胰岛素样生长因子及其受体在绵羊早期胚胎的表达

旨在研究IGFs及其受体（IGFR）在绵羊卵母细胞和早期胚胎中的表达．对绵羊进行超数排卵处理,手术法采卵得到卵母细胞和着床前早期胚胎,结合荧光免疫染色方法和激光共聚焦成像系统,研究了绵羊未成熟卵母细胞、成熟卵母细胞和着床前各期胚胎中IGF—Ⅰ、IGF-Ⅱ、IGF—ⅠR、IGF—ⅡR的表达情况．结果表明,IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ在未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞中均有表达;受精后,直到囊胚的整个早期发育阶段也检测到了这两个因子的表达,且胚胎免疫染色在各卵裂球之间呈现不均匀的分布．IGF—ⅠR和IGF—ⅡR在未成熟卵母细胞、成熟卵母细胞和早期胚胎均有表达,在胚胎期主要分布于卵裂球细胞的顶端（apical surface）,而在囊胚阶段主要在滋胚层细胞中表达,内细胞团没有表达．     

米非司酮对人输卵管胰岛素样生长因子-1及其受体表达的影响

目的: 探讨米非司酮对人输卵管上皮胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及其受体(IGF-1R)在增殖中、晚期表达情况的变化.方法:取育龄妇女增殖中、晚期输卵管,米非司酮组(8例)于术前12 h给予米非司酮25 mg口服,对照组(7例)不服用米非司酮,常规石蜡切片,用SP免疫组化法和图像分析技术检测IGF-1及IGF-1R的PU值的表达变化.结果:在月经周期的增殖中、晚期,无论米非司酮组或对照组,峡部、壶腹部、伞部上皮细胞IGF-1及其受体的表达,差异无显著性(P>0.05);在月经周期的增殖中、晚期,米非司酮组和对照组在输卵管相同部位上皮细胞IGF-1的表达差异无显著性(P>0.05);在月经周期的增殖中、晚期,在输卵管相同部位上皮细胞IGF-1R的表达米非司酮组较强,与对照组相比差异有显著性(P<0.05). 结论:米非司酮作用下,月经周期的增殖中、晚期人输卵管上皮IGF-1表达与对照组无明显差异,而IGF-1R的表达则明显强于对照组,说明米非司酮可能对该时期的输卵管环境造成改变.     

牛早期胚胎性别鉴定的PCR方法研究

探讨了ＰＣＲ法鉴定牛早期胚胎性别时所用的引物,反应缓冲液中Ｍｇ＾２＋浓度,循环反应的次数及可能造成污染的各种因素对性别鉴定结果的影响。并对１８个胚胎进行了性别鉴定,移植３８枚性别鉴定后的胚胎,成功产下２头与预测性别一致的牛犊,胚胎性别可鉴率为９４．１％,预测性别符合率为１００％。     

牛体外受精胚胎在成份确定培养液内的发育

将牛体外受精胚胎培养于化学成份确定的 SOF+PVA的培养系统内 ,观察了不同PVA浓度对胚胎体外发育的影响 .结果在 1 mg/ml、3mg/ml和 5mg/ml的 PVA浓度条件下 ,囊胚的发育率分别为 2 7.5% a、1 9.1 % a和 4 .3% b( a>b,P<0 .0 1 ) .将体外受精胚胎分别培养于 M1 99+输卵管上皮细胞、SOF+BSA和 SOF+PVA的三种培养系统内 ,囊胚的发育率分别为 2 0 .4 %、2 9.0 %和 2 7.5% ,结果表明本研究确立的化学成份确定的体外培养系统可以用于牛体外受精胚胎的发育培养 .     

STR对幼鲤生长和肝脏IGF-ⅠmRNA表达的影响

通过以体质量６０～７０ｇ的幼年鲤鱼（Ｃｙｐｒｉｎｕｓｃａｒｐｉｏ）,每ｋｇ体质量以２００ｍｇ的剂量体腔注射链脲佐菌素（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ,ＳＴＲ）或载体溶液２００ｍｇ,观察鲤鱼生长、血糖、血清生长激素（ＧＨ）水平和肝组织胰岛素样生长因子Ⅰ（ＩＧＦⅠ）ｍＲＮＡ水平的变化．注射ＳＴＲ的鱼生长速率比对照组显著减慢．在第１５天和第３０天实验组鲤鱼血糖水平以及血清ＧＨ水平皆无明显变化．在注射ＳＴＲ后的第１５天肝组织ＩＧＦⅠｍＲＮＡ的表达水平比对照组明显下降,第３０天两组鱼肝组织ＩＧＦⅠｍＲＮＡ含量则无明显差异．注射ＳＴＲ后鲤鱼出现胰岛遭受破坏的症状．实验结果提示ＳＴＲ可能通过破坏胰岛Ｂ细胞导致胰岛素（Ｉｎｓ）分泌下降,而后者则可能通过ＧＨ受体水平或ＧＨ受体以后水平的某种机制导致鲤鱼肝组织ＩＧＦⅠｍＲＮＡ表达的下降,进而引起鲤鱼生长减慢     

K+和Ca2+对牛体外受精胚胎体外发育的作用

研究观察了在SOF+PVA这一化学成分明确培养系统条件下,不同浓度的K+和Ca2+对牛体外受精胚胎体外发育的影响,以便为今后进一步探讨影响牛早期胚胎体外发育的因素提供实验依据.实验1 将牛体外受精卵培养分别于含有0、5.0、8.35和21.2mMK+的SOF+PVA培养系统中,结果卵裂率分别为20.0%a、87.0%b、80.8%b和85.7%b(a<b, P<0.01),囊胚的发育率分别为0%c、20.0%d、10.1%e和18.7%f(c<d,e,f, P<0.01;d>e, P<0.05).实验2 将牛体外受精卵分别培养于含有0、1.13、1.71和3.0mMCa2+的SOF+PVA培养系统中,结果卵裂率分别为0.9%g、86.6%h、80.9%h和92.0%h (g＜h, P<0.01),囊胚的发育率分别为0%i、17.6%j、15.7%j和15.0%j (i＜j, P<0.01).上述结果表明,K+和Ca2+在和牛受精卵的卵裂及早期发育中起重要作用,培养系统中这两种离子的缺乏会严重影响卵裂及胚胎早期发育;5.0mM的K+更适合于胚胎的早期发育,而Ca2+在一定范围内浓度的变化对卵裂及胚胎早期发育过程的影响不大.     

K~ 和Ca~(2 )对牛体外受精胚胎体外发育的作用

研究观察了在 SOF PVA这一化学成分明确培养系统条件下 ,不同浓度的 K 和 Ca2 对牛体外受精胚胎体外发育的影响 ,以便为今后进一步探讨影响牛早期胚胎体外发育的因素提供实验依据 .实验 1将牛体外受精卵培养分别于含有 0、5 .0、8.3 5和 2 1 .2 m MK 的 SOF PVA培养系统中 ,结果卵裂率分别为 2 0 .0 % a、87.0 % b、80 .8% b和 85 .7% b(ae,P<0 .0 5 ) .实验 2将牛体外受精卵分别培养于含有 0、1 .1 3、1 .71和 3 .0 m MCa2 的 SOF PVA培养系统中 ,结果卵裂率分别为 0 .9% g、86.6% h、80 .9% h 和 92 .0 % h(g相似文献   

人源化IGF-Ⅰ基因的人工合成、重组与表达

为了实现人源化胰岛素样生长因子Ⅰ(human insulin-like growth factors-Ⅰ,hIGF-Ⅰ)基因在大肠杆菌中的高效表达,了解IGF-Ⅰ基因结构与功能的关系,探索人工制备的hIGF-Ⅰ在临床治疗疾病上的应用,实验参照GenBank中人IGF-Ⅰ氨基酸序列并进行密码子优化,然后人工合成这条基因并将克隆至pUC57载体上.构建重组表达载体pGEX-6P-1-hIGF-Ⅰ,转化大肠杆菌BL21菌株,进行不同诱导条件的优化,SDS-PAGE电泳确定最佳诱导条件,并利用建立hIGF-Ⅰ的间接ELISA检测方法分析表达产物活性.结果表明,获得重组表达载体pGEX-6P-1-hIGF-Ⅰ,并在大肠杆菌中实现与GST蛋白的融合可溶性表达.最佳诱导条件OD600值为0.8、IPTG浓度为0.5 mmol/L,表达蛋白的浓度为2.811 mg/mL,且产物具有抗原活性.说明人工制备的hIGF-Ⅰ与天然的hIGF-Ⅰ生物活性有部分相同,在基础研究和药物开发方面可作为替代物进行研究.     

NestinCK19及PCNA在早期胚胎组织中的表达

目的：研究Nestin CK19及PCNA在胚胎早期组织器官的分布。方法：对6～10w的胚胎组织采用免疫组化SABC法染色观察。结果：胚胎6w时肝脏内血细胞前体细胞Nestin阳性；7w时肝、椎间盘及皮肤有Nestin的表达，导管上皮组织开始出SECK19阳性反应。PCNA的表达出现在肝脏，9w时表达达到高峰。结论：Nestin CK19及PCNA在胚胎早期发育过程中对肝、椎间盘、皮肤等器官组织的发育可能起着调控作用。     

Long R^3-IGF-Ⅰ的克隆表达

在重组质粒pExSecI-IGF-Ⅰ的基础上,采用基因克隆方法合成了长链人胰岛素样生长因子(Long R3-IGF-Ⅰ)基因序列,构建基于该基因的重组原核表达质粒.将重组质粒转入E.coli,并对其表达条件进行了优化.实验结果表明,在37 ℃,IPTG终浓度0.6 mmol/L,诱导3 h条件下,Long R3-IGF-Ⅰ以包涵体形式可得到高效表达.将包涵体变性溶解后通过分离纯化,目的蛋白纯度达到95%以上.通过尿素梯度透析复性法对变性包涵体复性,复性率达到66%.     

血管内皮生长因子对牛早期胚胎发育的影响

为了探明血管内皮生长因子VEGF对牛体外受精胚胎早期发育的影响,本试验采用了成分明确的体外发育培养系统.通过在体外发育培养液中分别添加0、1、5、10 ng/mL的VEGF,对868枚胚胎的发育能力进行检测.研究结果显示:对照组与添加1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL VEGF的各实验组卵裂率分别为61.99%、75.69%、76.81%、68.92%;8-细胞期发育率分别为51.82%、61.21%、65.41%、63.40%;囊胚期发育率分别为27.74%、24.85%、23.90%、22.88%;囊胚孵化率分别为5.11%、4.85%、5.66%、3.27%.添加1、5、10 ng/mLVEGF与对照组比较,卵裂率、8-细胞期发育率有所增加,囊胚期发育率和囊胚孵化率表现下降趋势,但实验组与对照组间上述几项发育指标差异均不显著(P>0.05).     

不同体外培养系统对牛体外受精胚胎冷冻解冻后孵化能力的影响

采用ＳＯＦ和ＴＣＭ１９９与输卵管上皮细胞共同培养系统对牛体外受精卵进行培养,观察了在这两种培养条件下得到的囊胚经冷冻—解冻后的孵化能力．在ＳＯＦ＋输卵管上皮细胞的培养条件下,囊胚的发育率为２１．３％,囊胚经冷冻—解冻后的孵化率为３７．５％;在ＴＣＭ１９９＋输卵管上皮细胞的培养条件下,囊胚的发育率为２６．０％,囊胚经冷冻—解冻后的孵化率为４７．７％．研究结果表明这两种体外培养系统的培养效果无显著差异（Ｐ＞０．０５）．     

The Effects of Different Culture Systems on the Quality of Bovine In Vitro Fertilized Embryos

研究探讨了不同体外培养条件下牛体外受精胚胎的发育速度及囊胚细胞数，从而了解不同体外培养系统对牛体外受精胚胎质量的影响．实验一中将体外受精卵分别在ＳＯＦ＋牛输卵管上皮细胞（ＢＯＥＣ）和ＴＣＭ１９９＋ＢＯＥＣ两种培养系统内培养，在这两种培养条件下囊胚发育率分别为２２．２％和２１．２％，囊胚细胞数分别为１１３．３±５．０和９７．９±８．３，受精后第６～９ｄ的囊胚出现率分别为４０．１％ａ、３７．０％、１９．２％ｂ、２．７％和１３．５％ｃ、３２．７％、３６．５％ｄ、１７．３％（ａ＞ｃ，Ｐ＜０．０１，ｄ＞ｂ，Ｐ＜０．０５），表明牛体外受精卵在ＳＯＦ＋ＢＯＥＣ中的发育速度快于在ＴＣＭ１９９＋ＢＯＥＣ中．实验二中将体外受精卵分别培养于ＳＯＦ＋ＢＯＥＣ、ＳＯＦ＋牛卵丘细胞、ＳＯＦ＋ＢＳＡ三种培养系统中，结果囊胚发育率分别为３５．５％ｅ、２９．４％和２２．４％ｆ（ｅ＞ｆ，Ｐ＜０．０１），囊胚细胞数分别为１１７．３±８．０ｇ、９４．２±９．３和９０．２±９．４ｈ（ｇ＞ｈ，Ｐ＜０．０５）．实验三观察了体外受精胚胎在ＳＯＦ＋ＢＯＥＣ培养条件下发育速度与囊胚细胞数的关系，结果第６～９ｄ的囊胚细胞数分别为１１０．８±１０．２ｉ、１２８．     

牛体外受精技术研究的现状与展望

系统综述了牛体外受精技术研究的现状及存在的问题．并对今后的研究方向和前景提出了展望。牛卵母细胞可在不含血清的成熟培养液中获得受精及胚胎发育能力，促卵泡素、促黄体素及上皮细胞生长因子均对这一过程具促进作用。肝素是迄今最为有效的精子获能处理方法，但在受精过程中对精子获能起决定作用的是卵丘细胞和卵母细胞本身。提高受精质量可明显提高受精卵的胚胎发育能力。体外受精卵可通过改善培养条件或与体细胞进行复合培养发育到囊胚阶段．但后者更为稳定可靠。目前，牛卵母细胞的体外受精分裂率可达８０％，囊胚发育率达４０％左右．两枚鲜胚的移植妊娠率可达５０％～６０％．而两枚冻胚的移植妊娠率仅３０％～５０％。因此，尚需进一步提高体外受精胚胎的活力和改进胚胎的冷冻保存技术。     

牛体外受精卵的冷冻保存研究

将胚胎分别以PBS 20?S 10%乙二醇和PBS 20?S 10%甘油为冷冻保护液,或者在PBS 20?S 10%乙二醇中添加或不加蔗糖为保护液,用常规冷冻方法进行冷冻处理.胚胎保存1～18天后将其解冻,并在发育用培养液TCM199 10%OCS(发情母牛血清) 丙酮酸钠中培养48小时.结果表明解冻胚的形态正常率和培养后的发育率在乙二醇处理组和甘油处理组中分别为81.2%(13/19)、56.2%(9/16)和84.6%(11/13)、46.2%(6/13),两组之间无量著差异.在添加蔗糖和不加蔗糖的处理组中,胚胎解冻后的形态正常率和培养后的发育率分别为75.0%(15/20)、55.0%(11/20)和83.3%(15/18)、61.1%(11/18),两组之间也无明曼差异.试验结果证明,用乙二醇为防冻剂对牛体外受精胚胎进行冷冻保存,其效果相当于或略优于甘油,在乙二醇处理组中,添加蔗糖与否并不影响其冷冻效果.     

牛体外受精胚胎成份明确培养系统的建立

以 SOF为基本培养液 ,分别添加血清、PVA以及同时添加 PVA、肌醇和柠檬酸钠 ,进行牛体外受精卵的发育培养 ,三个处理组的囊胚发育率分别为 :3 2 .6%、1 1 .9%和 1 5 .9% ,血清处理组极显著高于两个 PVA处理组 (p<0 .0 1 ) .在此基础上 ,将受精处理后的卵子去掉卵丘细胞后 ,培养于 SOF PVA 肌醇 柠檬酸钠培养液内 ,以未去掉卵丘细胞的卵子为对照 ,两个处理组的囊胚发育率分别为 1 0 .8%和 2 1 .1 % .二者间没有显著差异 .结果表明没有血清和卵丘细胞的成份明确的培养系统能够支持牛体外受精卵发育至囊胚阶段 .