BFA对小鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性影响的初步研究

为了了解BFA对动物免疫细胞增殖的影响,以伴刀豆球蛋白(Con A)作为阳性药,用MTT法检测了BFA对小鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性的影响.实验结果显示,极低浓度的BFA对小鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性就有显著的促进作用,其促进效果与Con A相似.且不同浓度的BFA的促进作用在一定范围内显示正量效关系.在过高浓度的BFA作用下,虽然量效关系不明显,但未出现抑制作用.证明BFA在淋巴细胞转化阶段对于细胞免疫有显著的增强作用.而且BFA的毒性极小,大量使用不易出现毒副作用.     

CCK-8法和MTT法检测人前列腺癌PC3细胞活性的最佳条件比较研究

以人前列腺癌PC3细胞作为研究对象,探讨了CCK-8法和MTT法的最佳实验条件。CCK-8的最佳检测波长为450nm,最佳检测时间为加入CCK-8试剂后4h,适宜细胞数量范围为8×10^2-1×10^5个。在检测抗肿瘤药物阿霉素（ADM）对PC3细胞的增殖影响实验中,发现CCK-8法测得数据的线性相关性优于MTT法,并且数据偏差较MTT法小。实验结果表明CCK-8法较MTT法检测的灵敏度高,准确性好,是一种优于MTT法的检测细胞增殖活性的方法。     

甜菜碱对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用

研究甜菜碱对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用.应用MTT法观察体外甜菜碱在不同浓度、不同时间对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响,应用流式细胞仪（FCM）测小鼠脾淋巴细胞在不同时间周期的变化.结果表明,甜菜碱终浓度0.4、4、20 mmol/L均可促淋巴细胞增值,但终浓度4 mmol/L效果最为明显,在甜菜碱刺激24、48、72 h后,淋巴细胞均可显著增值,但随时间的加倍,增值幅度并不明显,综合考虑,24 h效果更好.终浓度4 mmol/L甜菜碱不同时间均可促进淋巴细胞由G0/G1期进入S期,且作用18 h效果最明显,其G0/G1期由97.03%下降到89.99%,S期由2.58%升高到9.08%.到24 h后,其诱导作用反而有些下降.因此,甜菜碱4 mmol/L作用24 h促淋巴细胞增殖最为理想.4 mmol/L的甜菜碱18 h促进淋巴细胞由G0/G1期进入S期的作用效果最好.     

枸骨叶不同溶媒萃取物对小鼠体外T淋巴细胞活化增殖的影响

目的:探讨枸骨叶5种溶媒萃取物对T淋巴细胞增殖、活化的影响。方法:利用MTT法检测枸骨叶对体外ConA刺激T淋巴细胞增殖反应及使用流式细胞仪测定CD3阳性淋巴细胞的CD69分子表达的影响。结果:枸骨叶的醇提物I、乙酸乙酯IⅠ、正丁醇萃取物IⅡ具有明显抑制Co-nA刺激T淋巴细胞增殖反应的作用。枸骨叶醇提物I与乙酸乙酯萃取物IⅠ能明显抑制ConA刺激T淋巴细胞CD69分子的表达。枸骨叶2种水提物无免疫抑制作用。结论:枸骨叶脂溶性萃取物具有较强抑制T淋巴细胞活化、增殖的化学成分。     

上海河流沉积物的有机提取物对3种细胞的毒性效应

河流沉积物是众多有机污染物的最终储存库.采用索氏抽提法提取出黄浦江及支流苏州河沉积物中的有机污染物,用CCK-8法检测沉积物中的有机提取物对正常人肝细胞L02、人肝癌细胞HepG2以及人乳腺癌细胞MCF-7的细胞增殖毒性,综合评价沉积物中有机污染物的综合毒性效应,进而比较沉积物有机提取物对这3种细胞增殖毒性的差异及两条河流沉积物受有机污染物污染的情况差异.结果表明,黄浦江与苏州河沉积物有机提取物对MCF-7细胞和L02及HepG2细胞表现出不同的毒性效应,黄浦江与苏州河沉积物中的大部分样品对L02和HepG2表现出一定的促增殖效应或没有影响;对MCF-7细胞,除个别样品外,大部分样品表现出细胞增殖毒性效应,并且呈剂量效应及时间效应依赖关系,其毒性大小与采样的位置存在很大关联,这说明黄浦江及苏州河沉积物有机提取物一定程度上受到了有机污染物的污染.另外,两条河流对L02和HepG2的促增殖效应和对MCF-7细胞增殖的毒性效应相当,说明两条河流受有机污染物的污染强度接近及污染物类型相似.     

骨髓基质干细胞（BMSCs）细胞毒最佳实验条件的研究

目的探讨CCK-8法和MTT法在骨髓基质干细胞(Bone marrow stromal cells,BMSCs)细胞毒实验中的最佳实验条件.方法取对数生长期的P3大鼠BMSCs,制成不同浓度的细胞悬液,于96孔培养板中培养24 h,分别用CCK-8法、MTT法检测其吸光度(A)值,根据细胞浓度与A值关系曲线确定两种方法各自的最适细胞浓度;取最适浓度的细胞于0.5,1,2,3,4和5 h 6个不同时间点,分别于450,490,595 nm处测定吸光度A值,确定两种方法最佳的检测时间和最适检测波长;采用CCK-8和MTT法检测5个浓度的鹿茸Ⅰ型胶原对BMSCs的增殖的影响.结果 CCK-8法测得的A值与细胞数目之间的线性相关性优于MTT法;CCK-8法、MTT法最佳检测波长分别为450,490 nm,最佳检测时间分别为1,4 h;在检测鹿茸Ⅰ型胶原蛋白对BMSCs的增殖的影响时,CCK-8法测得数据的线性相关性优于MTT法,并且数据偏差较MTT法小.结论 CCK-8法与MTT法检测结果相比线性相关性好,灵敏度高,准确性好.在BMSCs细胞毒检测中CCK-8法优于MTT法.     

金顶侧耳多糖同Con A相互作用的研究

从金顶侧耳子实体中分离纯化三种水溶性多糖．Ｇ·Ｃ分析表明ＰＣ－２由葡萄糖、半乳糖、岩藻糖组成；ＰＣ－３由半乳糖、甘露糖组成；ＰＣ－４是单一的葡聚糖．经琼脂糖双扩散，ＰＣ－３同ＣｏｎＡ间可产生沉淀线．定量沉淀反应与ＣＤ谱分析均表明ＰＣ－３通过非还原末端的α－Ｍａｎ与ＣｏｎＡ形成了多糖—蛋白质复合物．部分酸水解实验表明，ＰＣ－３同ＣｏｎＡ的作用与糖链的分支程度有关．高碘酸氧化与硫酸化修饰则使ＰＣ－３同ＣｏｎＡ的结合能力降低或丧失．     

小鼠阑尾淋巴组织的发生

对不同日龄幼鼠阑尾淋巴组织的发生、T和B细胞在阑尾中出现的时间及分布的系统研究表明:小鼠阑尾淋巴组织是在出生后逐渐发育形成的.幼鼠出生当日,在其阑尾内固有膜增厚,在淋巴滤泡原基中已具有成熟的T淋巴细胞和较成熟的B淋巴细胞.出生后随着淋巴滤泡的发育及肠道内抗原的刺激,T和B淋巴细胞数目逐渐增多,最终分别定位分布于淋巴滤泡的滤泡间区与滤泡区内.     

Con A建立小鼠急性免疫性肝损伤模型研究

目的探讨刀豆蛋白A(Con A)诱导急性免疫性肝损伤小鼠模型的最适剂量及最佳给药途径.方法选用雄性ICR小鼠180只,分为尾静脉注射与腹腔注射两种给药途径,每个给药途径分为6组,对照组、Con A 10,20,30,40和50 mg/kg剂量组,Con A各剂量组注射相应剂量的Con A,对照组注射生理盐水,在注射8 h后,检测各组血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的水平,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察肝组织病理变化.结果与对照组比较,腹腔注射Con A各剂量组的ALT和AST水平无明显变化;尾静脉注射Con A 40 mg/kg剂量组的ALT和AST水平明显升高(P0. 05);组织学病理显示:肝损伤明显,Con A 10,20,30 mg/kg剂量组ALT和AST水平变化不明显,50 mg/kg剂量组死亡率较高.结论小鼠尾静脉注射40 mg/kg的Con A可成功诱导ICR小鼠的急性肝损伤.     

抗Tac单克隆抗体对刀豆蛋白A诱导实验性小鼠肝损伤的影响

本实验利用刀豆蛋白Ａ（ＣｏｎＡ）诱导建立实验性小鼠肝损伤模型,并研究该模型血浆肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）含量的变化,发现小鼠血浆ＴＮＦ－α含量与正常对照组比较明显升高,其差异有极显著意义（Ｐ＜００１）。预先注射抗Ｔａｃ单克隆抗体可减少ＣｏｎＡ注射后小鼠ＴＮＦ－α的产生,与模型组比较,二者血浆ＴＮＦ－α的差异有极显著意义（Ｐ＜００１）。注射抗Ｔａｃ单克隆抗体组无肝损伤发生。上述结果表明,ＣｏｎＡ诱导的肝损伤与ＴＮＦ－α等细胞因子的介导有关,抗Ｔａｃ单克隆抗体对ＣｏｎＡ诱导的肝损伤有保护作用     

鹿茸水提取物及其蛋白酶解物对小鼠 脾淋巴细胞增殖的影响

研究了鹿茸水提取物中非蛋白成分、粗蛋白酶解物及分离组分对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响.非蛋白成分和酶解物的分离分别采用HPLC法和超滤法.应用WST-8法检测各分离组分对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响,采用高分辨质谱对非蛋白成分进行初步鉴定.结果显示,非蛋白成分对未经刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠脾细胞增殖的促进作用优于其分离组分,Fr.Ⅲ和Ⅳ对ConA诱导的脾淋巴细胞增殖有抑制作用,初步鉴定其为碱基和核苷酸的混合物.分子量大于10 kDa的肽段,单独可刺激小鼠脾细胞增殖,且对ConA诱导的T淋巴细胞增殖有抑制作用.肽段分子量大小对其免疫调节活性影响较大,但并未呈现直接的相关性.肽的氨基酸组成、序列及构型等也是影响其活性的重要因素.     

阿维A对HaCaT细胞增殖的影响

目的:探讨阿维A对角质形成细胞(HaCaT)增殖的影响及其发挥作用的适宜浓度.方法:分别以浓度为1×10-7mol/L、1×10-6mol/L、5×10-6mol/L阿维A作用于HaCaT细胞,用四氮唑盐类化合物(MTS)比色法检测每组12、24、48和72 h HaCaT细胞的增殖情况.结果:与空白对照组相比,大于或等于1×10-6mol/L阿维A可以抑制HaCaT细胞增殖,并且在作用24 h后随着阿维A浓度的增加,其对HaCaT细胞增殖的抑制作用增强.结论:阿维A抑制HaCaT细胞增殖适宜浓度为5×10-6mol/L.     

杏鲍菇菌糠多糖对小鼠脾指数、脾淋巴细胞增殖及免疫因子的影响

目的 观察杏鲍菇菌糠多糖对小鼠脾指数、脾淋巴细胞增殖及免疫因子的影响。方法 将超声法提取制备的杏鲍菇菌糠多糖与基础饲料混合制成低剂量(200 mg/kg)、中剂量(400 mg/kg)及高剂量(800 mg/kg)三种多糖饲料。用48只KM小鼠,随机分为空白组,杏鲍菇菌糠多糖低、中、高剂量组。连续饲养60 d后,测定小鼠脾指数、脾淋巴细胞增殖和免疫因子IFN-γ、TNF-α及IL-6含量指标。结果 杏鲍菇菌糠多糖组与空白组相比,低剂量组显著提高脾指数(P<0.05),中剂量组能显著提高脾指数和脾淋巴细胞增殖(P<0.05),同时能提高免疫因子TNF-α、IL-6含量(P<0.05);高剂量组能显著提高小鼠的IFN-γ含量(P<0.05),极显著提高小鼠的脾指数、脾淋巴细胞增殖、TNF-α及IL-6含量(P<0.01)。结论 杏鲍菇菌糠多糖对小鼠的脾指数、脾淋巴细胞增殖及免疫因子具有调节作用。     

顺磁离子探针法研究稀土离子钆(Ⅲ)与伴刀豆球蛋白A的相互作用

该文使用钆(Ⅲ)离子为顺磁离子探针,通过观测溶剂水质子弛豫时间变化的方法,研究了钆(Ⅲ)与伴刀豆球蛋白A的键合作用。结果给出,Con-A与钆(Ⅲ)键合作用的离解常数Kd=1.48×10~(-4)mol/L(PH=5.4,t=27℃)钆(Ⅲ)在Con-A分子中的键合位置数n=1。分别观察了钙(Ⅱ)、镉(Ⅱ)和镧(Ⅲ)对于Con-A中钆(Ⅲ)成键位置的竞争,结果给出稀土钆(Ⅱ)离子进入Con-A中钙(Ⅱ)离子的键合位置。     

GDNF对小鼠睾丸支持细胞增殖的影响

探讨胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived fieurotrphie facmr,GDNF)对小鼠睾丸支持细胞(sertoli cell)增殖的影响.对5～10 d的昆明小鼠睾丸Sertoli细胞进行分离培养,利用MTT法检测不同质量浓度GDNF(5,10,20,50μg/L)对Sertoli细胞增殖的影响,流式细胞仪测定DNA含量、分析细胞生长周期的变化.结果表明:5,10μg/LGDNF对Sertoli细胞的增殖有促进作用(p<0.05),20μg/LGDNF对Sertoli细胞增殖有明显促进作用(p<0.01);流式细胞仪检测表明GDNF促进了Sertoli细胞由Go期进入S期和G2期,细胞增殖指数(P1)增加,S期细胞指数(SPF)增加.说明GDNF对体外培养的Sertoli细胞具有促进增殖的作用.     

鹰嘴豆芽素A对小鼠T淋巴细胞体外活化增殖和细胞周期的影响

目的:研究黄酮类化合物鹰嘴豆芽素A(biochanin A,bioA)对小鼠T淋巴细胞的活化增殖和周期的影响.方法:运用双色荧光抗体染色技术结合流式细胞术分析bioA对小鼠T淋巴细胞在多克隆刺激剂(ConA)刺激下早期活化抗原CD69表达的影响;运用羧基荧光素乙酰乙酸(carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,CFDA-SE)标记技术结合流式细胞术,分析T淋巴细胞增殖相关指数;用碘化丙锭(propidium iodide,PI)染色分析T淋巴细胞细胞周期变化.结果:终浓度为25、50μmol/L的bioA对ConA刺激下的T淋巴细胞早期活化抗原CD69表达具有明显的抑制作用(P＜0.05),50 μmol/L抑制达到峰值;CFDA-SE染色法显示,25、50 μmol/L bioA对ConA诱导的T淋巴细胞增殖作用具有显著的抑制作用(P＜0.05);终浓度为5、25、50 μmol/L的bioA能够使ConA刺激的T淋巴细胞滞留于G0/G1期,减少处于S期和G2/M期细胞数.结论:BioA对小鼠T淋巴细胞的活化增殖和周期具有明显的抑制作用.     

藏药波棱瓜子总木脂素对刀豆球蛋白(ConA)致免疫性肝损伤小鼠保护作用及其机制探讨

目的:波棱瓜子是常见的用于治疗肝病的藏药,疗效确切.前期研究表明,总木脂素是波棱瓜子抗肝损伤的有效部位,但疗效尚不明确.本研究拟考察藏药波棱瓜子总木脂素对ConA致小鼠免疫性肝损伤的保护作用,并进一步探讨其对抗肝损伤的作用机制.方法:采用尾静脉注射一次性ConA(20mg/kg)诱发小鼠免疫性肝损伤,造模8h后取血样和肝脏,考察不同剂量的波棱瓜子总木脂素对各组小鼠脏器系数、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、骨过氧化物酶(MPO)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)及肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等生化指标活力或水平的影响;以HE染色对肝组织进行组织病理学检查;免疫组织化学法检测波棱瓜子总木脂素对各组小鼠肝脏中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)、核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响.结果:波棱瓜子总木脂素可以降低ConA所致免疫性肝损伤小鼠肝脏系数及血清ALT、AST、ALP活力,显示出较好的保肝作用.同时波棱瓜子总木脂素也可降低肝损伤小鼠血清NO水平和MPO、NOS活力,并减少肝组织匀浆中MDA的含量,增强SOD和GSH-Px活性,表现出良好的抗氧化作用;免疫组化结果显示,波棱瓜子总木脂素还能抑制诸如TNF-α、IFN-γ、IL-4、NF-κB等促炎症因子的表达,促进抗炎症因子IL-10的表达,从而抑制肝脏炎症反应而发挥其保肝作用.病理观察结果也表明,波棱瓜子总木脂素能减轻ConA对肝组织的损伤.结论:波棱瓜子总木脂素对ConA致小鼠免疫性肝损伤都具有一定的保护作用,其保肝作用可能与其抗炎、抗氧化能力有关.     

重组人碱性成纤维细胞生长因子诱导Balb/c3T3细胞增殖的实验研究

目的研究不同浓度重组人碱性成纤维细胞因子对Balb/c 3T3细胞增殖活性的影响.方法重组质粒pGEX-bFGF转入到DH5α大肠杆菌体内,增菌培养表达bFGF,亲和层析纯化,制备8种不同药物浓度的bFGF,分别进行诱导Balb/c 3T3细胞增殖实验研究,MTT法检测各组细胞增殖活性.结果 bFGF诱导Balb/c 3T3细胞增殖存在浓度依赖性,最适浓度为4～16μg/L.结论 bFGF具有较好的诱导Balb/c 3T3细胞增殖的能力,为后续研究工作奠定实验基础.     

小鼠胚胎发育中期心脏细胞增殖与凋亡的研究

采用免疫组织化学及切口末端标记法(TUNEL),对胚胎中期的小鼠心脏组织进行检测,结果表明:小鼠心脏发育过程中的细胞增殖与凋亡相伴存在,与心脏发育变化密切相关.而用原位杂交的方法检测,P21、Ki ras基因在胚胎心脏发育中期并没有表达,说明这2个细胞周期调控基因在胚胎心脏发育中期并不起作用,可能与其他的基因有关.