RSM优化蛹虫草菌产虫草素液体发酵培养基

文章采用响应曲面法(RSM)对蛹虫草液体发酵培养基成分葡萄糖、酵母粉、KH2PO4和MgSO4进行优化,并采用多元二次回归方程拟合4种因素与虫草素产量之间的函数关系。通过响应面回归分析,确定了培养基中4因素的最佳质量浓度分别为:葡萄糖30.16g/L,酵母粉10.00g/L,KH2PO42.040g/L,MgSO41.460g/L。在该条件下,响应面模型预测的虫草素产量为63.69mg/L,最佳培养基条件下的验证试验结果为64.15mg/L,与模型的预测值基本一致,表明模型可较好地预测虫草素的产量。     

蛹虫草液体的深层发酵

以菌丝体质量浓度(干重)和发酵液中甘露醇浓度为指标,研究温度、初始pH值、培养时间等因素对蛹虫草液体培养的影响,得到蛹虫草摇瓶液体培养的最佳温度为25.0℃,初始pH值为6.10,培养时间为5 d;蛹虫草液体发酵最适培养基的组成为:20 g/L蔗糖+5 g/L蛋白胨+1 g/L MgSO4.7H2O。在此基础上进行小型分批式发酵罐实验,研究有利于蛹虫草生长及活性物质生成的pH控制策略。研究结果表明,pH分段控制的液体深层发酵对蛹虫草生长最为有利,菌丝体质量浓度为17.31 g/L,甘露醇质量浓度达43.47 g/L。     

蛹虫草液体发酵条件的研究

通过单因子筛选和正交试验 ,对蛹虫草发酵条件进行研究 .试验结果表明 ,蛹虫草发酵的适宜培养基组成为 :蔗糖 5 .0 % ,玉米浆 3.0 % ,酵母膏 0 .5 % ,MgSO4 ·7H2 O 0 .0 5 % ,KH2 PO40 .0 5 % ;适宜的培养条件为 :发酵初始pH 7.0 ,发酵温度 2 5℃ ,发酵周期 6d .采用优化的培养基及适宜的培养条件进行摇瓶发酵 ,干菌体产量和生长速率分别可达 4 1.1g/L和 0 .2 8g/L·h .     

1株蛹虫草的液体发酵试验及蛹虫草多糖的提取

冬虫夏草是一种名贵的强壮滋补中药,但由于其严格的寄生性和特殊的生长地理环境,天然虫草资源越来越少,冬虫夏草的开发利用只有走人工培养之路.经研究蛹虫草的培养时间与菌丝体生产量的关系,虫草多糖的提取以及虫草多糖的测定,结果显示培养6d的菌丝产量最高,发酵时间对菌丝生长量的研究有重要意义,它可以控制大规模发酵生产大周期.多糖含量的测定用硫酸-苯酚法.经实验显示2次浸提比1次浸提的得率要高,摇瓶菌丝体的粗多糖得率为25.0%,精多糖得率为10.15%,均比已报道的虫草多糖得率高,这为人工控制大规模发酵生产大周期提供科学依据.     

蛹虫草纤溶酶液体发酵条件的优化

在发现蛹虫草具有纤溶酶活性的基础上,对蛹虫草产纤溶酶的液体发酵条件进行了优化,以期获得最佳的产酶条件。研究结果表明,蛹虫草纤溶酶的最优培养基组成是：以20 g/L可溶性淀粉为碳源,10 g/L酵母粉为氮源,Mg2＋浓度为7 mmol/L;最适发酵初始pH值为6;最适发酵时间为4 d。     

深凹杯伞液体发酵培养基的筛选

以菌丝生物量为指标,筛选出深凹杯伞液体发酵培养基的最佳碳源、氮源和培养基配方,根据实验结果,指出最佳碳源为葡萄糖和麸皮汁,最佳氮源为酵母膏,最佳培养基配方为葡萄糖占比3.0%,酵母膏占比0.5%,麸皮汁占比5.0%,植被浸出液占比15.0%,K2HPO4占比0.1%,KCl占比0.05%,NaNO3占比0.3%,FeSO4占比0.001%,pH值为7.0。     

蛹虫草菌丝液体发酵产纤溶酶的实验研究

通过对蛹虫草(Cordyceps militaris)菌丝液体发酵产纤溶酶的实验研究,获得了蛹虫草纤溶酶液体发酵的适宜参数.结果表明,蛹虫草菌丝液体发酵产纤溶酶的适宜碳源为玉米粉和蔗糖,豆饼粉和较高浓度的玉米浆(8%~12%)作为氮源是适宜的,培养基中适量添加Mg SO4(0.05%)、KH2PO4(0.1%)和Ca Cl2(0.05%)、Mn SO4(0.05%)等无机盐有利于蛹虫草纤溶酶产生;发酵p H值以4.5~5.5为宜,温度以22~24℃为宜,培养时间以6~7 d为宜.     

培养方式对蛹虫草液体发酵产核苷物质的影响

本文考察了蛹虫草CM3,08Y1菌株在通过光照振荡、光照静置、黑暗振荡、黑暗静置四种培养方式和添加前体物质(腺嘌呤1 g/L+甘氨酸16 g/L),发酵60 d后,发酵液内虫草素和腺嘌呤含量变化。结果表明:CM3菌株在静止培养及添加前体时虫草素的含量达2 541.06 mg/L,腺嘌呤利用率达99.79%;08Y1菌株在光照静止培养及添加前体时虫草素的含量达2 875.71 mg/L,腺嘌呤利用率达99.75%,这为蛹虫草高产虫草素提供了有效的方法,同时说明不同菌株在不同条件下,其代谢产物的量具有明显的差异。     

蛹虫草菌丝体液体培养条件研究

研究蛹虫草液体发酵条件,以干菌体得率为指标,通过单因素试验确定适宜的碳源、氮源、培养温度和pH值。结果表明,最适液体培养基为:葡萄糖20 g/L,蛋白胨5.0 g/L,最适pH=6.0,最适培养温度24℃。     

纳豆菌I液体发酵生产纳豆激酶最佳培养基的筛选

利用纳豆菌I液体发酵生产纳豆激酶。对影响生产纳豆激酶的培养基的成分——碳源、氮源、碳氮比以及4种盐浓度进行了筛选。结果表明:当蔗糖3%,蛋白胨2%,KH2PO40.1%,K2HPO40.25%,MgSO40.05%,CaCl20.01%时纳豆菌I产酶效果最佳。     

RP-HPLC定量检测蛹虫草培养基中活性成分

建立一种反向高效液相色谱法定量检测蛹虫草培养基中活性成分腺苷含量和虫草素含量的方法.色谱柱为Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相:0.02 mol/L KH2PO4∶甲醇(体积比85∶15)溶液;流速:1.0 mL/min;检测波长:260 nm.腺苷的线性测量范围为0.5~100μg/mL(R=0.999 9),平均回收率为105.3%,标准品RSD=0.76%(n=5),样品RSD=1.87%(n=5);虫草素的线性测量范围为0.5~100μg/mL(R=0.999 9),平均回收率为104.0%,标准品RSD=0.95%,样品RSD=1.23%.本测定方法线性范围宽、分离度好、具有良好精密度,可定量、准确分析不同蛹虫草培养基中活性成分腺苷和虫草素含量.     

香菇液体发酵培养基的优化

本文对香菇液体发酵培养基的成分配比进行了研究。在28℃、振荡频率为200r/min、发酵时间为130h、装液置为200ml的情况下,香菇液体发酵培养基营养配比为：蔗糖2%,磷酸二氢钾l%,硫酸镁0.15%,麦麸2%、豆饼粉5%。     

一株虫草类真菌的液体发酵产胞内多糖培养基的优化

采用液体发酵法培养虫草真菌菌丝体。以虫草真菌胞内多糖量为指标,通过单因素试验,表明玉米淀粉为最佳碳源,酵母粉为最佳氮源,酵母膏为最佳生物素,最适pH为7.0;正交试验表明最适虫草真菌产胞内多糖培养基配方为:玉米淀粉5%,酵母粉2%,酵母膏0.1%,KH2PO4 0.1%,MgSO4.7H2O 0.05%,pH 7.0。     

黑芝菌丝体液体培养基的筛选

以黑芝菌丝体生物量为主要指标,首先对不同碳源和氮源进行单因素初选试验,然后进行不同比例混合碳氮源正交试验.结果表明：黑芝菌丝体液体最佳培养基是蔗糖20 g/L、麦芽糖15 g/L、麦麸20 g/L、酵母粉1.5 g/L、KH2PO42 g/L、MgSO4·7H2O 1 g/L和VB16 mg/L,其菌丝体生物量产率为35 g/L.     

云芝菌液体发酵培养基的筛选

利用29个培养基配方,进行了云芝菌液体摇瓶发酵试验,考察了发酵菌粉的多糖质量分数和菌粉干质量。结果表明:以菌粉多糖质量分数不低于0.04,菌粉干质量不低于20 g/L为标准,最优培养基配方为黄豆饼粉20 g/L,葡萄糖30 g/L,玉米粉10 g/L,酵母膏5 g/L,Ca CO31.5 g/L,KH2PO41.0 g/L,Mg SO41.5 g/L,p H自然,多糖质量分数为0.049 4;菌体干质量为21.00 g/L。     

桑黄液体深层发酵培养基优化研究

以菌丝体生物量和多糖产量为主要指标,对桑黄(鲍氏层孔菌)的液体深层发酵培养基进行了优化,通过单因素试验筛选碳源、氮源,通过正交试验优化桑黄液体深层发酵的培养基。结果表明:蔗糖为最佳碳源,氯化铵为最佳氮源;最适培养基各成分的质量浓度为蔗糖70g/L、氯化铵10g/L、磷酸二氢钾0.5g/L、硫酸镁0.5g/L、氯化钠1g/L,pH值自然,以此条件发酵最大菌丝量为2.814g。在接种量5%、装液量50mL、28℃发酵过程中发现,发酵120h时桑黄菌丝体生成量最大,随后呈下降趋势;发酵液pH值随着发酵进程呈现明显下降,在120h后基本趋于稳定。     

蛹虫草液体培养联产胞外多糖与菌丝虫草素的实验研究

通过对蛹虫草(Cordyceps militaris)液体发酵产胞外多糖和菌丝虫草素的初步实验研究,获得了蛹虫草液体发酵联产胞外多糖和菌丝虫草素的适宜参数.研究结果表明,蛹虫草液体发酵联产胞外多糖和菌丝虫草素的较适宜的氮源是豆粕粉和6%~8%玉米浆粉;较适宜的碳源是玉米面;维生素B1添加量以10 mg/100 m L、微量元素锰添加量以0.01%Mn SO4为宜、培养基初始p H值以5.5为宜;培养温度22~24℃,接种量1%,培养基装量50 m L和5~7 d的培养时间有利于胞外多糖和菌丝虫草素的产生.     

蛹虫草的研究Ⅳ．蛹虫草与冬虫夏草化学成分比较

人工蛹虫草与野生冬虫夏草的子实体经测定分析，二者都含有蛋白质、糖、脂肪、多种无机元素和维生素、１８种氨基酸、虫草菌素、虫草酸、虫草多糖和ＳＯＤ等化学成分，在含量上基本相似，有些成分含量高于冬虫夏草．蛹虫草可以替代冬虫夏草食用或药用     

蛹虫草发酵产物新纤溶酶的分离纯化

笔者所在项目组的前期研究发现,蛹虫草深层培养可以产生至少两种纤溶酶.基于此,文中对蛹虫草深层培养产生的纤溶酶的分离纯化展开了研究.采用硫酸铵盐析、Sephadex G-25凝胶色谱、Phenyl-Sepharose HP疏水相互作用色谱、CM-Sepharose FF弱阳离子交换色谱和Superdex 75凝胶色谱对纤溶酶进行分离.最终纯化后的纤溶酶Ⅰ比活力达1467.44U/mg,纯化倍数为36.07,回收率为5.79%.纤溶酶Ⅱ比活力达1681.58U/mg,纯化倍数为41.33,回收率为4.00%.两种纤溶酶经电泳鉴定均达到电泳纯,相对分子质量分别约为28000和32000.     

蛹虫草的研究：IV.蛹虫草与冬虫夏草化学成分比较

人工蛹虫草与野生冬虫夏草的子实体经测定分析，二者都含有蛋白质、糖、脂肪、多种无机元素和维生素、１８种氨基酸、虫草菌素、虫草酸、虫草多糖和ＳＯＤ等化学成分，在含量上基本相似，有些成分含量高于冬虫夏草。蛹虫草可以替代冬虫夏草食用或药用。