羊草(Leymus chinensis)psbD基因开放读码框(ORF)的克隆及序列分析

从羊草中提取总RNA,采用简并PCR方法,扩增出编码353个氨基酸的psbD基因开放读码框(Open read ing frame,ORF)cDNA序列,GenBank登陆号为FJ176573,并对其序列进行了分析.同时次基因组DNA为模板对psbD基因开放读码框区域进行了扩增,证明该基因无内含子,为其功能的进一步研究提供基因材料和理论依据.     

鳜肌球蛋白轻链2基因cDNA的克隆及其发育表达分析

通过构建肌肉组织cDNA文库分离到鳜肌球蛋白轻链2基因(MLC2),基因登录号为FJ428249.MLC2基因cDNA序列全长1 206 bp,编码区长度为579 bp.MLC2基因开放阅读框编码170个氨基酸,具有EF-手相家族蛋白全部4个EF-手相结构.与已报道的其他动物MLC2相比较,所推导氨基酸序列同源性在66.3%～97.6%,其中与ca2+结合区域非常保守,7种鱼氨基酸序列同源性为100%.采用实时荧光定量PCR方法对鳜MLC2发育表达分析表明,MLC2在原肠期开始有低量表达,与原肠期相比,尾芽期、肌肉效应期和仔鱼阶段MLC2表达量随发育阶段渐进而升高.     

斑鳜轻链3基因(MLC3)cDNA的克隆及纵向表达分析

提取斑鳜肌肉组织总RNA,逆转录得到cDNA,然后利用常规PCR法扩增得到斑鳜肌球蛋白轻链3基因(MLC3)序列.斑鳜MLC3基因cDNA序列的全长为532 bp,编码150个氨基酸.通过PROSITE tools软件预测显示该序列具有2个EF-手相结构.通过实时荧光定量PCR法对斑鳜MLC3纵向表达进行分析发现,ML...     

C_3启动子克隆及荧光素酶报告基因载体构建

为克隆C_3基因启动子序列,构建C_3基因启动子荧光素酶报告基因载体,运用PCR的方法从血液中提取到的基因组DNA中获得目的基因,双酶切后连接到荧光素酶报告基因载体上,构建C_3基因启动子报告基因载体.构建的pGL3-Basic-C_3-promotor重组质粒和内参质粒SV40瞬时转染Hela细胞,检测荧光素酶活性.结果表明,PCR扩增出C_3基因启动子片段;双酶切及测序鉴定重组体构建正确;转染Hela细胞后经双荧光素酶报告基因检测确定重组体有启动子活性.成功构建了C_3启动子报告基因载体,在细胞系中进行初步活性分析得知所克隆的C_3基因调控序列包含启动子活性区域.     

鳜鱼肌球蛋白重链基因的原核表达及多克隆抗体的制备

肌球蛋白重链(MyHC)是肌肉中的主要结构和功能蛋白,在肌肉收缩过程中起关键作用.根据鳜鱼肌球蛋白重链基因中高亲水性区域DNA设计一对特异性引物,将该基因片段亚克隆到pET-32a质粒,构建重组表达载体并转化入大肠杆菌BL21中.诱导条件优化实验结果显示,该菌株经0.8 mmol/L IPTG诱导3 h可大量表达融合蛋白.将经亲和层析纯化后的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.ELISA和免疫组化测试结果表明:此抗体有较好的特异性和抗原性.鳜鱼MyHC基因表达的研究为深入研究肌球蛋白重链的功能特性及其对肉质性状的影响奠定基础,为提高鱼类肉质提供理论基础和技术支持.     

甜菜M14品系特异表达基因BvM14-MADSbox启动子的克隆及序列分析

甜菜M14品系是带有白花甜菜染色体的栽培甜菜单体附加系,其染色体组成中除了包含18条栽培甜菜染色体外,还附加有白花甜菜第9号染色体,具有无融合生殖特性,无融合生殖能够固定杂种优势.在前期工作中,通过SSH、RACE等技术获得了甜菜M14品系特异表达基因BvM14-MADSbox的eDNA全长.通过6种限制性内切酶分别酶切M14品系基因组总DNA,再与相应接头连接,构建了6个DNA步移文库.根据基因BvM14-MADSbox cDNA序列设计引物,通过染色体步移技术克隆出该基因的上游DNA序列.经生物信息学分析,推测获得了BvM14-MADSbox基因上游1 718 bp的启动子序列,该序列含有启动子的基本元件TATA-box、CCAAT-box,和ARE、ERE、HSE、ABRE、CGTCA-motif等重要的顺式调控元件及一些光反应相关元件.该结果为今后BvM14-MADSbox基因的时空特异性表达调控机制奠定基础.     

nodD基因的克隆及其导入大豆根瘤菌工程菌株的构建

以快生型大豆根瘤菌(Sinorhizobium fredii)15067的基因组DNA作为模板,采用PCR技术,克隆结瘤基因nodD编码区序列;利用DNA重组技术,将nodD基因连到lac启动子的下游,通过luxAB基因标记的质粒载体pTR102构建表达载体pTR102-Plac-nodD,采用三亲本杂交的方式,将构建的表达载体转化土著大豆根瘤菌,构建转基因工程菌株,为研究转基因工程菌株对大豆结瘤能力的影响提供依据。     

导入额外拷贝dctA基因的根瘤菌工程菌株的构建

为进一步提高大豆根瘤菌的固氮能力,以费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)15067基因组的DNA作为模板,采用PCR扩增技术,克隆四碳二羧酸转移酶结构基因dctA的全长序列;将其连入lac启动子下游,构建带有LuxAB基因标记的pTR-Plac-dctA重组表达载体。利用三亲本杂交技术将表达载体转入费氏中华根瘤菌中,构建大豆根瘤菌工程菌株。研究表明,转基因工程菌株侵染大豆幼苗后与出发菌相比,固氮酶活性有了显著提高,为提高大豆产量的研究提供一定参考。     

一个人类锌指蛋白家族新基因ZFP28的克隆及表达

Krupple型锌指蛋白是一类具有重要功能的转录调节因子，初步克隆了一个新的人类krupple型锌指蛋白基因，经国际基因命我委员会批准命名为ZFP28。此基因长4076个碱基，含8个外显子，在基因组DNA上长18kb。它编码的蛋白质全长868个氨基酸，含1个信号肽，2个KRAB框和14个C2H2型的锌指。Northem Bolt分析表明该基因在人类早期胚胎的各个组织中普遍表达，在肺和肝中的表达水平最强，其结构和表达特征预示着它编码的是一个具DNA结合功能的转录调控因子。     

SOE-PCR技术在洛伐他汀九酮合成酶基因克隆中的应用

为了验证SOE-PCK技术在洛伐他汀九酮合成酶基因(LOVB)克隆中的应用,以土曲霉基因组DNA为模板,设计4对引物,分别扩增LOVB的4个外显子,并按一定的顺序,利用SOE-PCK技术将其一一串联起来,形成LOVB①-④的cDNA序列.结果表明:重叠延伸PCP成功扩增出了LOVB①-④的cDNA序列,大小1.3 kb左右,测序结果和NCBI中登录号为AF151722.1的洛伐他汀九酮合成酶基因LOVB①-④的cDNA序列比对,同源性为98.5%.     

批判与反思：伽达默尔实践哲学与现代高科技

由于缺乏真正反映人类思想的哲学理性,造成了现代人对高科技的盲目崇拜,分析了由此导致科技理性渗透直至支配人类生活的各个方面从而造成人的全面自我异化的现实。通过研究伽达默尔的实践哲学理念,表明了实践的基础性地位应予以加强的重要意义。     

吴敬梓的理想国及其建构——兼论《儒林外史》的主旨及结构

《儒林外史》是对衰退了的传统中国社会一种广泛的完整的设想,吴敬梓将历史的构想与真实相融合而后鉴照洞明,最终完成小说的宏大叙事,其理想国的蓝图也由此得以展示。吴敬梓主张以礼为中心,重塑被八股腐蚀的士人精神,维持文运,由此培养并巩固宗法社会中士绅(乡绅)阶层的中坚力量,以改造礼崩乐坏的现实社会,实现如三代之治的理想社会。吴敬梓的社会理想始终吸引无数有志于整顿与改革社会秩序的传统士人,在他的时代及其后始终不乏生命力与借鉴意义,吴敬梓无愧于思想家之称誉。     

食品生产监管的博弈分析及建议

根据我国食品生产市场的实际情况,运用演化博弈思想讨论政府监督机构和食品生产企业的博弈问题。建立了两个食品生产监管的博弈模型,从复制动态系统中计算出两种状态下的演化均衡点,讨论各个参数对演化结果的影响。其中,增加监管部门收益、降低监管成本、加大违法企业惩处力度等措施可以有效地提高政府部门的监管效率,使我国的食品生产市场不断地向规范良性的方向演化。     

利用Excel和VBA进行图形图像演示

利用Excel工作表中单元格,可以模拟屏幕的像素点,用来进行图形和图像显示的演示.开发VBA程序,制作出图形的动画效果,应用在计算机图形学中,能够达到很好的计算机辅助教学效果.     

工序控制方法中工序的诊断调节及技术经济分析

在工序控制中常因异常而出现不良品,通过对样本观测值的分析,可尽快地发现工序异常,寻求原因,并使工序迅速恢复正常状态.这种控制方法是维持工序稳定,使工序能力处于较为理想状态,使产品质量特性不偏离中心的一种有效方法.     

果蔬生理生化理论及实验教学创新研究

分子生物学实验技术作为生命科学研究的基本手段,是每个与生物学相关专业的研究生必须掌握的实验技术.实验教学对于培养学生的实践能力和创新能力具有不可替代的作用.果蔬生理生化理论及实验技术课程的开设,可以提高研究生的动手能力,为开展其后续的研究项目和论文写作奠定理论和实验基础.因此,对该课程进行了一系列的创新尝试,取得了很好的效果,提出并制定了适应新形势下的教学内容和模式.主要表现在2个方面:实验模块创新和课程建设创新.通过这些创新教学,使课程教学效果突出,学生创新能力进一步提高,从而促进教学质量迈进了新的台阶.     

高等学校专兼职教师的合作与互补

本文简要阐述了高校要按照资源共享的原则,建立适应市场经济要求的“专兼结合”的师资队伍管理模式,并重点论述了高校应加强管理促使专、兼职教师之间的密切合作与优势互补。     

高校教学督导与评价关系初探

高校教学督导和教学评价作为高校教学管理的有效手段,越来越为人们所关注和重视。它们在推进高校教学改革、强化高校教学管理,提高教师素质和教学质量等方面,都发挥了重要作用。我们应明确两者的内涵,区分清楚两者的内在联系及区别,掌握各自的工作特点,正确运用教学督导和教学评价,使两者更好地为高校教学管理服务。     

秦汉时期颂体的礼仪性创作及其赋颂辨析——兼谈文体功能研究的重要意义

秦汉时期的颂体创作承接先秦《诗·颂》，仍有较为明确的适用场合和用途，和相关礼仪活动有密切的关系。但同时颂体又与乐、舞相脱离，使得自身真正成为一种相对独立、成熟的文体类别。颂体的礼仪性功能决定了其文体风格，亦成为赋颂辨析的前提，这一现象提醒我们对古代文体功能要予以特别关注。     

思想政治教育的科学性与现代化

思想政治教育要想适应社会主义市场经济的时代要求，必须在继承传统的思想政治教育理论、方法、模式的基础上，在思想政治教育的主体、观念、内容、手段、载体等方面要有新发展、新突破，实现思想政治教育的现代化。本文拟就思想政治教育的科学性及现代化问题作初步探讨。 一、思想政治教育的科学性 思想政治教育作为一门科学．其科学性主要体现在以下几方面。 １．思想政治教育有其特定的研究对象。它是研究人们的思想状况、政治状况及其各自形成和发展变化的规律。它的目的就是为了最大限度地调动人们的积极性、创造性，协调人们之间的相…