紫外诱变原生质体选育碱性蛋白酶高产菌株的研究Ⅲ.诱变株的选育及其产酶条件的研究

以地衣芽孢杆菌（ＢａｃｉｌｕｓＬｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）５３号菌为出发菌株，在原生质形成和再生的最佳条件下制备原生质体，并对原生质体进行了多次诱变处理，从大量突变株进行筛选最终获得了高产、稳定、耐热的碱性蛋白酶产生菌株５３－Ｇ３８－６，产酶活力由１１０４Ｕ／ｍｌ提高到２２０８０Ｕ／ｍｌ．该诱变株最适产酶条件为：培养基由质量分数（ｗ／％）为胰蛋白胨１，酵母膏０．５，玉米粉５，Ｎａ２ＨＰＯ４１２Ｈ２Ｏ０．４，ＫＨ２ＰＯ４０．０３，Ｎａ２ＣＯ３０．１组成，ｐＨ自然，培养温度４２℃，培养时间４４～４８ｈ，ｗ／％为０．２的ＣａＣＯ３可提高酶的产量．酶作用的最适条件：６２℃，ｐＨ１０．０，ｐＨ在９～１０之间稳定     

豆凝乳酶产生菌的筛选及诱变育种

从１０４份土样中分离到一株产豆凝乳酶的芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）,酶活力０．３ｕ／ｍｌ。经ＵＶ－ＤＥＳ诱变及培养基调整后,酶活可达１．６ｕ／ｍｌ以上,其最适产酶培养基组成：麦麸２．５％,（ＮＨ４）２ＳＯ４ ０．５％（ＮＨ４）２ＨＰＯ４ ０．５％,ＣａＣｌ２ ０．０５％。     

丝状真菌产生β—葡聚糖酶的研究Ⅰ.GCN平板的建立及产酶菌株的选育

本文报道适用于筛选丝状真菌产生β－葡聚糖酶的平板初筛法。即：β葡聚糖－刚果红营养平板法（ＧＣＮ）平板法。运用此法从分离源中初筛到产酶菌黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）Ａ２１，经ＵＶ和ＮＴＧ多次诱变，获得产酶能力高于亲株１．４６倍变异株Ａ２１４８。在初始ＰＨ６．８、温度２９℃和以碱产为主碳源培养基中，变株Ａ２１４８经８６ｈ培养产生β－葡聚糖酶１２８ｕ／ｍｌ，并伴有少量糖化酶、中性蛋白酶及     

丝状真菌产生β－葡聚糖酶的研究 Ⅰ．GCN平板的建立及产酶菌株的选育

本文报道适用于筛选丝状真菌产生β－葡聚糖酶的平板初筛法。即：β－葡聚糖─刚果红营养平板法（ＧＣＮ平板法）．运用此法从分离源中初筛到产酶菌黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ）Ａ２１，经ＵＶ和ＮＴＧ多次诱变，获得产酶能力高于亲株１．４６倍变异株Ａ２１４８．在初始ｐＨ６．８、温度２９℃和以大麦为主碳源培养基中，变株Ａ２１４８经８６ｈ培养产生β－葡聚糖酶［ＥＣ，３．２．１．７３］１２８ｕ／ｍｌ，并伴有少量糖化酶、中性蛋白酶及α－淀粉酶的产生。实验室规模提取实验表明：发酵液过滤除菌后，经硫胺、丙酮沉淀可得２１０６ｕ／ｇ左右的粉状酶制剂，酶提取总收率达６０％。     

产植酸酶青霉菌株的诱变研究

对产植酸酶的青霉菌株Ａ２进行了诱变研究。分别以ＨＮＯ２－ＵＶ和ＵＶ－５Ｂｕ复合处理，进行了二轮诱变筛选后，得到高于Ａ２５０％以上的变异株６株，其中Ａ２－ＵＶ５９－２０株的酶活达０．８１２±０．０１９ｕ／ｍｌ，为出发菌株Ａ２的二倍多。     

紫外诱变原生质体选育碱性蛋白酶高产菌株的研究

以地衣状芽孢杆菌５３－Ａ６为出发菌株，考察了各种因素对原生质体形成和再生的影响，在原生质体形成和再生的最佳条件下制备原生质体，５３－Ａ６菌原生质体形成率和再生率分别达９９．７％和３０．９％，通过光学显微镜和电镜技术，观察了原生质体形成再生和原生质体聚集现象。     

胞外植酸酶产酵母菌的选育

从酒糟样品中筛选得到五株胞外植酸酶活性较高的酵母，选择酶活最高的１－１作为出发菌株，经单倍体分离，原生质体制备，紫外诱变，最后得到一株突变株Ｍｓｐ－２１２８，其胞外植酸酶活力为２３．０８Ｕ／ｍｌ，比出发菌株提高了８２％，且产酶稳定。     

紫外诱变原生质体选育碱性蛋白酶高产菌株的研究──Ⅱ53－A_6菌株原生质体形成及再生最佳条件的研究

以地衣状芽孢杆菌５３－Ａ６为出发菌株，考察了各种因素对原生质体形成和再生的影响．在原生质体形成和再生的最佳条件下制备原生质体，５３－Ａ６菌原生质体形成率和再生率分别达９９．７％和３０．９％。通过光学显微镜和电镜技术，观察了原生质体形成再生和原生质体聚集现象。     

蜂房芽孢杆菌B－91几丁质酶的合成条件

从厦门地区牡养殖场分离筛选到一株产几丁质酶活力较高的蜂房芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌ－ｌｕｓａｌｖｅｉ）Ｂ－９１，研究了该菌几丁质酶的合成条件。结果表明：该菌在以几丁质为碳氮源的培养基中生长，能合成多量的几丁质酶。酶的合成受各种几丁质诱导。在产酶培养基中添加不同的有机或无机氮源，均能促进酶的合成，而葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和乳糖对酶合成有阻遏作用。该菌几丁质酶合成的最适培养基初始ｐＨ为６．８，最适温度为２８℃。在２５０ｍｌ三角瓶装５０ｍｌ培养基，接种量为２％，振荡培养６０ｈ时，培养液中几丁质酶活力可达２２１２ｕ／ｍＬ．     

产胶原酶地衣芽孢杆菌菌种的分离、筛选及发酵条件研究

从成都皮革厂等处采集的样品中,分离筛选到一株胶原酶的产生菌Ｊ－４－８,菌种鉴定为地芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）。该菌产酶的最适碳源为蔗糖,氮源为明胶,超始ｐＨ为７．５,容瓶装量为１０ｍＬ,种龄是２４ｈ,接种量为６％,在此条件下,摇瓶振荡发酵后,酶活达２５Ｕ／ｍＬ发酵液,较原发酵培养基发酵后的酶活提高３５％。     

淀粉直接发酵酒精的菌株选育──内孢霉酵母与酿酒酵母属间原生质体融合

本研究旨在构建直接发酵淀粉生产酒精的酵母菌．选择具α－淀粉酶和葡萄糖淀粉酶活性的Ｅ．ｆｉｂｕｌｉｇｅｒａＥ１１灭活的原生质体，与耐高温产酒率高的Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＨＢ－６－９单倍体进行属间原生质体融合．经３５％ＰＥＧ－５０ｍｍｏｌ／ＬＣａＣｌ２诱导，在再生选择培养基上融合率１．０～１．５×１０－６，获得１２个性能稳定的融合株．部分融合株生长速度、淀粉水解能力、可溶性淀粉直接发酵酒精的能力明显高于两亲株．     

巨大芽孢杆菌产青霉素酰化酶发酵条件的研究

该文对一株巨大芽孢杆菌产胞外青霉素酰化酶的发酵条件下进行了初步研究。不同的氮源及装液量和发酵时间产酶均有影响。该菌株在２７－２８℃１８０ｒ／ｍｉｎ，初始ＰＨ８．０，苯乙酸浓度０．６％的最佳发酵条件下发酵６０ｈ左右，青霉素酰化酶活力可达５００－７００Ｕ／１００ｍｌ。     

乙炔二锂（C2Li2）异构体反应的分子轨道研究

基于量子化学从头计算法（ＣＣＳＤ（Ｔ）、ＱＣＩＳＤ（Ｔ））以及二阶微扰法（ＭＰ２），研究了乙炔二锂分子的平面桥式与线性式之间的异构化途径．６－３１１Ｇ（ｄ）基态被用于几何优化和反应途径的确定，而６－３１Ｇ（３ｄｆ）基态被用于单点式计算．其有关结构优先及成键特征的结果与用Ｍφｌｅｒ－Ｐｌｅｓｓｅｔ微扰方法所得一致．在ＭＰ２／６－３１１Ｇ（ｄ）理论水平上给出了质－权坐标的最小能量途径．在本研究的最高理论水平［ＱＣＩＳＤ（Ｔ，ＦＵＬＬ）／６－３１Ｇ（３ｄｆ）∥ＱＣＩＳＤ（Ｔ，ＦＵＬＬ）／６－３１１Ｇ（ｄ）］上，发现平面型分子的异构化势垒（１０．０ｋｃａｌ／ｍｏｌ）要比线型Ｃ２Ｌｉ２（１．３ｋｃａｌ／ｍｏｌ）的大得多     

酵母嗜杀质粒融合转移──Ⅰ．融合转移系统的建立

以嗜杀酵母ＥＲＲ１和啤酒生产酵母ＡＳ２４２０出发菌株，建立了供体菌ＭＫ２－３：Ｋ＋Ｒ＋Ｌｅｕ－ρ＋（ｎ）和受体菌ＡＳ２４２０－１：Ｋ－Ｒ－ｌｅｕ＋ρ°（２ｎ）．对原生质体制备再生条件的研究结果表明两株菌的原生质体制备条件不尽相同；同一菌株原生质体形成与再生的最佳条件也不相同．有利于融合再生的原生质体制备条件是ＭＫ２－３：菌龄３０ｈ，蜗牛酶解量３０ｇ／Ｌ酶解时间３０ｍｉｎ，此时原生质体形成率为８０％，而再生率达１７．１％，这些条件对嗜杀活性无影响，再生菌落的嗜杀活性率达１００％；而ＡＳ２４２０－１；菌龄２４ｈ，蜗牛酶量２０ｇ／Ｌ，酶解时间３０ｍｉｎ，原生质体形成率为８１％，再生率为１８．１％．对四种渗透压稳定剂的再生效果实验表明甘露醇效果最佳，氯化钾次之，考虑到廉价，氯化钾是很好的代用品，在３０％ＰＥＧ６０００及Ｃａ２＋条件下进行原生质体融合，融合率可达８．９×１０－６，对其中的融合子ＭＡＲ４的遗传性状及嗜杀活性的稳定性检测，ＤＮＡ含量及细胞大小测定，ｄｓＲＮＡ质粒的提取及电泳结果分析和发酵性能测定，结果表明融合子ＭＡＲ４具有较高的嗜杀活性并可以稳定遗传，有与供体菌ＭＫ２－３嗜杀质粒ｄｓＲＮＡ相同的电泳行为，     

黑曲霉(Aspergillus niger)原生质体电融会(Ⅰ)─黑曲霉原生质体形成与再生的研究

通过紫外诱变获得两株稳定的黑曲霉营养缺陷型Ｍｕ２（Ｍｅｔ－）和Ｄ１２（Ｃｙｓ－），并首次证实低温黑暗保存数小时对黑曲霉突变株具有稳定作用。系统地研究了菌龄、渗透压稳定剂、温度、酶的浓度和酶解系统等因素对黑曲霉原生质体形成的影响．采用２％溶壁酶加０．５％纤维素酶，获得了大量的原生质体。在显微镜下观察原生质体形成和再生过程， Ｍｕ２和 Ｄ１２再生率分别为 ５４％和 ３３％。原生质体在正弦交变电场（１ＭＨｚ，４５０ Ｖ／ｃｍ）作用下形成珠串，在高压电脉冲（强度 ９．０ ｋＶ／ｃｍ、时程 ２５ μｓ）触发下，发生融合。     

茵陈等六种中药对肝葡萄糖醛酸转移酶的体外诱导作用

为了解中药治疗新生儿黄疸是否通过酶的诱导作用，用洋地黄皂甙作为体外肝葡萄糖醛酸转移酶（ＵＧＴ）诱导的阳性对照物。用Ｂｌａｃｋ法测定茵陈（Ａｒｔｅｍｉｓｉａｃａｐｉｌｌａｒｉｓ）、黄连（Ｃｏｐｔｉｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）、大黄（Ｒｈｅｕｍｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）、黄芩（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ）、栀子（Ｆｒｕｃｔｕｓｇａｒｄｅｎｉａｅ）及甘草（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｇｌａｂｒａ）的水提物对Ｗｉｓｔａｒ大鼠肝匀浆在体外ＵＧＴ酶诱导作用。结果表明，在体外实验，这６种中药水提取物不能增加大鼠肝细胞中ＵＧＴ的活性。     

胞外植酸酶高产酵母菌的选育

从酒糟样品中筛选得到五株胞外植酸酶活性较高的酵母，选择酶活最高的１－１作为出发菌株，经单倍体分离、原生质体制备、紫外诱变，最后得到一株突变株Ｍｓｐ－２１２８，其胞外植酸酶活力为２３．０８Ｕ／ｍＬ，比出发菌株提高了８２％，且产酶稳定     

SD—5菌株原生质体形成与再生条件的研究

探讨了培养基成分、培养时间、高渗缓冲液成分和ｐＨ、溶菌酶浓度以及酶解温度和时间对苏云金杆菌ＳＤ－５菌株原生质体形成和再生的影响；结果表明，ＳＤ－５菌株原生质形成和再生的最佳条件组合为：ＰＢＧ培养基、３０℃培养１４ｈ再活化５ｈ，以ＳＭＭｐＨ６．５作酶解缓冲液，溶菌酶浓度０．６ｍｇ／ｍｌ，３４℃处理６０ｍｉｎ。     

大麦黄矮病毒（BYDV）外壳蛋白基因在小麦原生质体中的…

实验采用ＰＥＧ介导法转化小麦，用ＧＵＳ基因作为标志，用荧光法测定Ａｃｔｌ－ＧＵＳ，Ｅｍｕ－ＧＵＳ，３５Ｓ－ＧＵＳ三种质粒转化小麦细胞后的瞬间表达强度，以比较Ａｃｔｌ，Ｅｍｕ，３５Ｓ三种启动子在小表中的表达强度，结果表明Ａｃｔｌ和Ｅｍｕ的强度大致相等，均比３５Ｓ强，采用Ｅｍｕ为启动子带ＢＹＤＶＣＰ基因的质粒和经改造过的Ａｃｔｌ为启动子带有抗潮霉素选择记基的质粒转化小麦“济南１７７”的原生质体，转化６     

恶臭假单胞菌萘质粒ⅠNL基因的克隆及酶切图谱

恶臭假单胞菌（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｐｕｔｉｄａＧ７）携带的质粒ＮＡＨ７，经限制性内切酶ＥｃｏＲＩ切割后，产生含有萘降解酶全部基因（２４，６ｋｂ）的片段，此片段插入到载体ｐＵＣ１１９的多克隆位点，构成了ｐＫＡＯ质粒，此质粒经ＨｐａＩ，ＥｃｏＲＩ酶切获得的５．１ｋｂ片段亚屯隆到ｐＵＣ１１９中，衍生出ｐＮＮ１质粒，绘制出内切酶图谱。从ｐＮＮＩ质粒上切下含目的基因ｎａｈＩ、ｎａｈＮ和ｎａｈＬ的ｋｐｎＩ－ｋｐｎＩ片段（２．３ｋｂ）．正向插入载体ＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ＋中获得重组质粒ｐＮＮ２，反向插入为ｐＮＮ３，将其转化到大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ中，目的基因得以大量增殖。