农杆菌介导的中国水仙遗传转化体系的建立

利用根癌农杆菌介导法将GUS基因导入中国水仙,组织化学法检测转化后共培养3d的水仙鳞茎盘组织块,GUS基因瞬时表达很好,90％以上的材料呈现大面积的蓝色斑块,取筛选培养20d的材料检测GUS基因的稳定表达,约1％的组织块有蓝色反应。水仙预培养10d后转化,转化前在菌液中加入60μmol/L AS活化2－3h,转化率提高了两倍以上。转化材料在MS＋BA10＋NAA0．2＋Cef300＋Gyg30培养基上培养20d左右分化出小鳞芽,频率约为60％,组织块平均出芽5．7个,最多可达14个,小鳞芽10d后长成小鳞茎。     

农杆菌介导的大豆遗传转化

大豆遗传转化的方法很多，其中最常用的是农杆菌介导法。对近年来利用农杆菌法进行大豆遗传转化的外源基因种类、研究进展和存在问题做了全面阐述。     

农杆菌介导的唐菖蒲遗传转化体系的建立

在唐菖蒲‘Advanced Red’胚性愈伤组织受体系统的基础上,建立其遗传转化体系。采用根癌农杆菌（GV3101）介导法,研究了侵染液浓度、侵染时间、乙酰丁香酮（AS）浓度、负压和筛选方式等因子对唐菖蒲遗传转化效率的影响。结果表明：在遗传转化过程中,不经预培养,负压处理下,农杆菌菌液OD600为0.6～0.8,侵染时间15～20min,添加100μmol/L AS,共培养3d,可获得较高的遗传转化效率。经过3～4个月选择培养,部分抗性植株经PCR和Southern杂交检测表明,目的基因gus已整合到唐菖蒲基因组中。     

农杆菌介导的小麦遗传转化条件的研究

利用来自小麦花药,幼胚愈伤组织和带有ＧＵＳ基因的Ｔｉ质粒,对农杆菌转化小麦的条件进行了初步研究,证实适当浓度的乙酰丁香酮是诱发Ｔ－ＤＮＡ转移的必要条件,其最低有效浓度为５０μｍｏｌ／Ｌ。     

农杆菌介导GNA基因对水稻的遗传转化

在ｐＣＡＭＢＩＡ３３００质粒中插入带有ＲＳｓ－１启动子的ＧＮＡ基因,并利用农杆菌介导的遗传转化将其导入水稻的微不定芽受体,得到了再生植株。ＰＣＲ,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ的检测结果初步证明ＧＮＡ基因已经整合到水稻的基因组中并得到表达。     

农杆菌介导川芎遗传转化体系的初步研究

本文优化了农杆菌介导的影响川芎遗传转化的相关因素较优的转化条件为: 以叶柄作为转化材料, 菌液浓度OD600为0.3, 侵染时间为15 min, 乙酰丁香酮(AS)的浓度为50μmol/L及共培养时间为2d, 并可得到最大瞬时表达率为76.7%.将共培养后的叶柄用含头孢霉素300mg/L的无菌水洗三次, 每次10min, 再将外植体转移至含Kan 50mg/L, Cef 300mg/L的筛选培养基上诱导愈伤组织, 可得到最大阳性愈伤诱导率为26.7%.     

农杆菌介导的玉米遗传转化进展

本文回顾了根瘤农杆菌的玉米遗传转化的发展历史 .对各种影响农杆菌转化玉米效率的关键因子包括农杆菌的菌株与载体 ,受体材料的基因型和发育程度 ,培养环境 ,培养基成分等因素进行了综述 .对发展现状和未来趋势做了讨论 .     

农杆菌介导法的植物遗传转化

农杆菌介导的基因转化是一种使外源DNA转移到目的植株的天然系统,通过植物表达载体上DNA的加工与转移将外源DNA转运到植物细胞中。因其具有易操作、低费用、高效率、插入片段确定性好和转基因拷贝数低等独特优点,已经成为转基因策略中的首选方法,在植物的遗传转化中得到广泛应用。     

农杆菌介导禾本科牧草遗传转化的研究进展

建立禾本科牧草的遗传转化体系对于种质资源利用具有重要意义.近年来,假俭草(Eremochloa ophiuroides)、黑麦草(Lolium perenne)、结缕草(Zoysia japonica)、柳枝稷(Panicum virgatum)、高羊茅(Festuca elata)、二穗短柄草(Brachypodiu...     

农杆菌介导的真菌遗传转化及其应用

农杆菌介导的真菌遗传转化具有效率高,成本低,操作方便和重复性好等特点,大大提高了真菌的转化效率,增加了转化子的稳定性,为研究真菌基因功能,分离克隆相关基因提供了新的途径。     

农杆菌介导抗虫基因转化芥菜型油菜的研究

用农杆菌介导法对芥菜型油菜进行了转化，并对影响根癌农杆菌转化效率的因素进行了研究，建立了以油菜子叶柄为外植体的转化体系．用携带蝎毒素(BmKITs)和几丁质酶(chi)双价基因的农杆菌转化油菜，共获得了抗卡那霉素的再生苗153株，移栽成活21株．对成活植株进行了PCR分子检测，证实有外源基因的整合．转基因植株形态正常，开花、结实．     

根癌农杆菌介导AtNHX1基因转化小麦

利用根癌农杆菌对 3种基因型小麦进行了转化研究 .发现基因型对转化有明显影响 .将小麦品种烟优 36 1、烟 10 3、核生 3号的胚性愈伤组织用含报告基因NPTⅡ和抗盐基因Na H 反向转运AtNHX1的农杆菌菌株pROK2AT GV310 1感染和共培养后 ,用巴龙霉素 5 0 - 15 0mg L筛选抗性愈伤组织及转化植株 .对抗性植株的总DNA用AtNHX1基因的特异引物进行PCR检测 ,目的基因的PCR阳性频率为 1.3(烟 10 3)和 2 .9% (核生 3号 ) .Southern杂交证实外源基因已经整合到小麦的基因组中     

用LBA4404／pcAMBIA系列转化水稻的最佳条件

用带有ｇｕｓ报告基因的农杆菌ＬＢＡ４４０４／ｐＣＡＭＢＩＡ１３０１转化水稻品种鄂宜１０５成熟胚诱导的愈伤组织,以ｇｕｓ基因瞬间表达活性为指标测定转化率频率,对于利用ｐＣＡＭＢＩＡ表达载体系列进行水稻遗传转化的最佳条件进行了初步的研究。结果表明：最适菌液浓度值为Ｄ（６００）＝１．０,最适共培养温度为２２－２８℃;共培养培养基的ｐＨ值为５．２－６．２这一较宽的范围内均可。     

人角质细胞生长因子基因转化水稻的初探

角质细胞生长因子（Keratinocyte growth factor，KGF）在组织的损伤修复中起着重要的作用．在植物里面表达高活性的KGF具有成本低、易开发的优点．本实验将人角质细胞生长因子基因经农杆菌介导转入水稻中，获得110株再生植株．对再生植株进行GUS检测发现有44．7％植株呈阳性，PCR检测的结果也显示有52．6％的植株为阳性植株．     

乙酰丁香酮对根癌农杆菌介导的甘薯遗传转化的影响

研究了乙酰丁香酮 (AS)对根癌农杆菌介导的甘薯离体遗传转化的影响 .结果表明 :①菌液中加入AS不利于遗传转化 ;②AS的作用效果与培养基的 pH值有关 .培养基的 pH值为 5 8时 ,加入AS不能提高转化频率 ;而pH值为 5 2时 ,加入AS则能显著提高转化频率 ,特别是AS浓度为 2 5mg·L-1时 ,Kanr 芽获得率提高到 35 7%;③茎段外植体切口两端各滴加 2 μL 2 0 0 μmolL-1的AS ,可使Kanr 芽获得率达 13 3%.     

RAPD鉴定远缘杂交牧草蔗新品系94-42

应用RAPD技术对远缘杂交牧草蔗新品系94—42，父本PT43—52及母本甘蔗栽培良种C0419进行分子鉴定．67个引物共扩增出284条带，其中l16条为多态性带，占40．85％．计算相似性系数，并对3个品种进行亲缘关系的分析，结果分别为：新品系和母本：0．9138；新品系和父本：0．8009；父本和母本：0．7658．RAPD结果证明，牧草蔗94—42基因组出现多态性，具有父、母本特异DNA带，是两者远缘杂交的后代．提示RAPD技术是一种适合远缘杂交物种分子鉴定的有效方法．