

对成都市郊某肉种鸭场爆发的雏鸭疾病，通过流行病学调查、临床症状、病理变化观察、病原分离鉴定、确诊为鸭疫巴氏杆菌和多杀性巴氏杆菌混合感染．在药敏试验的基础上，对１７００多只病鸭用两菌高度敏感的抗菌药物进行治疗，疗效显著，治愈率达９８％．     

多杀性巴氏杆菌外膜蛋白单克隆抗体对兔及鼠巴氏杆菌病的保护

用兔子分离的多杀性巴氏杆菌(P.multocida)免疫小鼠得脾细胞,与骨髓瘤细胞融合后制备针对37.5KDa外膜蛋白的单克隆抗体(MAbs)。用酶联免疫吸附试验(ELISA),全细胞放射免疫沉淀试验(WCRIP),免疫印迹分析筛选所需MAbs。WC-RIP和免疫印迹试验表明,用完整多杀性巴氏杆菌吸附及洗脱的MAb1608,其识别的抗原暴露于细胞表面,抗体易于接近,其分子量为37.5KDa,蛋白酶K处理多杀性巴氏杆菌外膜,MAb1608的活性完全消除,说明此MAb结合于某一蛋白抗原决定簇。在免疫印迹试验中MAbl6108与提纯的脂多糖(LPS)无反应。被动转移研究表明与对照组比,鼻内接种MAb1608并同时鼻内攻毒的9只家兔其死亡率、肺炎严重程度、非呼吸道脏器和鼻腔中多杀性巴氏杆菌数量都明显要低。肺中多杀巴菌数量减少84.750倍。被动转移试验也表明MAb1608保护鼠免受具有该MAb识别抗原决定簇的同源或异源多杀巴菌株的攻击。但是,当用缺乏MAb1608识别抗原决定簇的多杀巴菌株攻击鼠时,MAb1608不提供保护作用。本研究表明37.5KDa外膜蛋白是保护性MAb的作用靶。     

PCR检测乳粉中肺炎克雷伯氏菌

利用PCR技术直接检测乳粉中的肺炎克雷伯氏菌,无需增菌.通过滤膜法成功地从人工污染肺炎克雷伯氏菌的乳粉中提取了肺炎克雷伯氏菌的DNA.以肺炎克雷伯氏菌的间区序列(ITS)为靶基因,经过PCR扩增得到158 bp的产物,经过DNA测序证实该产物为目的扩增产物.该方法灵敏度高,乳粉中检测的灵敏度为10CFU/mL,可在6 h内完成对乳品中肺炎克雷伯氏菌的检测,比目前普遍采用的先增菌再进行PCR检测的方法缩短了12-24 h.     

多杀性巴氏杆菌幽灵的研究

采用基因工程方法,将PhiX174噬菌体裂解基因E和温敏控制表达系统与质粒pPBA1100基因杂交,构建了重组子pPBA1100-E.将重组子转化到多杀性巴氏杆菌中,通过温度诱导使裂解基因表达.用限制性内切酶检验重组子.扫描电镜观察多杀性巴氏杆菌细菌幽灵和菌落形成单位评价遗传灭活率.结果表明:重组质粒经限制性内切酶酶切鉴定,琼脂糖电泳呈现三条谱带,相对分子质量与理论值一致.扫描电镜观察显示,重组子在多杀性巴氏杆菌中成功表达,获得了细菌幽灵.菌落形成单位检验结果显示,多杀性巴氏杆菌遗传灭活率达到99%.     

美洲雁源金黄色葡萄球菌的PCR检测

本试验对从临床病死美洲雁的病料中分离得到的一株致病菌进行了16s rRNA基因片段的扩增,将扩增产物与pMD18-T载体连接构建克隆载体,经PCR和酶切鉴定正确后测序,测序结果与GenBank中已注册菌株的16s rRNA基因序列进行同源性比较,结果与金黄色葡萄球菌的序列同源性达到97%.由此判定感染病鸭的是金黄色葡萄球菌.     

禽病消对禽多杀性巴氏杆菌的体外抑菌试验

本试验应用体外抑菌试验的试管法对复方敌菌净、喹乙醇单方和两药复方(禽病消)对禽多杀性巴氏杆菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)进行了测定.单方时复方敌菌净和喹乙醇的MIC分别为48μg/ml和6μg/ml,MBC分别为120μg/ml和15μg/ml,复方制剂(禽病消)中的复方敌菌净和喹乙醇的MIC分别为3.84μg/ml和0.84μg/ml,MBC分别为24μg/ml和3μg/ml,FIC指数为0.16,禽病消对禽多杀性巴氏杆菌的抗菌作用较复方敌菌净、喹乙醇两药单独应用时增强了12.5—32倍,结果说明:复方敌菌冷与喹乙醇联合应用具有明显的协同作用,禽病消组方合理,是防治禽巴氏杆菌病的有效复方新制剂.     

牦牛多杀性巴氏杆菌地方血清型灭活疫苗免疫效果评价

为评价牦牛多杀性巴氏杆菌地方血清型灭活疫苗对青海省牦牛群的免疫效果,本研究进行了地方血清型野生株P0910与疫苗株C45-2两种灭活疫苗的免疫效果对比试验.通过复苏疫苗株C45-2和地方血清型野生株P0910,用甲醛灭活后将菌液分别按5∶1的比例加入灭菌的Al(OH)3胶进行两种多杀性巴氏杆菌灭活疫苗的制备,并对疫苗进...     

海狸鼠多杀性巴氏杆菌和鼠伤寒沙门氏菌混合感染的诊断报告

某海狸鼠原种场自1993年4月起陆续有海狸鼠发病,病鼠以幼鼠最多.主要临床表现为腹泻、体温升高,死前鼻流脓性分泌物或口鼻出血.病理学检查见死鼠多呈败血症,部分死鼠具卡他一出血性肠炎病变.经微生物学检查,确诊为多杀性巴氏杆菌和鼠伤寒沙门氏菌混合感染.     

新疆牦牛多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药物敏感实验

为确诊新疆某牦牛场的某疾病的发病病源,控制病情蔓延,对该病病原进行分离培养、小白鼠致病性试验、生化鉴定、PCR鉴定。结果表明:得到6株多杀性巴氏杆菌;这6株分离菌均对庆大霉素、四环素、链霉素、磺胺、土霉素等药物敏感;根据多杀性巴氏杆菌KMT-1基因扩增了1条457bp的特异性条带,对其进行测序分析,结果表明其与GenBank提交的12条多杀性巴氏杆菌KMT-1基因序列同源性达97%～99%。     

禽多杀性巴氏杆菌X-73株ompH基因的克隆和表达

以禽多杀性巴氏杆菌国际标准株X-73基因组DNA为模板,采用PCR扩增得到编码信号肽除外的成熟外膜蛋白H的ompH基因,将ompH基因克隆至pMAL-p2X表达载体中,构建重组表达质粒pMAL-p2X-ompH,转化大肠杆菌BL21,用SDS-PAGE电泳检测IPTG诱导后的表达蛋白.DNA测序结果表明ompH基因片段大小为1 002 bp,与已报道的ompH基因的核苷酸序列完全相同、而SDS-PAGE结果显示表达分子质量约为78 ku,与预期的融合蛋白MBP-OmpH分子质量相符,表明成功构建出原核表达质粒并实现了目的蛋白表达,为进一步开展禽多杀性巴氏杆菌保护抗原的研究奠定基础.     

兔、禽多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗的研制

该项目特点为制苗菌株经多年筛选,毒力强,免疫原性好.用其免疫兔、鸡,可抗不同血清型强毒的攻击,对兔、禽均有较好的免疫保护力.又由于是灭活疫苗,故安全性好,还适宜于在疫区用于紧急预防接种,且在免疫的同时也不影响使用抗生素.     

乳粉中常见致病菌的多重荧光PCR检测

利用多重荧光PCR技术快速检测乳粉中的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌.以沙门氏菌的invA基因、志贺氏菌的ipaH基因、金黄色葡萄球菌的nuc基因为靶基因,选择特异性引物,以参照菌种为对象,验证引物的特异性,建立多重荧光PCR检测方法,人工添加沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌,确定方法的检出限.结果表明该方法特异性强、灵敏度高,乳粉中检测的灵敏度为1CFU/mL,可在8h内完成对乳品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌的检测.     

大理学院附属医院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药性研究

目的:对大理学院附属医院2011年至2012年临床分离的大肠埃希菌及肺炎克雷伯杆菌的耐药性进行分析,指导临床合理应用抗生素。方法:菌株分离及培养按常规方法进行,细菌鉴定采用VITET-2 Compact 60全自动微生物分析仪,药敏试验采用K-B法。结果:共收集标本183株,其中大肠埃希菌146株:口痰92株(63%)、分泌物17株(11.6%)、尿液16株(10.9%),脓液9株(6.1%),其他12株(8.2%);肺炎克雷伯杆菌37株:口痰27株(73%)、分泌物5株(13.5%)、脓液3株(8%)其他2株(5.4%)。药敏试验结果显示:大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌对头孢哌酮、阿米卡星、亚胺培南等耐药率较低,分别为10.3%、6.2%、2.7%和10.8%、13.5%、2.7%。结论:大肠埃希菌及肺炎克雷伯杆菌两年痰液中检出率呈上升趋势,对左氧氟沙星、头孢唑啉,氨曲南,头孢他啶等耐药率超过50%,特别是头孢他啶的耐药率相对于2008年显著升高,而对头孢哌酮、阿米卡星、亚胺培南等耐药性较低,临床应根据药敏实验合理选择抗生素。     

SPF级实验小鼠4种致病菌多重PCR方法的建立及优化

目的 建立一种可同时检测4种SPF级屏障环境常见致病菌的多重PCR方法。方法 本研究针对鼠伤寒沙门氏菌invA基因、肺炎克雷伯杆菌khe基因、嗜肺巴斯德菌16SrRNA基因、铜绿假单胞菌ecfX基因序列分别设计合成特异性引物,构建可同时鉴别4种菌的多重PCR反应体系,优化后测定其特异性、灵敏性并人工模拟感染样本。结果 建立的4重PCR方法能对同一样品中的4种致病菌模板进行特异性扩增,无交叉反应;对4种目的菌的检测灵敏度为10-3ng/μL;也可从混合感染的病料中特异性地检测出4种致病菌。结论 本试验建立的多重PCR方法具有快速、简便、灵敏的特点,为4种致病菌的快速诊断和监控提供了有效的技术支持。     

家兔D型巴氏杆菌病的实验病理学研究

由慢性肺脓肿的兔病例中分离的Ｄ型多杀性巴氏杆菌进行了人工感染２０～４Ｏ日龄、６０～９０日龄家兔的实验，结果表明，两组家兔经胸腔、鼻腔感染造成的病变与自然病例相似，即纤维素性化脓性胸膜肺炎；经皮下感染引起弥漫性蜂窝织炎；经静脉、肌肉感染可产生败血症。Ｄ型多杀性巴氏杆菌引起的病变和Ａ型所引起的病变相似。     

新型氨气传感器检测肺炎克雷伯菌的应用

提出了一种通过自行研制的聚苯胺/TiO2-PQC新型氨气传感器来实现迅速定量检测肺炎克雷伯菌的方法。该方法是利用肺炎克雷伯菌在有尿素的存在下能够产生大量的氨气和二氧化碳,此时产生的氨气能够与自制的聚苯胺/TiO2-PQC氨气传感器反应,并引起其表面电参数的变化,信号通过电脑输出,从而达到检测肺炎克雷伯菌的目的。经过研究结果显示,与SPQC相比新方法操作简单,更加灵敏以及不需要特定的培养基等特性,而且能够实现定量实时监测肺炎克雷伯菌。     

一株罕见不携带rmpA、rmpA2的多药耐药高毒力肺炎克雷伯菌临床分离株（英文）

肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)是一种臭名昭著的机会致病菌,尤以高毒力肺炎克雷伯菌(Hypervirulent K. pneumoniae, hvKp)为重。幸运的是,多数hvKp对抗生素敏感。然而,近年来,多药耐药hvKp(multidrug-resistant hvKp, MDR-hvKp)引发病症的报告剧增,威胁着全世界人民的健康和安全。本研究报告了一例感染了不携带rmpA和rmpA2的MDR-hvKp的92岁慢性阻塞性肺疾病患者的病例。患者在住院后第8天去世。对患者痰液中分离得到的肺炎克雷伯菌21072329进行表型实验和全基因组测序,结果显示,21072329属于ST11-KL47 MDR-hvkp,该菌株对大蜡螟具有较高的致死率。同时,21072329有着较强的粘性,难以将其完全离心。21072329携带ESBL(extended spectrum beta-lactamase)基因(bla_CTX-M-65, bla_SHV-158,和bla_TEM-1)和碳青霉烯酶基因(bla