农杆菌介导抗虫基因转化芥菜型油菜的研究

用农杆菌介导法对芥菜型油菜进行了转化，并对影响根癌农杆菌转化效率的因素进行了研究，建立了以油菜子叶柄为外植体的转化体系．用携带蝎毒素(BmKITs)和几丁质酶(chi)双价基因的农杆菌转化油菜，共获得了抗卡那霉素的再生苗153株，移栽成活21株．对成活植株进行了PCR分子检测，证实有外源基因的整合．转基因植株形态正常，开花、结实．     

农杆菌介导外源基因进入油菜的研究

用甘蓝型油菜子叶为外植体，以农杆菌共培养法将苏云金杆菌δ－内毒素基因和ＮＰＴＩ基因导入油菜．所用的农杆菌为ＬＢＡ４４０４－δ（ｄｉｓａｒｍｅｄｐＡＬ４４０４，ｐＧＡ６４３－δ）．ＰＧＡ６４３－δ为表达载体，其中克隆有ＮＰＴＩ基因和δ－内毒素基因．共培养４ｄ后，转化的子叶被转入含有卡那霉素（Ｋｍ）的分化培养基［１］上，分化出芽．被切下的芽在含有Ｋｍ的生根培养基［２］上生根，移栽后成活的小抗Ｋｍ油菜苗生长良好．用ＤＮＡ分子杂交、ＥＬＩＳＡ分析和生物测定等方法证明外源基因被转移到油菜中．     

利用农杆菌介导法将抗虫基因导入油菜的研究

以油菜的子叶柄作为转化的受体材料,经农杆菌感染和共培养,在含卡那霉素的筛选培养上诱导产了大量的不定芽,经生根培养,获得了再生植株,通过PCR扩增和基因组Southern杂交分析,证明其中5株为转基因植株,对转基因植株进行抗虫性检测,有2株表现出较好的抗虫性。     

影响根癌农杆菌介导的香蕉基因转化早期的主要因素

用含质粒载体pCAMBIA2301的根癌农杆菌（Agrobacterium inoculation）转化“641”香蕉（Musa AAA Cavendish subgroup cv.64-1）的薄片外植体，通过测定GUS基因瞬时表达率，对转化早期的主要影响因素进行了研究。结果表明：农杆菌EHA105较适合于介导转化，将薄片置于固体高渗培养基上培养4h后，通过真空减压法使农杆菌接种于其上，获得了较高的瞬时表达率（41.67%），是对照（8.33%）的5倍，农杆菌悬液稀释5倍用于转化较好，共培养3d为宜，薄片外植体越靠近根部，瞬时表达率越高。而外植体预培养会降低瞬时表达率。     

农杆菌介导Barnase基因转化番茄

以雄性不育基因barnase作为目的的基因、抗除草剂溴苯腈的bxn基因作为选择标记基因，利用下胚轴和子叶做外植体与农杆菌共培养方法，在番茄的两个品种佳粉1号和佳粉15号中，分别获得38和15株溴苯腈的抗性株，PCR检测结果表明，抗生株含barnase基因，且抗性株的花粉完全丧失活力，证实所得的溴苯腈抗性株为转Barnase基因番茄。     

根癌农杆菌介导AtNHX1基因转化小麦

利用根癌农杆菌对 3种基因型小麦进行了转化研究 .发现基因型对转化有明显影响 .将小麦品种烟优 36 1、烟 10 3、核生 3号的胚性愈伤组织用含报告基因NPTⅡ和抗盐基因Na H 反向转运AtNHX1的农杆菌菌株pROK2AT GV310 1感染和共培养后 ,用巴龙霉素 5 0 - 15 0mg L筛选抗性愈伤组织及转化植株 .对抗性植株的总DNA用AtNHX1基因的特异引物进行PCR检测 ,目的基因的PCR阳性频率为 1.3(烟 10 3)和 2 .9% (核生 3号 ) .Southern杂交证实外源基因已经整合到小麦的基因组中     

农杆菌介导的杜氏盐藻Dscbr基因转化紫花苜蓿的初步研究

利用农杆菌介导法进行紫花苜蓿遗传转化研究．将从盐生杜氏藻(Dunaliella samlina)中克隆到的抗逆基因Dscbr(编码一种早期光诱导蛋白)导入紫花苜蓿栽培种“中苜一号”,获得52个转化株系．经过卡那霉素抗性鉴定和PCR分子检测,获得6株阳性苗,PCR阳性率为11．54％．结果表明Dscbr基因已整合到苜蓿的基因组中．     

农杆菌介导的苏云金杆菌毒蛋白基因转基因油菜的初报

<正> 油菜(Brassica.L)是具有重要经济价值的油料作物,生产上经常采用的传统杂交育种极大地改良了作物,但是,油菜种属间不亲和性和萌发后幼苗早期夭亡等原因给常规育种带来很大困难。为了克服了此类困难,自1985年开始有科技工作者利用植物基因工程技术改良油莱品种,并且成功地获得了转基因油菜植株,只是表型(皱叶)异常。目     

农杆菌介导的中国水仙遗传转化体系的建立

利用根癌农杆菌介导法将GUS基因导入中国水仙,组织化学法检测转化后共培养3d的水仙鳞茎盘组织块,GUS基因瞬时表达很好,90％以上的材料呈现大面积的蓝色斑块,取筛选培养20d的材料检测GUS基因的稳定表达,约1％的组织块有蓝色反应。水仙预培养10d后转化,转化前在菌液中加入60μmol/L AS活化2－3h,转化率提高了两倍以上。转化材料在MS＋BA10＋NAA0．2＋Cef300＋Gyg30培养基上培养20d左右分化出小鳞芽,频率约为60％,组织块平均出芽5．7个,最多可达14个,小鳞芽10d后长成小鳞茎。     

甘蓝型油菜植物防御素基因的克隆与原核表达

根据Genbank上已知的植物防御素基因设计引物,以甘蓝型油菜中的品种”蜀杂九号”种子总RNA反转录成的eDNA为模板,进行PCR扩增,获得了243bp的片段．将该片段回收。连接到pMD18-T载体测序,将测序片段经酶切回收后克隆到GTK表达载体中,在0．1mmol IPTG诱导下表达出与理论值相符的34kD的融合蛋白条带,用GST单克隆抗体做第一抗体进行Western-blot检测,获得阳性结果,这为甘蓝型油菜植物防御素基因功能的进一步研究提供了基础．     

根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化体系的研究

以重庆主栽品种的叶片和茎段为外植体,研究了不同转化条件(菌液浓度、感染时间、预培养及共培养时间)对转化效率的影响,以及选择压和培养基对抗性愈伤出芽的影响,初步建立了马铃薯品种"台湾红"和"Spunta"的遗传转化体系并获得了转化植株.     

根癌农杆菌介导的异角状拟盘多毛孢菌转化系统研究

以携带潮霉素B磷酸转移酶抗性基因(hph)的pBHt1作为转化载体,根癌农杆菌AGL-1作为转化介体,实施转化异角状拟盘多毛孢菌。研究发现,异角状拟盘多毛孢菌的最优转化体系为:异角状拟盘多毛孢菌分生孢子悬浮液浓度为1×106个/mL,根癌农杆菌OD600为0.3,共培养时间48 h,共培养温度为25℃,诱导培养基中乙酰丁香酮(AS)浓度为200μmol/L,选择培养基添加250μg/mL潮霉素B、250μg/mL头孢噻肟钠。1×106个异角状拟盘多毛孢菌分生孢子可以产生200～300个转化子,随机挑选10个转化子进行PCR检测,均能扩增出预期条带,且在不含潮霉素B的PDA培养基平板上转化子连续培养5代后,hph基因仍能稳定遗传,这表明T-DNA已经插入到异角状拟盘多毛孢菌的基因组中。此次建立的异角状拟盘多毛孢菌的转化体系可为该病菌的功能基因研究和寄主与病原菌的互作研究提供有效的工具。     

提高农杆菌介导小麦遗传转化效率的几个因素

利用gua基因的瞬时表达研究了农杆菌介导的小麦遗传转化,探讨了影响转化效率的几个因素．结果发现,当转化时茵液浓度的OD600为1．0、侵染时间为1h、超声波处理30s、共培养期间使用抗氧化剂以及用胚性愈伤组织作为外植体等,均可使转化效率得到明显提高、综合使用这些优化的转化条件,可使小麦的瞬时转化效率提高3倍多．     

发根农杆菌A4对荞麦的遗传转化

用发根农杆菌Ａ４对荞麦的下胚轴和子叶进行离体转化,得到ＲｉＴ－ＤＮＡ表达的发状根。不同的培养环境对发状根的和生长有一定的影响,表现为发状根在液体培养基上比在固体培养基上生长更为迅速,且在培养基中含一定浓度的Ｃｕ＾２＋有助于发状根的形成。     

农杆菌介导的玉米遗传转化进展

本文回顾了根瘤农杆菌的玉米遗传转化的发展历史 .对各种影响农杆菌转化玉米效率的关键因子包括农杆菌的菌株与载体 ,受体材料的基因型和发育程度 ,培养环境 ,培养基成分等因素进行了综述 .对发展现状和未来趋势做了讨论 .     

Gene flow from transgenic oilseed rape (Brassica napus L.) to cruciferous weeds under mentor pollen inducement

The alien gene flow between genetically modified glyphosate-resistant rapeseed variety Q3 (Brassica napus L.) and four cruciferous weeds was studied under mentor pollen inducement. The results showed that when Thlaspi arvense L., Capsella bursa-pastoris (L.) Medic, Cardamine hirsute L. and Rorippa palustris (L.) Besser were pollinated with mentor pollen, the mixed Q3 and the weed, pollen grains aggregated largely and germinated quickly, and the numbers of pollen tubes penetrating into the style and the ovary were greatly increased as compared with corresponding self-pollination groups. Twenty four to forty eight hours after pollination, several pollen tubes were observed to penetrate into the ovule via micropyle in each mentor combination. However, when the mentor progenies were analyzed by PCR, all of them showed negative for the Q3 herbicide-resistant gene. Collectively, these results indicated that crossing between T. arvense, C. bursa-pastoris, C. hirsuta, R. palustris (as female) and Q3 (as male) was highly incompatible and the herbicide-resistant gene could not flow from Q3 to these four weeds.     

Gene flow from transgenic oilseed rape (Brassica napus L.) to cruciferous weeds under mentor pollen inducement

The alien gene flow between genetically modified glyphosate-resistant rapeseed variety Q3 (Brassica napus L.) and four cruciferous weeds was studied under mentor pollen inducement. The results showed that when Thlaspi arvense L., Capsella bursa-pastoris (L.) Medic, Cardamine hirsute L. and Rorippa palustris (L.) Besser were pollinated with mentor pollen, the mixed Q3 and the weed, pollen grains aggregated largely and germinated quickly, and the numbers of pollen tubes penetrating into the style and the ovary were greatly increased as compared with corresponding self-pollination groups. Twenty four to forty eight hours after pollination, several pollen tubes were observed to penetrate into the ovule via micropyle in each mentor combination. However, when the mentor progenies were analyzed by PCR, all of them showed negative for the Q3 herbicide-resistant gene. Collectively, these results indicated that crossing between T. arvense, C. bursa-pastoris, C. hirsuta, R. palustris (as female) and Q3 (as male) was highly incompatible and the herbicide-resistant gene could not flow from Q3 to these four weeds.     

甘蓝型油菜BnFAD8基因编码序列的克隆和表达谱分析

通过比对拟南芥等同源基因,克隆了甘蓝型油菜FAD8基因中的保守序列.以得到的FAD8（Fatty Acid Desaturase 8）保守序列片段为信息探针,在GenBank的EST数据库中检索高度同源的EST,并通过人工拼接及RTPCR得到油菜该基因的全长为1299 bp的cDNA序列,命名为BnFAD8.序列分析结果中发现该基因符合质体定位的ω3脂肪酸脱饱和酶序列特征.通过比较22 ℃和8 ℃处理的甘蓝型油菜的BnFAD8基因表达谱,发现该基因在常温下仅存在痕量表达;而在低温条件下在叶中表达出现     

根癌农杆菌介导的木霉插入转化及其应用

根癌农杆菌介导的遗传转化法(ATMT)已广泛地应用于真菌的转化研究,该方法具有操作简单、转化效率高和转化子遗传稳定等特点。木霉作为土传植物病原菌的重要生防真菌,对其生防分子作用机制方面的研究也越来越受到关注,目前所面临的问题是如何基因突变和基因替换。ATMT法为木霉(Trichodermaspp.)的分子生物学研究提供了一个强有力的工具,在木霉的插入突变、遗传转化以及基因标记和克隆方面起着重要的作用。本文综述了根癌农杆菌介导木霉遗传转化的原理、特点、转化方法和应用,并且对有关发展趋势进行了展望。     

根癌农杆菌介导大麦Mlo反义基因转化小麦

应用含有大麦Mlo反义基因表达载体的根癌农杆菌菌株Agl Ⅰ,对3种基因型小麦(核生3号、烟优361、扬麦158)的愈伤组织进行了转化．从其中2种基因型获得23株转基因植株,有2株是白化苗,转化频率分别为1．9％(核生3号)和2．8％(扬麦158)．PCR及Southem分析表明,外源基因已整合进植物基因组．实验结果表明,筛选压力的存在对转基因植株的获得至关重要,在无筛选压力下未获得转基因植株．7棵转基因植株移栽至大田后正常结实．