棘孢小单孢菌F-212种子移种期的控制及其对庆大霉素生物合成的影响

本文探讨了庆大霉素生产菌棘孢小单孢茼F-212的一级和二级种子的不同生长阶段的菌丝形态及其控制方法,以作为提高庆大霉素发酵单位的工艺手段。     

棘孢小单孢突变株原生质体制备及再生

以棘孢小单孢突变株（Ｍｉｃｒｏｎｏｚｐｏｒａ ｅｃｈｉｎｏｚｐｏｒａ ＪＩＭ－４０１）为出发菌株,进行原生质体制备及再生条件的研究,结合ＵＶ照射及高能电子流诱变,筛选出ＭＳ－１１６菌株,３０吨发酵罐试验,其Ｃ２ｂ组分达８５．６％。     

提高庆大霉素产生菌F-212孢子萌发率的研究

本文研究了三十一种孢子萌发因子对庆大霉素产生菌棘孢小单孢菌F—212的孢子萌发率和芽长的影响。分别进行了单因子、双因子及四因子试验,并通过正交试验找出了促进孢子萌发的最适剂量组合,为进一步提高庆大霉素发酵水平创造了条件。     

庆大霉素生物合成关键酶基因在E.coli中的克隆与表达

从庆大霉素产生菌?棘孢小单孢菌基因组中扩增出参与庆大霉素生物合成的关键酶基因——2-脱氧青蟹肌糖合成酶基因GntB,将其分别克隆到克隆载体pBS-T和表达载体pET-22b(+)上,并将pET-gntB转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3),用IPTG诱导使GntB基因实现表达.GntB基因大小为1 193 bp,其编码的氨基酸含397个残基,约为42 kD的多肽链.     

小诺霉素产生菌棘孢小单孢菌的原生质体诱变育种

通过对菌株产量分布参数的统计学分析，棘抱小单孢菌７４＃被选作原生质体诱变育种的出发菌株．获得小诺霉素含量为８０％的高产突变株的概率以紫外线对原生质体悬液３０秒诱变处理为最高（２２．８％），５株高产突变株的小诺霉素组份与效价平均分别比出发菌株提高３３．３％与５１．２％．初步探讨了甘氨酸对原生质体化的作用机理以及原生质体诱变与再生处理提高小诺霉素产生菌生产能力的机理．     

庆大霉素生物合成基因genY的研究

以绛红色小单孢菌G1008基因组为模板,构建genY基因缺失的同源重组质粒pFY103,经接合转移导入绛红色小单孢菌G1008和GK1101(△genK),筛选获得genY基因缺失工程菌GY105(△genY)和工程菌GKY205(△genK+genY),发酵、提取并经质谱检测分析代谢产物.结果表明,工程菌GY105和GKY205主要积累西索米星、庆大霉素C1a和C2b.证明genY基因缺失阻断了庆大霉素X2到G418的转化,说明genY基因参与庆大霉素生物合成过程中绛红糖胺C-6’位甲基化.     

N-乙酰氨基葡萄糖对绛红小单孢菌合成庆大霉素的影响

研究了N-乙酰氨基葡萄糖对绛红小单孢菌产素的影响,实验探索了N-乙酰氨基葡萄糖添加工艺,在250mL摇瓶发酵过程中培养48h,60h分别添加0.05%,0.15%N-乙酰氨基葡萄糖可使庆大霉素生测效价达2 030U/mL,较对照1 228U/mL提高了65%以上(三次平均基本一致);5L发酵罐试产三批次发酵终结,生测效价平均为1 727U/mL(厡工艺1 097U/mL)提高了57%,效果十分明显.同时测定了发酵过程中菌体代谢各种参数的变化,证明了N-乙酰氨基葡萄糖在绛红小单孢菌生物合成中的促进作用.本方法操作简单,基本不改变原工艺,生产成本低廉,对提高庆大霉素产量效果非常明显.     

150株小单孢菌的分类及生物活性

对从承德地区土样中分离出来的150株放线菌进行了初步的分类研究,初步鉴定为小单孢菌属菌株.从中选出100株与3株小单孢菌属(Micromonospora)已知菌株进行生物活性的测定.通过测定发酵液的化学效价,筛选出2株庆大霉素效价高的野生型菌株,其中菌株80221的化学效价为983.58 mg/L,菌株80177的化学效价为1 076.88 mg/L.     

糖单孢菌属的一个新变种

作者从福建省福州市土壤中分离出一株能产生活性物质的稀有放线菌,编号3—50并进行了形态、培养特征和生理特性等方面研究。3—50气生菌丝上着生半个孢子,常形成穗状生长体。基内菌丝生长好,有时可见到横隔,产生单孢子。细胞壁含有内消旋二氨基庚二酸(meso—DAP)、半乳糖和阿拉伯糖,属细胞壁TV型,故属于糖单孢菌属。其形态、培养特征和生理特性与绿色糖单孢菌相似,但又有差别,是一个新变种,定名为绿色糖单孢菌福建变种(Saccharomonospora viridis var.Fujianensis Ruan).     

棘孢小单胞菌原生质体的融合育种

以小诺霉素（Ｍｉｃｒｏｎｏｍｉｃｉｎ,ＭＣＲ）产生棘孢小单胞菌（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｓｐｏｒａｅｃｈｉｎｏｓｐｏｒａ）为出发菌株,诱变筛选得到一株链霉素抗性菌株,抗性菌株的原生质体分别用紫外线照射和热处理致死,通过单亲致死原生质体融合,以链霉素为选择条件选出融合株,以摇瓶发酵并结合薄层层析扫描（Ｔｈｉｎ Ｌａｙｅｒ Ｃｈｒｏｍａｔｏ－ｇｒａｐｈｙ,ＴＬＣ）分析,筛得４株ＭＣＲ百分含量高于亲株的融合子,     

炭样小单孢菌JXNU-1产抗生素对G~-的体外抗菌作用及其机理的初步研究

基于土壤中分离到的一株具广谱抗菌活性的炭样小单孢菌JXNU-1,研究了JXNU-1所产抗生素对G-的体外抗菌作用.研究结果表明:炭样小单孢菌JXNU-1所产抗生素对产气肠杆菌、伤寒沙门氏菌、铜绿假单孢菌、福氏志贺氏菌等常见G-细菌均有抗菌作用,其最低杀菌浓度一般是最低抑菌浓度的8 ～16倍.杀菌曲线表明其对G-的杀菌作用非常快速,8h的杀菌率已超过90;.进一步的研究表明抗生素抗G-的作用机理在于抑制细菌蛋白质的合成,进而抑制细胞的分裂.     

庆大霉素高产菌株的抗性方法选育

以生产菌株绛红小单孢菌为出发株,应用N 离子注入及紫外线诱变技术,利用高浓度的庆大霉素梯度平板筛选,或配合含有高浓度庆大霉素的液体培养基的生态驯化,筛选到摇瓶效价分别比出发株提高75.2%和70.1%的N08和Wt63两个高产菌株,10 L发酵罐发酵产量分别达2 118 u/mL和1 843 u/mL,C组分含量符合中国药典2000版的规定.     

棘孢小单胞菌原生质体的融合育种

以小诺霉素（Ｍｉｃｒｏｎｏｍｉｃｉｎ,ＭＣＲ）产生棘孢小单胞菌（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｅｃｈｉｎｏｓｐｏｒａ）为出发菌株,诱变筛选得到一株链霉素抗性菌株,抗性菌株的原生质体分别用紫外线照射和热处理致死,通过单亲致死原生质体融合,以链霉素为选择条件选出融合株,经摇瓶发酵并结合薄层层析扫描（ＴｈｉｎＬａｙｅｒＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ,ＴＬＣ）分析,筛得４株ＭＣＲ百分含量高于亲株的融合子,ＭＣＲ百分含量达到９０％,效价１０７６ｕ／ｍｌ,分别比亲株提高１５％和１１％,     

一株主产庆大霉素C2a工程菌的构建

为更好生产单组分庆大霉素C2a,拟构建一株主产庆大霉素C2a的工程菌.通过序列比对分析,锁定genB2为构建该工程菌的关键基因.以绛红小单孢菌G1008基因组为模板,PCR扩增genB2的上下游序列为同源交换臂,构建同源重组质粒pZB303.通过接合转移,将质粒pZB303导入绛红小单孢菌G1008,安普抗性及PCR扩增筛选得到一株genB2框内缺失工程菌GB102.发酵并提取代谢产物,再经TLC,HPLC,MS分析.结果表明,工程菌GB102主要积累庆大霉素C2a.有望用于生产单组分庆大霉素C2a.     

发酵过程中小单孢菌40027及其衍生菌株的抑菌作用

研究了不同遗传背景下福堤霉素A的产生菌——小单孢菌40027菌株及整合了质粒pSET152菌株的抑菌作用.以金黄色葡萄球菌为指示菌跟踪不同时期小单孢菌40027菌株和Micromonospora sp. 40027::pSET152菌株的抑制活性.结果表明:小单孢菌40027菌株抑菌活性比Micromonospora sp .40027::pSET152的抑菌活性强;小单孢菌40027菌株和Micromonospora sp. 40027::pSET152菌株分别在种子液制备第1 d及第2 d时菌种产素能力较大.小单孢菌40027菌株和Micromonospora sp. 40027::pSET152菌株在发酵液制备第4 d为最佳产素时间.分别采用超声波法和反复冻融法破碎菌丝体,结果表明超声波破碎法较为理想,为进一步研究小单孢菌胞内产素情况打下了基础.     

褐色高温单孢菌PE-211产纤维素酶的酶学特性研究

对褐色高温单孢菌PE-211(Thermomomospora fuscd PE-211)形态学和生物学特征进行了研究,该菌适宜在pH8．0～10．0、55-60℃条件下生长．初步研究了该菌产生的纤维素酶(CMCase)的一些基本性质,结果表明．CMCase最适作用温度为75℃,最适作用pH为9．0,Ca^2 和Mn^2 对酶反应有促进作用,Pb^2 和Hg^2 时酶反应有抑制作用．这种酶制剂在洗涤剂工业中具有良好的应用前景．     

影响绛红色小单孢菌(Micromonospora Purpurea)S-1212孢子萌发的几个主要因子的研究

影响绛红色小单孢菌孢子同步萌发的因子有营养、p H、温度、密度、溶氧等 ,试验结果表明 :p H6 .7～ 6 .8、温度 36℃、孢子密度以 1× 1 0 9个 / ml为宜 ,溶氧及一些生长因子 ,特别是甘氨酸、缬氨酸、丝氨酸 ,对该菌孢子萌发也是相当重要的因子 .     

深海适冷假交替单孢菌Pseudoaltermonas sp.SM9913产适冷蛋白酶的条件优化

对深海适冷假交替单孢菌Pseudoaltermonas sp．SM9913适冷蛋白酶的发酵产酶条件进行了优化．研究结果表明，在发酵培养基中添加一定量柠檬酸钠有利于提高产酶；较难分解利用的氮源，如豆粕、豆粉，能诱导适冷蛋白酶合成，而较易吸收利用的氮源，如豆粕水解液、蛋白胨、尿素、铵盐等，对产酶有抑制作用；添加表面活性剂吐温80和SDS能促进酶向胞外的分泌；钙、镁离子促进产酶，锌、铜、铁离子对产酶有抑制作用；发酵产酶是好氧过程，装液量较少对产酶比较有利；发酵培养基初始pH7．0～8．0利于产酶．在优化后的发酵条件下，Pseudoaltermonas sp．SM9913产适冷蛋白酶量较原来提高了约65％，为适冷蛋白酶向着工业化生产应用提供了基础数据．     

三种抗生素对德国小蠊肠道菌去除效果的研究

利用稀释涂布法和PCR法评价了3种抗生素利福平、庆大霉素和青霉素在不同的浓度（50．0、100．0及200．0μg／m1）对德国小蠊肠道菌的去除效果．结果表明：德国小蠊肠道菌射庆大霉索和利福平敏感,对青霉素不敏感．在不影响德国小蠊正常生活的情况下,200．0ixg／ml浓度时,庆大霉索对德国小蠊肠道菌的去除效果最好,利福平次之,青霉素最差．本研究将为“无肠道菌”德国小蠊种群的建立以及虫体与肠道菌之间关系的进一步研究提供便利．     

黄孢原毛平革菌菌丝球对Pb2+的动态吸附及其洗脱

考察了黄孢原毛平革菌菌丝球对铅离子的动态吸附及其洗脱性能.实验结果表明,流速、温度、溶液pH值和初始浓度等因素对动态吸附有很大影响,饱和吸附量为20.19mg.g-1,比同样条件下的静态饱和吸附量(23.96mg.g-1)稍低.洗脱液流速和洗脱温度对洗脱速率有较大影响,洗脱率在90%以上(最高可达97.16%).