无孔单分散亲水性树脂的合成及其在生物大分子分离中的应用

建立了一务从分散聚合法制备种子到一步种子溶胀聚合法制备粒径5．0μm的无孔单分散亲水性交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂的新方法，对其表面用新的化学方法改性后得到一种新型的弱阳离子交换色谱填料．实验考察了流动相的流速及有机溶荆等对蛋白质保留的影响．结果表明，该填料具有良好的色谱性能，在流速为5mL／min时种蛋白可在3min内达到基线分离，将其应用于鸡蛋清中溶菌酶的快速分离纯化，取得了较好的效果．     

硅胶基质聚天冬氨酸固定相的合成及对多肽的分离

硅胶基质聚天冬氨酸固定相是一类典型的弱阳离子交换色谱填料，对多肽、蛋白质等生物大分子表现良好的分离性能，受到研究者的极大关注。本文分别将不同分子量的聚琥珀酰亚胺(PSI)化学键合到氨丙基硅胶表面得到四种键合聚天冬氨酸的固定相材料(即YCSiP-I、-II、-III和-IV)，采用红外光谱、热重分析和zeta电位测定等方法进行表征，研究硅胶孔径、PSI的分子量、流动相pH值和离子强度等因素对分离多肽的影响。结果表明，红外光谱中3072、1720和1030 cm-1等处吸收峰分别对应为?N-H、?C=O和?Si-O-Si的伸缩振动峰，说明聚琥珀酰亚胺结合到硅胶上；YCSiP分离多肽主要受底物与固定相间的静电作用影响；由小孔径的硅胶和低分子量的聚琥珀酰亚胺制备得到的固定相YCSiP对多肽表现更好的分离性能；随着流动相的离子强度增大，多肽在柱上的保留均显著减弱，在离子强度为50 mM的流动相中，6种多肽在固定相上的分离效果最好。本研究丰富了硅胶基质聚天冬氨酸固定相材料在多肽分离中的应用。     

离子色谱中阳离子保留行为的研究进展

本文主要论述了离子色谱中阳离子的保留行为,分别论述了阳离子在强酸型阳离子交换树脂柱上、弱酸型阳离子交换树脂柱上、硅胶柱上、螯合离子交换树脂柱上的保留行为,以及淋洗液的种类、浓度、pH值和改进剂的添加对阳离子保留行为的影响,结果发现不同溶质在同一色谱柱上的保留行为不同,即使同一溶质在不同固定相上的保留行为也不同.     

固定化锌螯合物亲合色谱填料的合成及其色谱行为

以大孔微球硅胶基质，用两种方法合成了高效锌离子螯合亲合色谱填料。第一种是将硅胶经γ－缩甘油丙基三甲氧基硅烷活化后与亚氨基二乙酸键合；第二种是先将γ－缩甘油丙基三甲氧基硅烷与亚氨基二乙酸反应，再键合到硅胶上，然后与了子螯合，得到锌离子螯合物亲合色谱填料。对这两种填料的性质和色谱行为进行了研究。从对标准蛋白分离的结果来看，以第二种合成路线为佳。     

MMA-EDMA聚合物微球型和包覆硅胶型填料的制备与色谱性能

以Methyl methacrylate(MMA)和Ethylene dimethacrylate(EDMA)作为单体制备了多孔聚合物微球型(PG)和硅胶基质聚合物包覆型填料(PCSG).经电子显微镜、元素分析、尺寸排阻色谱和反相液相色谱对多孔聚合物微球粒径、硅胶基质聚合物包覆程度、交联剂添加对填料微孔构造的影响、非极性和极性化合物的色谱保留行为进行了评价和讨论.结果显示:PG和PCSG填料制备过程中形成了与C18填料不同的微孔结构;PG填料的大微孔体积Vb最大,PCSG填料小微孔体积Va最大.PG和PCSG填料的小微孔体积Va的不同导致填料表面具有相同的MMA高分子链却表现出不同的疏水性能;大微孔体积Vb的存在使填料对大体积芳香族化合物分离表现出了与C18填料不同的立体选择性.PG和PCSG填料因其表面残留有相同的MMA高分子链,使其对极性芳香族化合物表现出了相似的色谱保留行为.PCSG填料的柱效能介于C18和PG填料之间.     

氧化石墨烯修饰硅胶液相色谱填料的制备及色谱性能研究

通过层层自组装技术将石墨烯(GO)修饰到硅胶(SiO_2)表面组装10次后,制备了氧化石墨烯修饰硅胶色谱填料(GO/SiO_2—10)。表面分析、元素分析和接触角分析均证实了氧化石墨烯被成功修饰到了硅胶表面。采用多环芳烃(PAHs)、不同取代基芳香化合物、有机酸和有机胺考察了填料的反相色谱分离性能。结果表明,PAHs和填料之间表现出π-π相互作用fAHs的保留时间和色谱峰宽随着PAHs共轭结构的增大而增加;在仅用水做流动相条件下,不同取代基芳香化合物就可以在该填料上得到很好地分离;流动相的pH值对有机酸的分离有很大影响,调节流动相pH值,可以实现对有机酸的良好分离;有机胺和填料之间存在着电荷及π-π相互作用在流动相中加入洗脱盐可以实现有机胺的良好分离。采用中性化合物和酚类化合物考察了该填料的正相色谱分离性能,中性化合物能在该填料上分离性能好并且出峰顺序和中性化合物的π-电子体系的大小一致;由于GO/SiO_2—10表面的羟基和羧基,该填料对酚类化合物也具有非常好的分离性能。该研究对于表面活性剂的分离和检査具有一定的实际应用价值。     

基于大肠杆菌蛋白质质谱鉴定的阳离子交换色谱优化研究

以大肠杆菌蛋白质的胰蛋白酶切产物为研究对象,对蛋白质的提取效率进行初步探讨,重点是对多维色谱分离中常用的强阳离子交换色谱的分离条件,包括缓冲液的种类、pH值,洗脱盐的种类、有机溶剂的比例以及上样量进行了考察和比较.结果表明:功率为400W,超声时间为15min,蛋白质的提取效率达到最高.在强阳离子交换色谱分离线性上样量范围内,10mmol/L磷酸二氢钾(pH=3.0)作为缓冲体系,在氯化钾溶液作为洗脱盐、流动相中乙腈的体积分数为30%的条件下进行梯度洗脱时,可获得最佳的分离结果.     

离子交换色谱法分离测定磷霉素的研究

分别采用全多孔型硅胶基键合强阴离子交换柱与氨丙基键合硅胶柱，在低波长２０ｎｍ处检测，分离测定了磷霉素。探讨了流动相条件，如ｐＨ值，离子强度等对磷霉素保留及分离选择性的影响、优化分离条件，建立了一种测定磷霉素的高铲液相色谱新方法，方法简便，快速。     

一种新型两性离子交换毛细管液相色谱整体柱

利用甲基丙烯酸和2-二甲基乙基胺甲基丙烯酸酯为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,通过在石英毛细管内原位聚合制备了1种新型两性离子交换液相色谱整体(MAA-EDMA-DAMA)柱.整体固定相表面正、负电荷密度受流动相pH影响,故通过调节流动相pH值可实现阴阳离子交换模式相互转换.当流动相pH6.0时,此整体柱表现出典型阴离子交换作用机理,聚合整体柱对一些无机阴离子如BrO3-、NO2-、Br-和NO3-有很好的选择性;当流动相pH7.0时,该整体柱表现出阳离子交换作用机理,对对甲苯胺、邻苯二胺、对氯苯胺、对硝基苯胺表现出高的选择性;当流动相中乙腈含量小于40%时,疏水作用和离子交换作用对有机离子的保留均有影响,为提高分离的选择性创造有利条件.     

Xtimate SEC色谱柱

月旭Xtimate SEC色谱柱是月旭材料科技（上海）有限公司自主研发的一款产品，填充的填料为高纯度、具有良好化学稳定性的硅胶微球。该填料采用独特的化学键合技术，其亲水性聚合物完全包覆在硅胶微球表面，使得水溶性聚合物、蛋白、生物酶、多肽等生物样品非特异性吸附大大降低，并且其填料键合亲水性二醇基基团确保了硅胶表面不与蛋白、生物酶、多肽等生物样品相互作用。该填料粒径目前有从1．8um以10um的各种规格，能够获得优异的体积排阻色谱性能。     

Fast separation of intact proteins with high resolution under high sample loading using non-porous RPLC packings

A new approach for separation of intact proteins with high resolution, high speed and high sample loading (three highs) by non-porous packings in high performance liquid chromatography is presented.A chromatographic cake having larger diameter than its thickness is firstly employed to completely separate 1.0 and 40 μg of the mixture of 7 standard proteins within 1 min un-der conventional chromatographic conditions.Also, 0.5 mg of the mixture was almost completely separated within 1 min, accom-plishing the t...     

基于非对称流场流分离技术的蛋白分离研究

通过对肌红蛋白和牛血清白蛋白混合蛋白样品分离,研究了非对称流场流分离技术(AF4)分离蛋白时需要优化的参数及各个参数对分离效果的影响。首先应用正交设计实验考察样品进样量、横向流速、进检测器流速、聚焦时间对分离效果的影响,得到最大影响因素为横向流速,最优分离条件为:样品进样量20μL、横向流速5mL/min、进检测器流速0.2mL/min、聚焦时间6min。经验证此最优分离条件下分离度达到2.5。随后在最优分离条件下分别考察膜材料、缓冲盐浓度、分离腔室厚度对非对称流场流分离效果的影响。结果表明,截留膜选用再生纤维素膜,流动相缓冲盐浓度为20mmol/L时,满足非对称流场流分离技术分离蛋白样品的分离要求,随着腔室厚度的提高,分离度进一步增大。     

离子交换树脂法分离钨中微量钼—D401树脂分离效果的研究

本文采用D401大孔螯合形阳离子交换树脂,对钨中微量钼的分离效果进行了研究。提出了最佳实验条件和方法,以硫酸胫为还原剂,料液浓度32gWO_3/1,湿树脂6ml,在PH=3时,以流速0.8ml/min进行二次交换,其流出液Mo/WO_3比值,可由0.0117％下降至0.0034％。     

荷叶碱的分离纯化与HPLC检测

以荷叶为原料,研究了提取方法、提取溶剂的种类、浓度、pH、提取温度等对荷叶碱提取率的影响。采用强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂、HPD-100大孔吸附树脂和硅胶柱层析的方法对荷叶碱进行了分离纯化,并用TLC法、紫外光谱法、红外光谱法以及高效液相色谱法对实验结果进行了检测。结果表明,pH为2.0的50%乙醇水浴回流法适于荷叶碱的提取,阳离子交换树脂和硅胶柱层析组合技术可分离纯化得到纯度为94.15%的荷叶碱。     

液相色谱测定水样中的氧氟沙星手性对映体

利用大赛路（CHIRALCEL OD-H）手性柱对氧氟沙星对映体进行分离,考察了在流动相组分、流动相添加剂和流速对手性分离的影响。结果表明,V_正己烷∶V_乙醇∶V_乙酸＝80∶20∶0.5的流动相能够使氧氟沙星得到较好的分离,左氧氟沙星和右氧氟沙星的质量浓度在0.25～5.00μg/mL范围内线性关系良好（r²=0.9997）。实际水样中该方法的最低检出限左氧氟沙星为0.28μg/L、右氧氟沙星为0.10μg/L,最低定量限左氧氟沙星为0.36μg/L、右氧氟沙星为0.21μg/L。氧氟沙星的两组浓度加标平均回收率左氧氟沙星90.1%和88.6%、右氧氟沙星为87.6%和85.4%,左氧氟沙星的相对标准偏差（RSD）为5.2%、6.4%,右氧氟沙星的RSD为4.8%、7.6%（n=3）。     

基于LC-MS/MS策略建立十字花科黑腐病菌蛋白质表达谱的方法研究

【目的】建立十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)的蛋白质组学研究平台,用于分离、鉴定该菌的致病相关蛋白质。【方法】Xcc 8004经过液体培养,分别提取胞内蛋白质和胞外蛋白质,对所有蛋白质进行液体酶解,通过强阳离子交换色谱预分离多肽混合物,预分离后的馏分采用EASY-nLC结合LTQ-Orbitrap质谱鉴定蛋白质表达谱。【结果】建立了基于bottom-up策略的蛋白质组鉴定方法,采用第一维离子交换预分离和第二维反相色谱分离结合,实现了高通量鉴定蛋白质组表达谱的技术体系。通过SEQUEST检索,在胞内蛋白质样品中共鉴定蛋白质数目为1595个,胞外蛋白质样品共鉴定蛋白质数目为1241个。【结论】建立的LC-MS/MS方法适合用于十字花科黑腐病菌蛋白质组学的研究,为研究微生物植物相互作用奠定了方法与理论基础。     

烯丙基碳硅烷枝状分子的官能化

通过硅氢化加成及还原反应,将四烯丙基硅烷（G₀）官能化,制备端基为4个Si—H键的碳硅烷枝状分子。考察不同的催化剂、溶剂、投料方式及温度对官能化反应的影响,以及不同的流动相、床层体积及流速对硅胶柱层析分离效果的影响,并通过高效液相色谱（HPLC）、红外光谱（IR）和核磁共振氯谱（¹H-NMR）对分离产物进行表征。结果表明:采用H₂PlCl₆-C₃H₇OH为催化剂,四氢呋喃为溶剂,溶液式投料,滴加温度和后续反应温度已控制在0和35℃的条件下,制备端基为4个Si—H键的碳硅烷枝状分子,采用石油醚为洗脱剂,在床层为φ2.5 cm×35 cm,流速为2.0mL/min硅胶柱中对其进行分离纯化,总收率达到70.5%:经鉴定,产物结构完整,与理论结构相符合。     

蒽环类碱性药物在亲水作用色谱中保留机理的研究

采用以高纯硅胶为色谱柱,水-有机溶剂为流动相的亲水作用色谱模式,通过改变流动相中有机溶剂类型及浓度、酸类型、缓冲液pH值及离子强度,探讨了蒽环类碱性药物在该色谱模式下的保留机理.结果表明,在所考察条件下,溶质的保留机理主要为吸附及离子交换混合保留机理.     

苦丁茶主物质提取及其HPLC指纹图谱分析

通过对苦丁茶成分的提取方式和条件初步优化,选取最优的色谱分离条件,运用高效液相色谱技术(HPLC),针对4个不同产地的10个批次苦丁茶建立指纹图谱.从图谱中所含主成分的种类和化学成分的提取率选择超声提取的方式,确定75％的乙醇为提取溶剂和30 min的超声时间.在对HPLC条件的优化过程中,根据最终实验结果的优越性选择...     

高效液相色谱分析葡萄糖和山梨醇的研究

报道高效液相色谱分析葡萄糖和山梨醇的方法。固定相采用大孔阳离子我树脂柱,流动相为二次蒸馏水,流速０．８ｍＬ／ｍｉｎ,柱温为室温,在山梨醇的研究中,对葡萄糖加氢原后生成山梨醇的混合液进行分离测定,分离达到定量分析的要求,测试结果比较满意。